一种景天外植体灭菌方法及愈伤诱导的培养基和诱导方法技术

本发明专利技术提供了一种景天属植物外植体灭菌方法，包括：获取景天属植物外植体；用酒精浸泡景天属植物外植体；用0.08‑0.12w/w％的HgCl

【技术实现步骤摘要】
一种景天外植体灭菌方法及愈伤诱导的培养基和诱导方法
本专利技术属于园林生物
，涉及一种景天外植体灭菌方法及愈伤诱导培养基和诱导方法，尤其是涉及一种伴矿景天外植体灭菌方法及愈伤诱导的培养基配方和诱导方法。
技术介绍
伴矿景天(Sedumplumbizincicola)属于景天科景天属，发现于浙江省的新种，喜生于富含Pb、Zn矿地区。多年生肉质草本，该植物生物量大，繁殖力强，最高吸收浓度1241mg/kg，是修复镉污染农田土壤中重要的修复材料，具有广阔的前景。尚缺乏高效的伴矿景天外植体灭菌方法和愈伤组织诱导方法，制约着伴矿景天的品种繁育等工作的展开。
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种伴矿景天组织培养的外植体灭菌方案及愈伤诱导培养基配方，该伴矿景天组织培养的筛选方法包括HgCl2灭菌时间及无菌水组合筛选，培养基包括愈伤诱导培养基。实现专利技术目的的技术方案是通过外植体灭菌方法筛选，保证外植体的成活率，为愈伤诱导提供生长良好的外植体。愈伤诱导培养基通过筛选不同浓度的6-BA、NAA组合，提高外植体的诱导率，为愈伤增殖提供优良的愈伤组织。其特点主要在于：本试验方案主要以MS为基本培养基，从生长健康的大田苗中选择完整良好的叶片作为外植体，通过灭菌方法筛选，保证外植体成活率。将灭菌好的外植体接种于添加不同配比浓度的激素6-BA、NAA组合的愈伤诱导培养基中，提高愈伤诱导率，为后期实验提供生长良好的愈伤组织，从而实现培育性状优良的伴矿景天组培苗。试验操作简单、方便，有利于筛选出最适合伴矿景天愈伤诱导的培养基配方。较为具体地，为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术第一方面提供了一种景天属植物外植体灭菌方法，所述灭菌方法包括如下步骤：(i)获取景天属植物外植体；(ii)用酒精浸泡所述景天属植物外植体；(iii)用0.08-0.12w/w％(比如，0.09w/w％、0.10w/w％、0.11w/w％)的HgCl2水溶液对所述景天属植物外植体消毒2.8-3.2min(比如，2.9min、3.0min、3.1min)；(iv)用无菌水冲洗所述景天属植物外植体，得到灭菌的景天属植物外植体。在一些实施方式中，在步骤(i)中，将所述景天属植物外植体清洗干净并经流水冲洗后使用。在一些实施方式中，在步骤(i)中，所述清洗干净为0.4-0.6w/w％NaClO水溶液表面消毒4-6min。在一些实施方式中，在步骤(ii)中，所述酒精为体积分数70-80％(比如，71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％)酒精水溶液。在一些实施方式中，在步骤(ii)中，所述浸泡时间为25-35s(比如，26s、27s、28s、29s、30s、31s、32s、33s、34s)。在一些实施方式中，在步骤(ii)中，所述浸泡是在搅拌条件下进行的。在一些实施方式中，在步骤(ii)中，在所述浸泡之后，用无菌水冲洗所述景天属植物外植体1.8-2.2min(比如，1.9min、2.0min、2.1min)。在一些实施方式中，在步骤(ii)中，所述无菌水冲洗是在搅拌条件下进行的。在一些实施方式中，在步骤(iii)中，所述消毒是在搅拌条件下进行的。在一些实施方式中，在步骤(iv)中，用无菌水冲洗所述景天属植物外植体，冲洗次数为2-6次(比如，3次、4次、5次)，每次冲洗时间为0.8-2.2min(比如，0.9min、1.0min、1.1min、1.2min、1.3min、1.4min、1.5min、1.6min、1.7min、1.8min、1.9min、2.0min、2.1min)。在一些实施方式中，在步骤(iv)中，用无菌水冲洗所述景天属植物外植体，冲洗次数为4次，第一次冲洗1.8-2.2min(比如，1.9min、2.0min、2.1min)；第二次冲洗0.8-1.2min(比如，0.9min、1.0min、1.1min)；第三次冲洗1.8-2.2min(比如，1.9min、2.0min、2.1min)；第四次冲洗1.8-2.2min(比如，1.9min、2.0min、2.1min)。在一些实施方式中，在步骤(iv)中，所述无菌水冲洗是在搅拌条件下进行的。在一些实施方式中，所述景天属植物为伴矿景天。在一些实施方式中，所述景天属植物外植体为景天属植物的叶片。本专利技术第二方面提供了一种用于景天属植物愈伤组织诱导的诱导培养基，所述诱导培养基包括：液体基础培养基和植物激素6-BA和NAA，所述植物激素在所述诱导培养基中的浓度为2.4-2.6mg/L6-BA和0.09-0.11mg/LNAA。在一些实施方式中，所述激素在所述诱导培养基中的浓度为2.5mg/L6-BA和0.1mg/LNAA。在一些实施方式中，所述液体基础培养基为MS液体培养基。在一些实施方式中，所述MS液体培养基的组成为：1900mg/L硝酸钾、285.85mg/L氯化钙、1650mg/L硝酸铵、180mg/L硫酸镁、170mg/L磷酸二氢钾、0.025mg/L氯化钴·6H2O、0.025mg/L硫酸铜·5H2O、6.2mg/L硼酸、16.9mg/L硫酸锰、0.25mg/L钼酸钠·2H2O、8.6mg/L硫酸锌·7H2O、0.83mg/L碘化钾、27.8mg/LFeSO4·7H2O、37.3mg/LNa2-EDTA·2H2O、2.0mg/L甘氨酸、100mg/L肌醇、0.1mg/L硫胺VB1、0.50mg/L烟酸、0.5mg/L吡哆醇VB6，其余为水。在一些实施方式中，所述诱导培养基还包括：5-8g/L琼脂、25-35g/L蔗糖。在一些实施方式中，所述诱导培养基还包括：7g/L琼脂、30g/L蔗糖。在一些实施方式中，所述MS液体培养基的PH为5.75-5.95。在一些实施方式中，所述MS液体培养基的PH为5.8。在一些实施方式中，所述景天属植物为伴矿景天。在一些实施方式中，所述诱导培养基用于诱导景天属植物的叶片形成愈伤组织。本专利技术第三方面提供了一种景天属植物愈伤组织诱导方法，所述方法为：使用本专利技术第二方面所述诱导培养基诱导培养景天属植物的外植体以形成所述景天属植物愈伤组织。在一些实施方式中，所述景天属植物的外植体经本专利技术第一方面所述的灭菌方法灭菌后再进行所述诱导培养。在一些实施方式中，所述诱导培养的温度为25±2℃。在一些实施方式中，所述诱导培养的温度为25℃。在一些实施方式中，所述诱导培养的光照强度为1800～3200LX。在一些实施方式中，所述诱导培养的光照强度为2000～3000LX。在一些实施方式中，所述诱导培养的光照时间为每日12-16h。在一些实施方式中，所述诱导培养的光照时间为每日14h。在一些实施方式中，所述诱导培养的培养天数23-27d。在一些实施方式中，所述诱导培养的培养本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种景天属植物外植体灭菌方法，所述灭菌方法包括如下步骤：/n(i)获取景天属植物外植体；/n(ii)用酒精浸泡所述景天属植物外植体；/n(iii)用0.08-0.12w/w％的HgCl

