磷酸萘酚喹在制备治疗病毒引起的疾病的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了磷酸萘酚喹在制备治疗病毒引起的疾病的药物中的应用，所述的病毒为冠状病毒，具体的包括SAS‑CoV、MERs‑CoV、HCoV‑229、HCoV‑OC43和2019‑nCoV,属于医药技术领域。

【技术实现步骤摘要】
磷酸萘酚喹在制备治疗病毒引起的疾病的药物中的应用
本专利技术涉及医药
，具体的涉及磷酸萘酚喹在用于制备治疗病毒引起的疾病的药物中的应用。
技术介绍
磷酸萘酚喹由国家军事科学院微生物流行病研究所研发，是继青蒿素类药物之后的一种抗疟药物。1993年，磷酸萘酚喹片在我国注册，获得中国卫生部颁发的一类新药证书。临床研究表明磷酸萘酚喹对各种疟原虫红细胞期内无性体均有较强的杀灭作用，是治疗恶性疟疾和间日疟的首选药物，而且具有很好的防治作用。冠状病毒在系统分类上属套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。冠状病毒属的病毒是具囊膜、基因组为线性单股正链的RNA病毒，是自然界广泛存在的一大类病毒。2019新型冠状病毒(2019-nCoV)是目前已知的第7种可以感染人的冠状病毒，其余6种分别是HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV(引发重症急性呼吸综合征)和MERS-CoV(引发中东呼吸综合征)。目前尚无针对2019-nCoV病原体的有效抗病毒药物，以隔离治疗、对症支持治疗为主。因此临床上急需抗2019-nCoV的药物上市。截至目前为止，未见磷酸萘酚喹用于制备治疗病毒引起的疾病的药物中应用的报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种磷酸萘酚喹的制药新用途。进一步的，本专利技术的目的是提供磷酸萘酚喹在制备治疗病毒引起的疾病的药物中的用途。进一步的，其中所述的病毒为冠状病毒。具体的来说，所述的冠状病毒包括SAS-CoV、MERs-CoV、HCoV-229、HCoV-OC43和2019-nCoV。磷酸萘酚喹为在我国已经获得批准上市的药物，其产品可以在市场中购得。本专利技术人在体外进行的病毒抑制试验结果表明，磷酸萘酚喹对2019-nCoV、HCoV-229和HCoV-OC43有很好的抑制作用，效果明显优于磷酸氯喹。以下通过实施例的的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1、磷酸萘酚喹对Vero细胞的细胞毒性的MTS测定结果。图2、磷酸氯喹对Vero细胞的细胞毒性的MTS测定结果。图3、磷酸萘酚喹在Vero细胞上抑制病毒感染的定量RT-PCR检测结果。图4、磷酸氯喹在Vero细胞上抑制病毒感染的定量RT-PCR检测结果。图5、药物在Vero细胞与病毒共处理后抑制病毒感染的定量RT-PCR检测结果。图6、药物在病毒进入Vero细胞前后抑制病毒感染的定量RT-PCR检测结果。具体实施方式实验例1磷酸萘酚喹体外抗2019-nCoV活性研究一建立2019-nCoV感染的VeroE6细胞(ATCC-1586)模型，分为磷酸萘酚喹组和磷酸氯喹组，采用RT-PCR法通过检测细胞上清液中病毒复制数量来判断药物对2019-nCoV的抑制活性(EC50)，结果见表1。表1磷酸萘酚喹对2019-nCoV病毒复制的抑制活性药物EC50磷酸萘酚喹组0.89μM磷酸氯喹组1.2μM表1结果表明，在2019-nCoV感染的VeroE6细胞模型上，磷酸氯喹对2019-nCoV的半数有效浓度EC50为1.2μM，；磷酸萘酚喹的EC50为0.89μM，说明磷酸萘酚喹对2019-nCoV的抑制活性明显优于磷酸氯喹，具有显著的统计学意义(P<0.05)。实验例2磷酸萘酚喹体外抗2019-nCoV活性研究二1实验目的研究磷酸萘酚喹在Vero细胞内对新型冠状病毒(2019-nCoVBetaCoV/Beijing/AMMS01/2020)的抑制作用，采用MTS法(Promega)测定磷酸萘酚喹药物的CC50；采取核酸定量法测定药物对新型冠状病毒(2019-nCoVBetaCoV/Beijing/AMMS01/2020)的抑制作用(EC50)。并以磷酸氯喹作为参考。2实验材料磷酸萘酚喹，四川自豪时代药业有限公司生产，批号170401；磷酸氯喹：Sigma公司产品，批号BCBJ1498V。Vero细胞购自美国标准生物品收藏中心(ATCC)，由军事医学研究院微生物流行病研究所病毒学研究室保存。新型冠状病毒北京分离株(2019-nCoVBetaCoV/Beijing/AMMS01/2020)由军事医学研究院微生物流行病研究所病毒学研究室分离并保存。其余实验耗材和仪器均可由市场自由购得。3实验方法(1)采用MTS法测定药物的CC50A、Vero细胞培养：在75cm2培养瓶中加入DMEM完全培养基12ml，于5％CO2、饱和湿度的细胞培养箱中37℃培养，3天传代一次。传代时移除旧培养基，用PBS洗细胞1次，加入2ml0.25％胰酶-EDTA在培养箱中消化3min。光学显微镜下观察到细胞变圆，弃去胰酶，然后加入9ml培养基终止消化，用移液管将细胞吹吸成单细胞，按1：3的比例取出细胞液加入新的培养瓶，再在新的培养瓶中补加新的培养基至12ml，混匀，于37℃、5％CO2、饱和湿度的细胞培养箱中继续培养。B、病毒扩大培养：实验前一天，将Vero细胞按1：3的比例接种至T75的培养瓶中，待细胞密度长至90％以上时供实验用。向T75培养瓶中加入MOI＝0.1的新型冠状病毒液，在37℃、5％CO2的培养箱中孵育1hr。向培养瓶中加入15mL2％FBS的DMEM培养基，在37℃、5％CO2的培养箱中培养3天。将病毒液收集至50mL离心管，在4℃离心机6000rpm离心10min，收集上清，分装并保存于-80℃。C、病毒TCID50测定：提前一天将Vero细胞以10000/孔浓度接种96孔板。用含2％FBS的DMEM培养基10倍梯度稀释病毒液(10-2～10-9)。将96孔板中的原细胞培养基吸弃，向96孔板中加入200μL/孔的病毒液，设4个复孔。于37℃、5％CO2细胞培养箱中孵育。每天观察细胞病变(CPE)，持续观察4天。用Reed-Muench法计算病毒半数感染剂量(TCID50)。D、药物细胞毒性试验：提前一天将Vero细胞以10000/孔浓度接种96孔板。待细胞长满单层，96孔板弃去培养液，加入含不同浓度药物，以3倍为稀释梯度将待测药物进行倍比稀释，共8个浓度)的2％FBSDMEM维持液100μL/孔，每个浓度测3个复孔。并设立培养液对照和正常细胞对照组。继续培养，每天观察细胞状态。加药后72小时，加入20μLMTS溶液，37℃，5％CO2条件孵育1小时，测定OD490值。采用公式计算药物对细胞毒性：最后，利用Graphpa本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.磷酸萘酚喹在制备治疗病毒引起的疾病的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
20200220 CN 20201010506581.磷酸萘酚喹在制备治疗病毒引起的疾病的药物中的应用。


2.根据权利要求1所述的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘忠荣，白红艳，叶兵，余建红，周武春，鲍锐，
申请(专利权)人：成都自豪药业有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51