一种提高环糊精葡萄糖基转移酶分泌表达的优化方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种提高环糊精葡萄糖基转移酶分泌表达的优化方法及其应用，该方法优化了含CGTase基因的重组大肠杆菌的发酵培养过程，在发酵培养的过程中添加甘氨酸、Ca

【技术实现步骤摘要】
一种提高环糊精葡萄糖基转移酶分泌表达的优化方法及其应用


[0001]本专利技术涉及一种提高环糊精葡萄糖基转移酶分泌表达的优化方法，属于酶工程和培养基


技术介绍

[0002]维生素C葡萄糖苷，中文名2-O-α-D吡喃葡萄糖基抗坏血酸（AA-2G），是维生素C和淀粉类物质经糖基转移酶作用的产物，由日本林原生物化学研究所与冈山大学药学系共同发现。维生素C葡萄糖苷为维生素C的糖类衍生物，主要作为美白添加剂应用于化妆品中，并且具有优良的稳定性和抗氧化性，是较好的L-抗坏血酸替代品。
[0003]目前，应用于化妆品的AA-2G大部分由日本林原公司提供，具有市场垄断地位。AA-2G的价格昂贵，大约是维生素C的100多倍。因此优化适合生产AA-2G的糖基转移酶活性对于推动我国AA-2G的工业化生产具有重要的意义。
[0004]最具工业化前景、用于生产AA-2G的糖基转移酶为环糊精葡萄糖基转移酶（CGTase）。CGTase为α-淀粉酶家族的主要成员，作为一种多功能酶，主要催化四种反应，包括三种转糖基反应-环化反应、歧化反应、偶合反应以本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高环糊精葡萄糖基转移酶分泌表达的优化方法，其特征是：环糊精葡萄糖基转移酶在大肠杆菌中进行异源表达的发酵过程中，向发酵培养基中添加甘氨酸、Ca
2+
、β-环糊精、牛磺酸和乳糖。2.根据权利要求1所述的优化方法，其特征是：β-环糊精和牛磺酸在发酵开始时加入，所述甘氨酸、Ca
2+
和乳糖在发酵中后期加入；优选的，甘氨酸、Ca
2+
和乳糖在发酵至OD
600
为0.4-0.6时加入。3.根据权利要求2所述的优化方法，其特征是：所述大肠杆菌为含编码环糊精葡萄糖基转移酶基因的重组大肠杆菌。4.根据权利要求1或2所述的优化方法，其特征是：甘氨酸在发酵体系中的浓度为100 mmol/L-300 mmol/L，优选为200 mmol/L。5.根据权利要求1或2所述的优化方法，其特征是：Ca
2+
在发酵体系中的浓度为5 mmol/L
ꢀ-
15 mmol/L，优选为10 mmol/L。6.根据权利要求1或2所述的优化方法，其特征是：β-环糊精在发酵体系中的浓度为5 mmo...

【专利技术属性】
技术研发人员：李梦娇，石艳丽，温朝，王冠凤，郭学平，
申请(专利权)人：山东华熙海御生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：