一种同时检测百日咳杆菌及其耐药突变位点的方法和试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种同时检测百日咳杆菌DNA及其耐药突变位点的荧光PCR检测方法，将待测样本DNA和内标加入荧光PCR反应液中进行扩增反应，再根据荧光信号检测通道的Ct值对反应结果进行判读，区分待测样品是百日咳杆菌还是耐药百日咳杆菌，从而指导临床正确使用抗生素，防止抗生素的滥用。本发明专利技术还提供了用于上述百日咳杆菌及其耐药突变位点的检测方法的试剂盒，所述试剂盒包含百日咳杆菌检测用的荧光PCR反应液和内标。本发明专利技术的方法和试剂盒能节省检测时间和成本，且检测准确度高、灵敏度高、特异性好、精密度好。精密度好。

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测百日咳杆菌及其耐药突变位点的方法和试剂盒


[0001]本专利技术属于分子生物学检测领域，更具体的涉及一种同时检测百日咳杆菌及其耐药突变位点的方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]百日咳是由百日咳杆菌引起的一种严重急性呼吸道传染病，百日咳的特征为典型性痉挛性咳嗽，伴有鸡鸣样回声。百日咳疫苗的广泛接种，虽然使该病的发病率明显下降，但由于疫苗接种产生的抗体随年龄增长而下降，孕妇体内的抗体传送给胎儿很少，因此小婴儿对百日咳的抵抗力仍然很弱，或未达疫苗接种年龄，导致小于6月龄婴儿百日咳的发病率明显较其他年龄组高。另外，疫苗接种产生的抗体随年龄增长而下降，耐药百日咳杆菌菌株的出现和传播等，导致已接种疫苗的青少年和成人患百日咳的人数逐渐增多，局部地区出现爆发或者流行，再加上耐药百日咳杆菌菌株的出现和传播，形成了百日咳再现现象，使人们对百日咳的防控面临新的挑战。值得注意的是，已接种疫苗的青少年和成人患百日咳的人数逐渐增多，其临床症状并不典型，常被忽视，并且可以作为传染源威胁幼儿健康。因此，加强对百日咳及耐药情况的监测显得非常重要。
[000本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测百日咳杆菌及其耐药突变位点的方法，包括如下步骤：将待测样本DNA和内标加入荧光PCR反应液中进行扩增反应，再根据荧光信号检测通道的Ct值对反应结果进行判读，其特征在于，所述判读按如下方法进行：(1)当百日咳杆菌核酸荧光信号检测通道的Ct值＞26.00时，按照如下进行判读：当
①
内标检测Ct值≤36.00，
②
百日咳杆菌核酸荧光信号检测通道的荧光信号增长，呈典型的S型曲线，且Ct值≤36.00，
③
百日咳杆菌耐药突变位点的荧光信号检测通道的荧光信号无明显扩增曲线时，则说明所述待测样本DNA为百日咳杆菌DNA，但未发生A2047G耐药突变；当
①
内标检测Ct值≤36.00，
②
百日咳杆菌核酸和百日咳杆菌耐药突变位点荧光信号检测通道的荧光信号均增长，均呈典型的S型曲线，且Ct值均≤36.00时，则说明所述待测样本DNA为百日咳杆菌DNA，且发生A2047G耐药突变；当
①
内标检测Ct值≤36.00，
②
百日咳杆菌核酸荧光信号检测通道Ct值＞36.00，且无典型的S型曲线时，则说明所述待测样本DNA不是百日咳杆菌DNA；(2)当百日咳杆菌核酸荧光信号检测通道的Ct值≤26.00时，按照如下进行判读：当
①
内标检测Ct值≤36.00，
②
百日咳杆菌核酸荧光信号检测通道的荧光信号增长，呈典型的S型曲线，
③
且当百日咳杆菌核酸荧光信号检测通道Ct值≤26.00，百日咳杆菌耐药突变位点荧光信号检测通道有扩增曲线时；则需要通过计算百日咳杆菌核酸荧光信号与百日咳杆菌耐药突变位点荧光信号的Ct差值ΔCt来区分百日咳杆菌是否发生突变阳性：当ΔCt≤6时，则说明所述待测样本DNA为百日咳杆菌且发生A2047G耐药突变；当ΔCt＞6时，则说明所述待测样本DNA为百日咳杆菌且未发生A2047G耐药突变。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光PCR反应液包括如下组分：(1)引物组：所述引物组中各条引物浓度均为0.6μM；(2)探针组：所述探针组中各条探针浓度均为0.3μM；(3)Taq DNA聚合酶：浓度为1.5U/反应；(4)反应缓冲液：dNTP浓度为0.2mM，MgCl2浓度为2.5mM，KCl终浓度为390mM，Tris-HCl的pH为9.39，其终浓度为250mM。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述引物组包括：引物BP-F4：用于检测百日咳杆菌核酸的正向引物，如序列表中SEQ ID NO.1所示序列；引物BP-R4：用于检测百日咳杆菌核酸的反向引物，如序列表中SEQ ID NO.2所示序列；引物MBP-F4：用于检测百日咳杆菌耐药突变位点的正向引物，如序列表中SEQ ID NO.4所示序列；引物...

【专利技术属性】
技术研发人员：李小锋，李晨阳，刘小翠，刁礼福，
申请(专利权)人：广东和信健康科技有限公司，
类型：发明
国别省市：