本申请属于生物检测技术领域，具体为一种基于荧光RMA法联合检测三种生殖道病原体的引物探针组，属于生物检测技术领域。该试剂盒中包括有：含有扩增反应试剂的检测管、缓冲液、醋酸镁、标准阳性质粒、无菌双蒸水。所述含有扩增反应试剂的检测管中同时包括检测沙眼衣原体（CT）、淋病奈瑟菌（NG）、解脲脲原体（UU）的引物对及对应的探针。本发明专利技术能在同一反应管内同时检测沙眼衣原体、淋病奈瑟菌、解脲脲原体三种常见生殖道病原体核酸，操作简单，价格低廉，可高效、快速、准确地检测出相关的生殖道病原体，对性病的诊疗和防治具有重要意义。对性病的诊疗和防治具有重要意义。对性病的诊疗和防治具有重要意义。
【技术实现步骤摘要】
一种基于荧光RMA法联合检测三种生殖道病原体的引物探针组
[0001]本申请属于生物检测
，具体为一种基于荧光RMA法联合检测三种生殖道病原体的引物探针组。
技术介绍
[0002]性传播疾病(STD)是主要通过性接触传播的一类泌尿生殖道感染性疾病，引起泌尿生殖道感染的生殖道病原体主要包括沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis，CT)、淋病奈瑟菌(Neisseria Gonorrhoeae，NG)、解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum，UU)等，其感染不仅可以引起尿道炎、附睾炎、子宫内膜炎、盆腔炎和输卵管炎等，严重的还可以导致育龄妇女不孕、流产、早产等不良孕产史，严重危害两性健康。而临床上存在高比例的混合感染，且多重及慢性持续性泌尿生殖道感染可导致性病的广泛传播以及发生严重的并发症，给临床诊疗和预防控制带来困难，因此快速、高通量检测生殖道病原体对性病的诊疗和防治具有重要意义。
[0003]目前沙眼衣原体、解脲脲原体和淋病奈瑟菌的实验室检测方法主要有培养法、免疫学方法、分子生物学方法等。培养法虽然特异性较高，但所需时间长，操作复杂，易漏检或误检，而且有些病原体如UU培养灵敏度较低；用免疫学方法检测病原体抗原灵敏度低，易出现假阴性问题，而检测抗体存在“窗口期”问题，同时不能判定是现症感染还是既往感染；PCR技术需要经过培训的专业人员和复杂的仪器设备，且存在易交叉污染等缺点。
[0004]因此，近年来不需要热循环仪的等温扩增方法应运而生。其中重组酶介导扩增(Recombinase MediatedAmplification,RMA)技术，被认为是可替代PCR的核酸检测技术，主要依赖重组酶、单链DNA结合蛋白(SSB)和链置换DNA聚合酶三种酶。RMA反应可以在37～42℃进行，整个过程在30min内即可达到检测水平，可实现核酸的快速检测。RMA反应的扩增产物可以通过实时荧光法进行检测。其中，探针上携带有碱基替代物dSpcacer(四氢呋喃)，dSpcacer的5
’
端有荧光基团、3
’
端有淬灭基团。扩增时，核酸外切酶III从dSpcacer处切割探针使荧光基团与淬灭基团分开，荧光信号得以释放，且得到可延伸的3
’‑
OH，在DNA聚合酶作用下可继续进行DNA延伸。随着反应进行，荧光信号逐渐增强，可以通过实时荧光检测仪检测。
[0005]本专利技术正是在荧光RMA法的基础上开发了联合检测沙眼衣原体(CT)、淋病奈瑟菌(NG)、解脲脲原体(UU)三种常见生殖道病原体的试剂盒，可广泛用于生殖道病原体的辅助诊断，指导临床用药等多个领域。
技术实现思路
[0006]为了解决现有技术的问题，本申请提供了一种基于荧光RMA法联合检测三种生殖道病原体的引物探针组，本申请是通过下述方案实现的：
[0007]一种基于荧光RMA法联合检测三种殖道病原体的引物探针组，包括检测沙眼衣原
体(CT)的引物对及对应的探针、检测淋病奈瑟菌(NG)的引物对及对应的探针以及检测解脲脲原体(UU)的引物对及对应的探针，其中：
[0008](1)CT引物和探针序列为：
[0009]CT
‑
F：
[0010]5’‑
CTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCTAT
‑3’
；
[0011]CT
‑
R：
[0012]5’‑
CGGTGCTTCTTTACCTGGTACGCTCAAATCCAG
‑3’
；
[0013]CT
‑
P：
[0014]5’‑
