用于保存角膜内皮细胞的方法和容器技术

本发明专利技术提供以高的细胞存活率保存角膜内皮细胞的方法。本发明专利技术提供保存角膜内皮细胞和/或角膜内皮样细胞的方法，其包含：在底面积为至少约0.7cm

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于保存角膜内皮细胞的方法和容器
本专利技术涉及用于保存角膜内皮细胞的技术。
技术介绍
视觉信息是如下识别的：从眼球最前面的透明组织即角膜透射的光到达视网膜而使视网膜的神经细胞兴奋，所产生的电信号经由视神经到达大脑的视觉区，从而被识别。为了获得良好的视力，重要的是角膜是透明的。角膜的透明性是通过利用角膜内皮细胞的泵功能和屏障功能使含水率保持恒定、从而保持的。人的角膜内皮细胞在出生时以每1平方毫米约3000个的密度存在，但再生的能力有限，因此在受到重度损伤时不能维持功能，从而角膜的透明性丧失。在由角膜内皮营养不良、各种原因引起的角膜内皮功能障碍导致的大泡性角膜病变中，角膜产生浮肿和浑浊，从而导致显著的视力下降。现状是，对于大泡性角膜病变，使用供体角膜进行异体角膜移植。然而，由于手术侵入、排斥反应、供体不足等，现在的角膜移植存在很多要解决的问题。为了克服这些问题，近年作为针对角膜内皮疾病的治疗，开发出了侵入性低的细胞移植治疗(非专利文献1)。角膜内皮细胞的培养是困难的，存在使用常规方法时不增殖(非专利文献2和3)、成纤维细胞化(非专利文献4)、细胞老化(非专利文献5)等问题，角膜内皮细胞的培养方法正在火热研究中，实际的临床应用已成为可能(非专利文献1)。现有技术文献非专利文献1:KinoshitaS,KoizumiN,UenoM,etal.InjectionofculturedcellswithaROCKinhibitorforbullouskeratopathy.NEnglJMed2018；378:995-1003.非专利文献2:OkumuraN,UenoM,KoizumiN,etal.EnhancementonprimatecornealendothelialcellsurvivalinvitrobyaROCKinhibitor.InvestOphthalmolVisSci2009；50:3680-3687.非专利文献3:NakaharaM,OkumuraN,KayEP,etal.Cornealendothelialexpansionpromotedbyhumanbonemarrowmesenchymalstemcell-derivedconditionedmedium.PLoSOne2013；8:e69009.非专利文献4:OkumuraN,KayEP,NakaharaM,HamuroJ,KinoshitaS,KoizumiN.InhibitionofTGF-betaSignalingEnablesHumanCornealEndothelialCellExpansionInVitroforUseinRegenerativeMedicine.PLoSOne2013；8:e58000.非专利文献5:HongoA,OkumuraN,NakaharaM,KayEP,KoizumiN.TheEffectofap38Mitogen-ActivatedProteinKinaseInhibitoronCellularSenescenceofCultivatedHumanCornealEndothelialCells.InvestOphthalmolVisSci2017；58:3325-3334.
技术实现思路
用于解决问题的方案本专利技术人等进行了深入研究，结果发现了以高的存活率保存角膜内皮细胞的方法，至此完成专利技术。具体而言，本专利技术人等发现，通过在具有特定底面积的容器中保存角膜内皮细胞，能够以高存活率维持角膜内皮细胞。这样保存的角膜内皮细胞具有正常的角膜内皮细胞的功能，因此，在本专利技术中，提供不需要进一步的实质性的操作而能够直接使用(Ready-to-use，即用)的细胞作为治疗用细胞。因此，本专利技术提供以下内容。(项目1)一种保存角膜内皮细胞和/或角膜内皮样细胞的方法，其包含：在底面积为至少约0.7cm2的容器中保存该角膜内皮细胞和/或角膜内皮样细胞的工序。(项目2)根据项目1所述的方法，其中，用于保存所述细胞的液体的液面为约0.75mm以上。(项目3)根据项目1或2所述的方法，其中，所述容器的底面积为约0.7～约4cm2。(项目4)根据项目1～3中的任一项所述的方法，其中，所述容器的底面积为约1.5～约3cm2。(项目5)根据项目1～4中的任一项所述的方法，其中，所述容器的底面积为约1.8～约2cm2。(项目6)根据项目1～5中的任一项所述的方法，其中，所述容器没有进行用于粘附培养的表面处理。(项目7)根据项目1～6中的任一项所述的方法，其中，所述容器为低粘附表面容器或表面未处理容器。(项目8)根据项目1～7中的任一项所述的方法，其中，所述容器由聚苯乙烯、聚丙烯、或玻璃制成。(项目9)根据项目1～8中的任一项所述的方法，其中，所述容器选自由24孔板、管形瓶、注射器、培养皿组成的组。(项目10)根据项目1～9中的任一项所述的方法，其中，所述细胞的保存在约12℃～约42℃的温度下进行。(项目11)根据项目1～10中的任一项所述的方法，其中，所述细胞的保存在约17℃～约39℃的温度下进行。(项目12)根据项目1～11中的任一项所述的方法，其中，所述细胞的保存在约27℃～约37℃的温度下进行。(项目13)根据项目1～12中的任一项所述的方法，其中，所述细胞的保存在约37℃的温度下进行。(项目14)一种容器，其为用于保存角膜内皮细胞和/或角膜内皮样细胞的容器，底面积为至少约0.7cm2。(项目15)根据项目14所述的容器，其中，所述容器具有允许液面的高度为约0.75mm以上的结构。(项目16)根据项目14或15所述的容器，其为用于保存角膜内皮细胞和/或角膜内皮样细胞的容器，底面积为约0.7～约4cm2。(项目17)根据项目14～16中的任一项所述的容器，其中，所述容器的底面积为约1.5～约3cm2。(项目18)根据项目14～17中的任一项所述的容器，其中，所述容器的底面积为约1.8～约2cm2。(项目19)根据项目14～18中的任一项所述的容器，其中，所述容器没有进行粘附培养的表面处理。(项目20)根据项目14～19中的任一项所述的容器，其中，所述容器为低粘附表面容器或表面未处理容器。(项目21)根据项目14～20中的任一项所述的容器，其中，所述容器由聚苯乙烯、聚丙烯、或玻璃制成。(项目22)根据项目14～21中的任一项所述的容器，其中，所述容器选自由24孔板、管形瓶、注射器、或培养皿组成的组。(项目23)一种角膜内皮细胞或角膜内皮样细胞，其通过项目1～13中的任一项所述的方法进行了保存。(项目24)一种本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种保存角膜内皮细胞和/或角膜内皮样细胞的方法，其包含：在底面积为至少约0.7cm

