一种抑制菲油果外植体褐变和污染的方法技术

本发明专利技术属于植物组织培养技术领域，具体涉及一种抑制菲油果外植体褐变和污染的方法，包括以下步骤：（1）外植体的消毒：在菲油果当年生枝条上截取带有顶芽的嫩枝，先洗洁精清洗，后在流水下冲洗，冲洗后在无菌操作台上用0.01%升汞杀菌消毒，无菌水冲洗后备用；（2）低温黑暗预培养：将准备好的外植体切去伤口后截取合适长度放入预培养基中，放入低温黑暗环境中进行一段时间预培养；（3）常规培养：将经过预培养的外植体转接到加入活性炭的常规培养基中进行常规培养。本发明专利技术降低了外植体消毒中污染率、褐变率高的问题；缩短了诱导周期，一周左右即可萌芽；简便易操作，能有效降低生产成本。

【技术实现步骤摘要】
一种抑制菲油果外植体褐变和污染的方法
本专利技术属于植物组织培养
，具体涉及一种抑制菲油果外植体褐变和污染的方法。
技术介绍
菲油果又名费约果、凤榴、菠萝番石榴，属桃金娘科常绿灌木或小乔木，枝叶四季常绿，树高可达5米至6米，叶厚革质，椭圆形对生，长5厘米至7厘米，深绿色，具油脂光泽，四季常绿。叶背面有银灰色细绒毛。枝叶修剪时散发出令人愉快的芳香，有益人体健康。其花、叶均具有极高的观赏价值。果实营养丰富，富含维生素C、叶酸、植物纤维，以及多种苷类和黄酮类物质，且具有排毒养颜、降血脂、抗癌等功效，有“水果中的中华鲟”之称。菲油果是一种新优品种，集绿化、观赏、食用三位于一体，具有突出的市场优势，因此被园林行业的专家及同行所普遍看好。但由于其繁殖难，导致种苗缺乏，未能得到广泛应用。只有在日本、美国、澳大利亚等国家有专门的果园种植，供应市场。近年来，我国也有部分地区进行了菲油果的引种栽培，但是由于国内目前对于菲油果的研究应用尚处于起步阶段，种苗获得主要靠进口，市场缺口极大，种苗供不应求，因而限制了菲油果在我国的推广。菲油果的繁殖一般以扦插为主，但是其扦插成活率较低，且要大量繁殖整齐划一的优良苗木，最佳方法就是植物组织培养技术。关于费油果组织培养的研究报告在国内外已有不少，但也存在部分问题。菲油果常用的外植体有种子、茎尖和茎段，种子作为外植体虽然简单方便且污染和褐变较少，但是不能完全继承母本的优良性状，采用茎尖虽然污染和褐变率低于茎段，但是其生长培养完全达不到茎段诱导的效果。茎段诱导培养速度远远大于茎尖，但是其褐变和污染率居高不下。
技术实现思路
本专利技术旨在解决上述问题，提供了一种抑制菲油果外植体褐变和污染的方法，能够有效降低菲油果茎段外植体的污染率和褐化率，缩短新芽萌动的周期，提高诱导率。按照本专利技术的技术方案，所述抑制菲油果外植体褐变和污染的方法，包括以下步骤，(1)外植体的消毒：在菲油果当年生枝条上截取带有顶芽的嫩枝，先洗洁精清洗，后在流水下冲洗，冲洗后在无菌操作台上用0.01％升汞杀菌消毒，无菌水冲洗后备用；(2)低温黑暗预培养：将准备好的外植体切去伤口后截取合适长度放入预培养基中，放入低温黑暗环境中进行一段时间预培养；(3)常规培养：将经过预培养的外植体转接到加入活性炭的常规培养基中进行常规培养。进一步的，所述步骤(1)中洗洁精清洗时间为60～90s，流水冲洗后，采用升汞消毒的时间为6～8min，无菌水冲洗的次数为4～6次；进一步的，所述步骤(2)中的预培养基为1/2MS+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH为5.8，低温黑暗环境环境的温度为5～15℃，培养时间为1～3d。进一步的，所述步骤(3)中的常规培养基为1/2MS+6-BA0.5～1.5mg/L+活性炭1～3g/L+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH为5.8，温度25℃，光照12h/d。本专利技术的有益效果在于：(1)降低了外植体消毒中污染率、褐变率高的问题；(2)缩短了诱导周期，一周左右即可萌芽；(3)简便易操作，能有效降低生产成本。