ZC3H12b基因或蛋白的用途及一种肝脏疾病动物模型的建立方法技术

本发明专利技术涉及ZC3H12b基因或蛋白的用途及一种肝脏疾病动物模型的建立方法。本发明专利技术利用基因编辑技术，靶向敲除青鳉的zc3h12b基因，建立了缺失Zc3h12b蛋白产物的青鳉，均表现出不同程度的肝胆管增生融合和肝细胞脂肪变性，纤维化等肝脏病变，并伴随着月龄增长呈现显著脂肪肝，且局部囊肿坏死，其肝窦有明显的淋巴细胞浸润，巨噬细胞数目异常增多，还检测到人肿瘤标志物CK19，SMA和GPC3阳性的细胞，提示ZC3H12b可作为肝内胆管囊腺瘤、肝内胆管囊腺癌或与它们相关的脂肪肝或肝癌的治疗靶标和生物标志物，本发明专利技术的zc3h12b缺失青鳉可作为研究肝内胆管囊腺瘤、肝内胆管囊腺癌或两者病变过程的动物模型。变过程的动物模型。变过程的动物模型。

Application of zc3h12b gene or protein and establishment of an animal model of liver disease

【技术实现步骤摘要】
ZC3H12b基因或蛋白的用途及一种肝脏疾病动物模型的建立方法


[0001]本专利技术涉及生物医学
，尤其涉及基因或蛋白的新功能及相关疾病动物模型的建立，具体地说，涉及ZC3H12b基因或蛋白的用途及模拟肝脏疾病的动物模型的建立方法。

