一种基于CRISPR/Cas12a点切割可视化检测植原体的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于CRISPR/Cas12a点切割可视化检测植原体的方法，该方法通过设计针对植原体16SrDNA序列保守区域的crRNA，激活CRISPR/Cas12a的蛋白的切口功能实现对linker

【技术实现步骤摘要】
一种基于CRISPR/Cas12a点切割可视化检测植原体的方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及采用生物学的方法对植原体进行检测，更具体涉及一种基于CRISPR/Cas12a点切割可视化检测植原体的方法。

技术介绍

[0002]植原体(phytoplasma)是一种专性寄生于植物韧皮部筛管细胞的类菌原体。在世界范围内引起上千种植物的病害发生。植物感染植原体后，表现出丛枝、小叶簇生、植株矮化、花器官畸形及花变叶等异常发育表型，严重时整株枯死。由于植原体专性寄生在植物韧皮部筛管细胞，由于生长条件苛刻无法离体培养，植原体病害目前仍缺乏有效的治疗手段。植物一旦感染植原体，很难挽回损失，在缺乏有效治疗手段的背景下，植原体的检测是防治植原体病害的关键环节。因此建立起简便，灵敏，快速和准确的植原体检测体系对防治植原体病害具有重要意义。
[0003]在缺乏有效治疗手段的背景下，植原体的检测是防治植原体病害的关键环节。随着分子生物学技术的发展，植原体的检测技术发展迅速。目前植原体的检测手段主要包括电子显微镜检测，组织化学法检测，血清学检测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于CRISPR/Cas12a点切割可视化检测植原体的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)设计合成crRNA的引物序列，制备针对植原体16SrDNA序列保守区域的crRNA；(2)根据GenBank数据库中得到植原体16SrDNA序列，通过与多个序列对比，在其最保守的区域设计针对植原体16SrDNA序列的等温扩增引物RPA
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F和RPA
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R，提取多个感染植原体植物的总DNA，以感病植物总DNA为模板，使用RPA引物，使用RPA等温扩增试剂盒进行等温扩增试验得到等温扩增产物；(3)识别切割link
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arm DNA序列：制备基于CRISPR/Cas12a点特异性切割体系，并于37℃条件下切割30
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50min，识别切割link
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arm DNA序列，得到点特异性切割产物；(4)将切割产物加入纳米金反应液中进行显色反应，若反应溶液表现出明显的红色，则含有植原体。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述crRNA的引物序列为：T7
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crRNA
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F：5
’‑
GAAATTAATACGACTCACTATAGGG
‑3’
；crRNA
‑
R：5
’‑
GGCAATGGAGGAAACTCTGAATCTACAACAGTAGAAATTCCCTATAGTGAGTCGTATTAATTTC
‑3’
。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述RPA等温扩增引物序列为：RPA
‑
F:5
’‑
CACATTGGGAC...

【专利技术属性】
技术研发人员：李继东，冯建灿，陈鹏，李奇乘，杨琦琪，叶霞，郑先波，谭彬，
申请(专利权)人：河南农业大学，
类型：发明
国别省市：