一种羟基积雪草苷的发酵转化的方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种转化高含量的羟基积雪苷，也能够利用微生物转化反应生产高活性积雪草酸及其衍生物的积雪草发酵液及其制备方法与应用，本发明专利技术的积雪草经嗜热栖热菌发酵后，转化生成了羟基积雪草苷及积雪草酸，其中羟基积雪草苷含量提升200

【技术实现步骤摘要】
一种羟基积雪草苷的发酵转化的方法与应用


[0001]本专利技术属于发酵领域，涉及积雪草发酵，尤其涉及一种利用微生物转化反应转化富含羟基积雪苷的制备方法，以及羟基积雪草苷发酵液的应用。

技术介绍

[0002]积雪草是积雪草(拉丁学名：Centellaasiatica(L.)Urban)，又称雷公根、铜钱草、马蹄草，为伞形科植物积雪草的全草。积雪草原产于印度，现广泛分布于世界热带、亚热带区，在我国主要分布于长江以南各省。积雪草全草的主要活性成分有积雪草苷、羟基积雪草苷、积雪草酸和羟基积雪草酸。积雪草长久以来被作为健脑药、利尿药和麻风病、溃疡的辅助药以及皮肤病用药。
[0003]天然药物积雪草具有强烈的促进伤口愈合和皮肤修复的功效作用，它能使皮肤瘢痕成纤维细胞增殖抑制减少细胞外基质合成，刺激纤维母细胞增生，良好的诱导细胞凋零阻断剂，降低氧自由基浓度，明显抗菌减少炎症，促进疤痕表皮再生修复，淡化色素(促进黑素细胞凋亡，抑制黑素合成)、促进细胞再生，恢复皮肤弹性与光泽。
[0004]积雪草的化学成分复杂，主要有三萜类、黄酮类、挥发油类、多炔烯类等。目前认为，积雪草的主要活性成分为积雪草总苷，积雪草总苷是一种混合物，主要由三萜烷酸形成的糖苷组成，包括积雪草苷
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B、羟基积雪草苷和积雪草苷，它们都具有五环三萜结构和糖苷支链，仅在三萜环上的羟基数目和位置存在着差异。积雪草中起效的功效为积雪草苷和羟基积雪苷含量，研究表明，羟基积雪草苷所发挥的功效显著强于积雪草苷。
[0005]CN101724006A公开了一种分离积雪草苷
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B、羟基积雪草苷和积雪草苷的方法，包括：将原料溶于甲醇水溶液后通入模拟移动床色谱系统，用甲醇水溶液洗脱得到积雪草苷，提余液蒸除溶剂后得到一次固体料；将一次固体料溶于含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液或通入模拟移动床色谱系统，用含乙腈和甲基叔丁基醚的水溶液洗脱得到羟基积雪草苷，提余液蒸除溶剂后得到二次固体料；将二次固体料溶于甲醇水溶液后通入模拟移动床色谱系统，用甲醇水溶液洗脱得到积雪草苷
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B。然而，该方法从含积雪草总苷的原料出发，采用模拟移动床色谱系统，其操作复杂，对设备要求高，且使用甲基叔丁基醚，具有一定的毒性和危险性，在储存和使用过程中都需要充分重视。
[0006]CN102477063公开了制备型高效液相色谱仪分离积雪草提取物中的积雪草苷B与羟基积雪草苷的方法，在流动相内添加环糊精，再用有机溶剂萃取去除溶剂中的环糊精得到纯品，该方法操作复杂，添加β
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环糊精的溶剂容易造成色谱柱堵塞，降低色谱柱的使用寿命，成本高，不易工业化生产。CN102532244A公开了制备高纯度积雪草苷的方法，通过萃取、脱色、重结晶的方法得到积雪草苷纯品，但工艺中采用多种有机溶剂对积雪草提取物浸膏进行萃取，有机溶剂用量多，容易造成二次污染。CN101948501A公开了一种羟基积雪草苷的制备方法，提取液经大孔树脂柱层、活性炭脱色、析晶、大孔树脂再层析，最后得到98％以上纯度羟基积雪草苷，该工艺周期长，工艺复杂，成本高。
[0007]以上几种方法均是通过提取的方法来制得羟基积雪草苷，周期长，工艺复杂，成本
高。
[0008]由于积雪草中各成分性质的复杂性和特殊性，尤其是积雪草总苷中积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B的结构及理化性质都较为接近，其中羟基积雪草苷和积雪草苷B是一对同分异构体，它们和积雪草苷相比只多了一个羟基，而强极性糖元的连接又大大地弱化了这种微小极性的差异，使得很难用常规的分离方法将这三种物质完全分离。现有技术要么多数是从积雪草总苷出发制备上述三种化合物，要么是从积雪草出发制备分离其中的一种或两种化合物。而使用微生物发酵积雪草，通过其生物转化得到羟基积雪草苷目前未见有报道。