技术介绍

[0002]肝脏疾病分为非肿瘤性和肿瘤性肝病两部分，但非肿瘤性肝病(常见的肝炎病毒或寄生虫等病原性感染，化学或酒精性肝损伤，以及胆石症，胆管畸形等遗传发育异常)，会因为肝窦中肝细胞，胆管上皮细胞及干细胞所在的微环境，不断受到胆管上皮分泌的胆汁刺激，肝窦固有的巨噬细胞(Kupffer cell，KC)及其它调控自身免疫系统的淋巴细胞分泌的细胞因子的影响，导致肝脏局部损伤部位的肝细胞脂肪性病变，纤维化，进而肝硬化，甚至肝肿瘤性癌变。流行病学调查资料显示，肝细胞肝癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)和肝内胆管细胞癌(Intrahepatic Cholangiocarcinoma，ICC)在男性与女性发病比例方面有所不同，HCC的男性与女性的发病比例约为2:1-4:1，ICC发病率方面女性略高于男性(3:2)。ICC是起源于肝胆管上皮细胞，肝细胞，干细胞，以及胆管旁腺体细胞的胆管腺癌。其发病率仅次于肝细胞癌(HCC)的肝脏原发恶性肿瘤。ICC致病因素包括肝炎病毒、寄生虫等病原性感染的胆管炎症，化学致癌物以及遗传等因素，但其致病机制和确切病因仍然不明，且近年来全球都呈现上升趋势。因ICC早期无明显临床症状，早期诊断和及时治疗都具有重大特殊意义。对于ICC肝癌性别差异的解释，目前的研究主要围绕于性激素和细胞因子展开，然而近年来，针对雌雄激素受体通路和炎症干预的治疗方案在临床上并未取得预期的治疗结果。一方面，归因于现有的很多研究成果来源于化学诱导的肝癌发生动物模型，不能完全模拟临床上的HBV和HCV感染导致的ICC，尤其是遗传因素导致的ICC发生过程；另一方面，由于ICC中细胞种类不同，性别差异的原因和机制并不完全清楚，ICC动物模型都是利用药物所致，缺乏基因组层面的深入研究。因此，基因和蛋白分子的ICC动物模型，对肝癌致病机制以及其分子基因层面的性别差异研究，快速诊断技术的研发及靶向药物的设计和筛选等都具有重要的基础科学和临床应用价值。
[0003]Zc3h12蛋白家族是一类作用于免疫应答和炎症反应的CCCH型锌指蛋白，其特点是含有一个CCCH型锌指结构域(与DNA或RNA结合相关)，一个PIN Zc3h12功能域，一个RNA酶活性区域，还有一个独立的ZC3H12家族保守性很高的泛素相关功能域(UBA)(图2-3)。Zc3h12蛋白家族包括4个成员：ZC3H12A、Zc3h12b、ZC3H12C和ZC3H12D。虽然这四种蛋白氨基酸序列同源性很高，但组织分布差异性很大。ZC3H12蛋白家族功能还不完全明了。针对Zc3h12b，Wawro M.等(Wawro M.,Wawro K.,Kochan J.,Solecka A.,Sowinska W.,Lichawska-Cieslar A.,et al.,Zc3h12b/MCPIP2,a new active member of the ZC3H12 family.RNA.25(2019)840-856.)公开了一种人和哺乳动物的Zc3h12b，具有结合前炎性白介素6(proinflammatory interleukin-6(IL-6)mRNA)，存在于细胞质中形成微粒
(granule-like structure)，调控mRNA转录和蛋白翻译，使细胞周期停滞在G2期的功能。然而，截至本专利申请日之前，没有Zc3h12b与肝脏疾病，尤其是ICC及其相关的脂肪肝和肝癌的关系报道，也没有在小鼠或其他任何动物中敲除Zc3h12b得到肝脏疾病动物模型的报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供ZC3H12b基因或蛋白的用途，并基于此提供一种肝脏疾病动物模型的建立方法。
[0005]在本专利技术的第一方面，提供了ZC3H12b基因或蛋白或它们的上调剂在制备治疗肝内胆管囊腺瘤(biliary cystadenoma，BCA)、肝内胆管囊腺癌(biliary cystadenocarcinoma，BCAC)或与它们相关的脂肪肝或肝癌的药物中的应用。
[0006]作为本专利技术的一种优选实施方式，所述上调剂选自小分子化合物或生物大分子。
[0007]在本专利技术的第二方面，提供了一种治疗肝内胆管囊腺瘤、肝内胆管囊腺癌或与它们相关的脂肪肝或肝癌的药物组合物，所述药物组合物包含ZC3H12b基因或蛋白的上调剂，及药学上可接受的载体。
[0008]在本专利技术的第三方面，提供了ZC3H12b基因或蛋白作为诊断标志物在制备肝内胆管囊腺瘤、肝内胆管囊腺癌或与它们相关的脂肪肝或肝癌的诊断试剂或试剂盒中的应用。
[0009]在本专利技术的第四方面，提供了检测ZC3H12b基因或蛋白含量的试剂在制备肝内胆管囊腺瘤、肝内胆管囊腺癌或与它们相关的脂肪肝或肝癌的诊断试剂或试剂盒中的应用。
[0010]在本专利技术的第五方面，提供了一种以ZC3H12b基因或蛋白作为靶点筛选治疗肝内胆管囊腺瘤、肝内胆管囊腺癌或与它们相关的脂肪肝或肝癌的药物的方法，所述的方法包括：
[0011]用候选物质处理表达ZC3H12b基因或蛋白的体系；和
[0012]检测所述体系中ZC3H12b基因或蛋白的表达；
[0013]若所述候选物质可提高ZC3H12b基因或蛋白的表达，则表明该候选物质是需要的潜在物质，反之则表明该候选物质是非需要的潜在物质。
[0014]在本专利技术的第六方面，提供了一种肝脏疾病动物模型的建立方法，包括敲降动物的ZC3H12b基因或蛋白的表达的步骤。
[0015]作为本专利技术的一种优选实施方式，所述肝脏疾病选自肝内胆管囊腺瘤、肝内胆管囊腺癌或与它们相关的脂肪肝或肝癌。
[0016]作为本专利技术的另一优选实施方式，所述动物选自除人以外的低等至高等脊椎动物。
[0017]在本专利技术的第七方面，提供了按照如上任一所述的方法建立的肝脏疾病动物模型的用途，所述用途选自：
[0018]a)研究人或/和动物zc3h12b调控巨噬细胞介导的脂肪肝发生及肝癌样变化相关的分子机制；
[0019]b)研究人或动物肝内胆管囊腺瘤、肝内胆管囊腺癌或与它们相关的脂肪肝或肝癌的分子致病机制；
[0020]c)研究肝内胆管囊腺瘤或肝内胆管囊腺癌肝实质萎陷坏死及纤维化癌变的致病机理和机制；
[0021]d)筛选影响人或动物的雌雄肝脏分化发育，及肝内胆管囊腺瘤或肝内胆管囊腺癌在发生率上受内在雌雄性别差异或外源环境因子的调控机制。
[0022]本专利技术优点在于：
[0023]本专利技术首次利用基因编辑技术，靶向敲除青鳉的zc3h12b基因，建立了zc3h12b缺失的青鳉，产生了一系列移码突变，缺失Zc3h12b蛋白产物的杂合子和纯合子。这些杂合子和本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.ZC3H12b基因或蛋白或它们的上调剂在制备治疗肝内胆管囊腺瘤、肝内胆管囊腺癌或与它们相关的脂肪肝或肝癌的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述上调剂选自小分子化合物或生物大分子。3.一种治疗肝内胆管囊腺瘤、肝内胆管囊腺癌或与它们相关的脂肪肝或肝癌的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含ZC3H12b基因或蛋白的上调剂，及药学上可接受的载体。4.ZC3H12b基因或蛋白作为诊断标志物在制备肝内胆管囊腺瘤、肝内胆管囊腺癌或与它们相关的脂肪肝或肝癌的诊断试剂或试剂盒中的应用。5.检测ZC3H12b基因或蛋白含量的试剂在制备肝内胆管囊腺瘤、肝内胆管囊腺癌或与它们相关的脂肪肝或肝癌的诊断试剂或试剂盒中的应用。6.一种以ZC3H12b基因或蛋白作为靶点筛选治疗肝内胆管囊腺瘤、肝内胆管囊腺癌或与它们相关的脂肪肝或肝癌的药物的方法，其特征在于，所述的方法包括：用候选物质处理表达ZC3H12b基因或蛋白的体系；和检测所述体系中ZC3H12b基因或蛋白的表达；若所述候选物质可提高ZC3H1...

【专利技术属性】
技术研发人员：关桂君，常宇阳，
申请(专利权)人：上海海洋大学，
类型：发明
国别省市：