【技术特征摘要】
1.一种景天属植物外植体灭菌方法，所述灭菌方法包括如下步骤：
(i)获取景天属植物外植体；
(ii)用酒精浸泡所述景天属植物外植体；
(iii)用0.08-0.12w/w％的HgCl2水溶液对所述景天属植物外植体消毒2.8-3.2min；
(iv)用无菌水冲洗所述景天属植物外植体，得到灭菌的景天属植物外植体。


2.如权利要求1所述的灭菌方法，其特征在于，在步骤(i)中，将所述景天属植物外植体清洗干净并经流水冲洗后使用；
优选地，在步骤(i)中，所述清洗干净为0.4-0.6w/w％NaClO水溶液表面消毒4-6min；
优选地，在步骤(ii)中，所述酒精为体积分数70-80％酒精水溶液；
优选地，在步骤(ii)中，所述浸泡时间为25-35s；
优选地，在步骤(ii)中，所述浸泡是在搅拌条件下进行的；
优选地，在步骤(ii)中，在所述浸泡之后，用无菌水冲洗所述景天属植物外植体1.8-2.2min；
优选地，在步骤(ii)中，所述无菌水冲洗是在搅拌条件下进行的；
优选地，在步骤(iii)中，所述消毒是在搅拌条件下进行的；
优选地，在步骤(iv)中，用无菌水冲洗所述景天属植物外植体，冲洗次数为2-6次，每次冲洗时间为0.8-2.2min。
优选地，在步骤(iv)中，用无菌水冲洗所述景天属植物外植体，冲洗次数为4次，第一次冲洗1.8-2.2min；第二次冲洗0.8-1.2min；第三次冲洗1.8-2.2min；第四次冲洗1.8-2.2min；
优选地，在步骤(iv)中，所述无菌水冲洗是在搅拌条件下进行的。


3.如权利要求1所述的灭菌方法，其特征在于，所述景天属植物为伴矿景天。


4.如权利要求1所述的灭菌方法，其特征在于，所述景天属植物外植体为景天属植物的叶片。


5.一种用于景天属植物愈伤组织诱导的诱导培养基，所述诱导培养基包括：液体基础培养基和植物激素6-BA和NAA，所述植物激素在所述诱导培养基中的浓度为2.4-2.6mg/L6-BA和0.09-0.11mg/LNAA。


6.如权利要求5所述的诱导培养基，其特征在于，所述激素...

【专利技术属性】
技术研发人员：任冰洁，常明凯，申亮，马小茜，崔景辉，李锋，杨孟莉，
申请(专利权)人：中信建设有限责任公司，山水环境科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11