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20181002 JP 2018-187754;20181228 JP 2018-2479701.一种保存角膜内皮细胞和/或角膜内皮样细胞的方法，其包含：在底面积为至少约0.7cm2的容器中保存该角膜内皮细胞和/或角膜内皮样细胞的工序。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述角膜内皮细胞和角膜内皮样细胞为能够应用于临床的细胞。


3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述经保存的角膜内皮细胞和角膜内皮样细胞不需要进一步的加工或培养而直接进行给予。


4.根据权利要求1～3中的任一项所述的方法，其中，保存至少约6小时。


5.根据权利要求1～4中的任一项所述的方法，其中，用于保存所述细胞的液体的液面高度为约0.75mm以上。


6.根据权利要求1～5中的任一项所述的方法，其中，所述容器的底面积为约0.7～约4cm2。


7.根据权利要求1～6中的任一项所述的方法，其中，所述容器的底面积为约1.5～约3cm2。


8.根据权利要求1～7中的任一项所述的方法，其中，所述容器的底面积为约1.8～约2cm2。


9.根据权利要求1～8中的任一项所述的方法，其中，所述容器没有进行用于粘附培养的表面处理。


10.根据权利要求1～9中的任一项所述的方法，其中，所述容器为低粘附表面容器或表面未处理容器。


11.根据权利要求1～10中的任一项所述的方法，其中，所述容器由聚苯乙烯、聚丙烯、或玻璃制成。


12.根据权利要求1～11中的任一项所述的方法，其中，所述容器选自由24孔板、管形瓶、注射器、培养皿组成的组。


13.根据权利要求1～12中的任一项所述的方法，其中，所述细胞的保存在约0℃～约42℃的温度下进行。


14.根据权利要求1～13中的任一项所述的方法，其中，所述细胞的保存在约17℃～约39℃的温度下进行。


15.根据权利要求1～14中的任一项所述的方法，其中，所述细胞的保存在约27℃～约37℃的温度下进行。


16.根据权利要求1～15中的任一项所述的方法，其中，所述细胞的保存在约37℃的温度下进行。


17.根据权利要求1～16中的任一项所述的方法，其中，所述角膜内皮细胞和/或角膜内皮样细胞以细胞悬浮液的状态保存。


18.根据权利要求1～17中的任一项所述的方法，其中，所述悬浮液的体积为至少约50μL。


19.根据权利要求1～18中的任一项所述的方法，其中，所述悬浮液的体积为约100μL～约2000μL。


20.根据权利要求1～19中的任一项所述的方法，其中，进行了所述保存的所述角膜内皮细胞和/或角膜内皮样细胞能够用于细胞输注疗法。


21.根据权利要求1～20中的任一项所述的方法，其中，在所述容器中保存的所述细胞的细胞密度为约2×104个/ml～约8×107个/ml。


22.根据权利要求1～21中的任一项所述的方法，其中，在所述容器中保存的所述细胞的细胞密度为约2×106个/ml～约4×106个/ml。


23.一种容器，其为用于保存角膜内皮细胞和/或角膜内皮样细胞的容器，底面积为至少约0.7cm2。


24.根据权利要求23所述的容器，其中，所述容器具有允许液面的高度为约0.75mm以上的结构。


25.根据权利要求23或24所述的容器，其为用于保存角膜内皮细胞和/或角膜内皮样细胞的容器，底面积为约0.7～约4cm2。


26.根据权利要求23～25中的任一项所述的容器，其中，所述容器的底面积为约1.5～约3cm2。


27.根据权利要求23～26中的任一项所述的容器，其中，所述容器的底面积为约1.8～约2cm2。


28.根据权利要求23～27中的任一项所述的容器，其中，所述容器没有进行粘附培养的表面处理。


29.根据权利要求23～28中的任一项所述的容器，其中，所述容器是低粘附表面容器或表面未处理容器。


30.根据权利要求23～29中的任一项所述的容器，其中，所述容器由聚苯乙烯、聚丙烯、或玻璃制成。


31.根据权利要求23～30中的任一项所述的容器，其中，所述容器选自由24孔板、管形瓶、注射器、或培养皿组成的组。


32.根据权利要求23～31中的任一项所述的容器，其中，所述容器用于以细胞悬浮液的状态保存所述角膜内皮细胞和/或角膜内皮样细胞。


33.根据权利要求32所述的容...

【专利技术属性】
技术研发人员：小泉范子，奥村直毅，
申请(专利权)人：学校法人同志社，
类型：发明
国别省市：日本;JP