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1一种抑制菲油果外植体褐变和污染的方法，具体步骤为：(1)外植体的消毒：在菲油果当年生枝条上截取带有顶芽的嫩枝，洗洁精清洗时间为60～90s，后在流水下冲洗，冲洗后在无菌操作台上用0.01％升汞杀菌消毒6min，无菌水冲洗4～6次备用；(2)低温黑暗预培养：将准备好的外植体切去伤口后截取合适长度放入预培养基中，放入低温黑暗环境中进行一段时间预培养；预培养基为1/2MS+蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH为5.8，低温环境为5℃，黑暗培养1d。(3)常规培养：将经过预培养的外植体转接到加入活性炭的培养基中进行常规培养，常规培养基为1/2MS+6-BA0.5mg/L+活性炭1g/L蔗糖30g/L+琼脂5g/L，pH为5.8，温度25℃，光照12h/d。实施例2～3外植体的消毒部分升汞杀菌时间依次为7min和8min，其他均同实施例1。实施例4～5低温黑暗预培养，低温环境为5℃，黑暗培养时间依次2d和3d，其他均同实施例1。实施例6～8低温黑暗预培养，低温环境为10℃，黑暗培养时间依次为1d、2d和3d，其他均同实施例1。实施例9～11低温黑暗预培养，低温环境为15℃，黑暗培养时间依次为1d、2d和3d，，其他均同实施例1。实施例12～13常规培养中，活性炭含量依次为2g和3g，其他均同实施例1。实施例14～15常规培养中，6-BA浓度依次为1mg/L和1.5mg/L，其他均同实施例1。对比实施例1不经过低温黑暗预培养，其他同实施例1.对比实施例2常规培养中，6-BA浓度为0mg/L，其他均同实施例1。对比分析结果如下1.消毒时间对菲油果外植体污染的影响分析实施例1～3的外植体污染率情况，结果如下表实施例污染率(％)实施例196.7实施例275.0实施例326.7结合上表可知，消毒时间的长短直接影响外植体污染情况，一般来说消毒时间越长，消毒效果越好，污染率越低，但是存在消毒时间过长导致外植体诱导不成功，一般升汞消毒时间不超过8min，超过8min外植体褐变率大幅度增加。2.低温黑暗预培养不同温度、时间对外植体褐变的影响分析实施例1，实施例4～11，对比例1处理后的褐变率，结果如下表实施例温度(℃)天数(d)褐变率(％)实施例15121.6实施例45220.0实施例55318.3实施例610133.3实施例710231.6实施例810330.0实施例915141.6实施例1015240.0实施例1115338.3对比例1250100前期不同温度、时间的低温黑暗培养对菲油果褐变率的影响不同。主要因为褐变与外植体组织中所含的酚类化合物多少和多酚氧化酶活性有直接关系。低温暗处理能抑制褐变，是因为在酚类化合物合成氧化过程中，需要许多酶系统，酶的活性受温度影响较大，且其中一部分酶系统的活性是受光诱导的。这些酶在黑暗或者弱光条件下生长，其活性就大大减弱，以至酚本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抑制菲油果外植体褐变和污染的方法，其特征在于，包括以下步骤，/n（1）外植体的消毒：在菲油果当年生枝条上截取带有顶芽的嫩枝，先洗洁精清洗，后在流水下冲洗，冲洗后在无菌操作台上用0.01%升汞杀菌消毒，无菌水冲洗后备用；/n（2）低温黑暗预培养：将准备好的外植体切去伤口后截取合适长度放入预培养基中，放入低温黑暗环境中进行一段时间预培养；/n（3）常规培养：将经过预培养的外植体转接到加入活性炭的常规培养基中进行常规培养。/n

【技术特征摘要】
1.一种抑制菲油果外植体褐变和污染的方法，其特征在于，包括以下步骤，
（1）外植体的消毒：在菲油果当年生枝条上截取带有顶芽的嫩枝，先洗洁精清洗，后在流水下冲洗，冲洗后在无菌操作台上用0.01%升汞杀菌消毒，无菌水冲洗后备用；
（2）低温黑暗预培养：将准备好的外植体切去伤口后截取合适长度放入预培养基中，放入低温黑暗环境中进行一段时间预培养；
（3）常规培养：将经过预培养的外植体转接到加入活性炭的常规培养基中进行常规培养。


2.如权利要求1所述的制菲油果外植体褐变和污染的方法，其特征在于，所述步骤（1）中洗洁精清洗时间为60...

【专利技术属性】
技术研发人员：李涛，周敬锋，张晨，范爱淇，王钰涵，田星凯，韦俊宇，
申请(专利权)人：美尚生态景观股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32