技术实现思路

[0009]本专利技术一方面是为了提供一种羟基积雪草苷发酵转化的制备方法，通过含嗜热菌的微生物发酵生产富含羟基积雪草苷的积雪草发酵液，转化高含量的羟基积雪苷，或者利用含嗜热菌的微生物发酵积雪草提取物或积雪草苷得到富含羟基积雪草苷的积雪草发酵液，积雪草苷经羟基转化后，其极性提高，从而提高积雪草苷类成分的利用率。同时，对比药材直接提取等方法，本工艺制得的羟基积雪苷转化后得率更高，是同浓度的水提取液的200
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8000倍，并且大幅增加羟基积雪草苷的含量。
[0010]本专利技术另一方面是为了提供该富含羟基积雪草苷的积雪草发酵液，通过嗜热菌或嗜热菌与其它菌种组成的多菌组合物对积雪草进行发酵，提高积雪草的利用率，提高临床功效。
[0011]本专利技术第三方面是为了提供该富含羟基积雪草苷的积雪草发酵液的应用，其在化妆品领域的应用，抗氧化、美白、皮肤细胞修复能力(光损伤修复、划痕修复)得到了显著的提升(相比与纯嗜热栖热菌发酵液)。
[0012]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0013]一种羟基积雪草苷的发酵转化方法，所述制备方法包括：以积雪草或积雪草粗提物或积雪草苷或两者以上的组合物为原料，通过微生物发酵制得富含羟基积雪草苷的发酵液；
[0014]或者，以积雪草发酵液或积雪草粗提物或积雪草苷或两者以上的组合物为原料通过微生物二次发酵制得富含羟基积雪草苷的发酵液；
[0015]将富含羟基积雪草苷的发酵液经后处理得到羟基积雪草苷纯品；
[0016]其中，所述的微生物包括嗜热菌或者嗜热菌与非嗜热菌组成的多菌组合物。
[0017]在本专利技术中，经含嗜热菌的微生物发酵后，积雪草或积雪草粗提物或积雪草苷或者其组合物转化生成了羟基积雪草苷，其中羟基积雪草苷含量是同浓度的积雪草水提取液的200
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8000倍。
[0018]作为本专利技术的一种优选方案，所述嗜热菌包括嗜热栖热菌，嗜热链球菌，嗜热芽胞杆菌，海栖热袍菌中的一种。
[0019]作为本专利技术的一种优选方案，所述非嗜热菌包括乳酸菌、双歧杆菌、米曲霉或酵母中的一种或多种。
[0020]作为本专利技术的一种优选方案，所述嗜热菌为嗜热栖热菌。
[0021]作为本专利技术的一种优选方案，所述积雪草的添加量为0.001
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2000g/L，所述积雪草
粗提取物的添加量为0.001
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2000g/L；所述积雪草发酵液的添加量为0.1
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99.9％。
[0022]作为本专利技术的一种优选方案，所述微生物为嗜热菌时，发酵温度60
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80℃，时间2
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80h。
[0023]作为本专利技术的一种优选方案，所述微生物为多菌组合物时，发酵温度25
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80℃，发酵时间2
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80h。
[0024]作为本专利技术的一种优选方案，所述多菌组合物中，嗜热菌占2％
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99.9％。
[0025]一种富含羟基积雪草苷的积雪草发酵液的应用，上述的发酵转化方法得到的羟基积雪本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种羟基积雪草苷的发酵转化方法，其特征在于，所述制备方法包括：以积雪草或积雪草粗提物或积雪草苷或两者以上的组合物为原料，通过微生物发酵制得富含羟基积雪草苷的发酵液；或者，以积雪草发酵液或积雪草粗提物或积雪草苷或两者以上的组合物为原料通过微生物二次发酵制得富含羟基积雪草苷的发酵液；将富含羟基积雪草苷的发酵液经后处理得到羟基积雪草苷纯品；其中，所述的微生物包括嗜热菌或者嗜热菌与非嗜热菌组成的多菌组合物。2.根据权利要求1所述的一种羟基积雪草苷的发酵转化方法，其特征在于，所述嗜热菌包括嗜热栖热菌，嗜热链球菌，嗜热芽胞杆菌或海栖热袍菌中的一种。3.根据权利要求1所述的一种羟基积雪草苷的发酵转化方法，其特征在于，所述非嗜热菌包括乳酸菌、双歧杆菌、米曲霉或酵母中的一种或多种。4.根据权利要求1或2或3所述的一种羟基积雪草苷的发酵转化方法，其特征在于，所述嗜热菌为嗜热栖热菌。5.根据权利要求1所述的一种羟基积雪草苷的发酵转化方法，其特征在于，所述积雪草的添加量为0...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏建良，颜贵卉，姚雨辰，章鹏坤，全莉红，王旻子，张明洲，
申请(专利权)人：杭州优玛达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：