CGACGCCGCGTGTGTGATGAAGGCTCTAGGG(FAM
‑
dT)(THF)G(BHQ1
‑
dT)AAAGCACTTTCGCT(C3
‑
spacer)
‑3’
。
[0015](2)NG引物和探针序列为：
[0016]NG
‑
F：
[0017]5’‑
TGACGGTACCTGAAGAATAAGCACCGGCTAACTAC
‑3’
；
[0018]NG
‑
R：
[0019]5’‑
CGGTATTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACTGCT
‑3’
；
[0020]NG
‑
P：
[0021]5’‑
ATTACTGGGCGTAAAGCGGGCGCAGACGG(JOE
‑
dT)(THF)AC(BHQ1
‑
dT)TAAGCAGGATGTGA(C3
‑
spacer)
‑3’
。
[0022](3)UU引物和探针序列为：
[0023]UU
‑
F：
[0024]5’‑
ACTGAGAGGTAGAACAGCCACAATGGGACTGAG
‑3’
；
[0025]UU
‑
R：
[0026]5’‑
TTACGCCCAGTAAATCCGGATAACGCTTGCATC
‑3’
；
[0027]UU
‑
P：
[0028]5’‑
AGTAGGGAATTTTTCACAATGGGCGCAAGCC(CY5
‑
dT)(THF)A(BHQ2
‑
dT)GAAGCAATGCCGCGT(C3
‑
spacer)
‑3’
。
[0029]优选的，所述沙眼衣原体(CT)的检测探针上标记的荧光报告基团是FAM，荧光淬灭基团是BHQ1；所述淋病奈瑟菌(NG)的检测探针上标记的荧光报告基团是JOE，荧光淬灭基团是BHQ1；所述解脲脲原体(UU)的检测探针上标记的荧光报告基团是CY5，荧光淬灭基团是BHQ2。
[0030]一种基于荧光RMA法联合检测三种殖道病原体的试剂盒，该试剂盒中包括有：含有扩增反应试剂的检测管、缓冲液、醋酸镁、标准阳性质粒、无菌双蒸水。
[0031]所述扩增反应试剂单管分装，为干粉形态。所述扩增反应试剂包括RMA引物对及检测探针组、大肠杆菌RecA蛋白、UvsY蛋白、单链结合蛋白GP32、Bst聚合酶、核酸外切酶III、聚环氧乙烷、海藻糖、甘露醇、ATP、dNTPs、肌酸激酶和磷酸肌酸。
[0032]优选的，所述引物对及检测探针组在扩增体系中的终浓度分别为10μM；所述聚环氧乙烷的终浓度为10％w/v；所述海藻糖的终浓度为2mM；所述甘露醇的终浓度为2.5mM；所述ATP的终浓度为10mM；所述dNTPs的终浓度为2mM；所述肌酸激酶的终浓度为1000ng/mL；所述磷酸肌酸的终浓本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种基于荧光RMA法联合检测三种生殖道病原体的引物探针组，其特征在于，包括检测沙眼衣原体(CT)的引物对及对应的探针、检测淋病奈瑟菌(NG)的引物对及对应的探针以及检测解脲脲原体(UU)的引物对及对应的探针，其中：(1)CT引物和探针序列为：CT
‑
F：5
’‑
CTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAGGCTAT
‑3’
；CT
‑
R：5
’‑
CGGTGCTTCTTTACCTGGTACGCTCAAATCCAG
‑3’
；CT
‑
P：5
’‑
CGACGCCGCGTGTGTGATGAAGGCTCTAGGG(FAM
‑
dT)(THF)G(BHQ1
‑
dT)AAAGCACTTTCGCT(C3
‑
spacer)
‑3’
。(2)NG引物和探针序列为：NG
‑
F：5
’‑
TGACGGTACCTGAAGAATAAGCACCGGCTAACTAC
‑3’
；NG
‑
R：5
’‑
CGGTATTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACTGCT
‑3’
；NG
‑
P：5
’...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈龙，陈大为，张瑶，
申请(专利权)人：济南国益生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。