一种黄樟愈伤组织高效诱导不定芽分化的繁育方法技术

本发明专利技术公开了一种黄樟愈伤组织高效诱导不定芽分化的繁育方法，涉及植物繁殖技术领域，包括：取黄樟当年生半木质化茎枝，消毒，分成茎段，接种到培养基MS

【技术实现步骤摘要】
一种黄樟愈伤组织高效诱导不定芽分化的繁育方法
本专利技术涉及植物繁殖
，具体讲是一种黄樟愈伤组织高效诱导不定芽分化的繁育方法。
技术介绍
黄樟(Cinnamomumporrectum(Roxb.)Kosterm.)属于樟科樟属植物，主要分布于长江以南各省区，如广东、广西、江西、湖南、福建、云南、贵州等省、自治区。黄樟的根、茎、叶、枝均富含精油，是我国开发天然香料的重要木本精油植物资源之一。但黄樟结实少，种子成熟时间不一，多被鸟类啄食，极难获得种子，自然界中，黄樟呈小规模居群散生，可开发利用资源极少，短期内扦插繁殖难于成规模，优良种匮乏与培育技术滞后严重限制黄樟大部分化学类型资源开发利用。黄樟不同个体间或同一个体不同部位，精油含量及成分都存在较大差异。根据叶精油主成分不同可划分为不同化学类型，文献中已报道的化学型有芳樟醇型、桉叶油素型、樟脑型、柠檬醛型、橙花叔醇型、萜品醇型等。自然界中，黄樟呈小规模居群散生，可开发利用资源极少，并且黄樟精油成分与化学型研究常基于单个种群甚或单株来源，不足以满足黄樟在香精香料精油产业发展。黄樟新的化学型或新的资源有待于被进一步挖掘开发，其发展前景广阔。丰富的化学型赋予了黄樟精油极高的利用价值及开发潜力，倍受广大林农极大的关注，历史上一度被以“掘根截杆”方式开发，造成了一定程度的资源破坏。并且黄樟个体间或世代间精油性状显著变异，良种缺乏与培育技术滞后严重限制和制约黄樟大部分化学类型资源开发利用。因叶油出油率高且主成分含量突出的黄樟，已成为近年来天然香料产业的新力军，当中右旋芳樟醇型已规模产业化开发、切实地带动了部分地方林农脱贫致富，其它化学型黄樟还未广泛开发利用。随着可持续发展理念贯彻，筛选优树，创新高效繁育方法已成为当今黄樟天然香料产业发展的重中之重。前期虽有关于黄樟组织培养的研究报道，因取材母本化学类型不确定，仅用茎段直接诱导腋芽方式繁殖，属单纯器官离体培养，增殖速度较慢，并未开展和深入组织细胞的离体培养。由于植物组织培养存在种属特异性，而黄樟是多化学类型树种，个体繁育难度、路径和方法差异很大，通过茎节间段诱导愈伤组织分离单细胞和细胞团发生脱分化，形成单细胞无性系获取再生植株方法还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一，弥补当前黄樟传统繁育技术不足，提供一种黄樟愈伤组织诱导不定芽分化的繁育方法，特别是针对柠檬醛型黄樟的繁育方法。本专利技术的技术解决方案如下：一种黄樟愈伤组织诱导不定芽分化的繁育方法，包括以下步骤：S1、取黄樟当年生半木质化茎枝作为外植体，将外植体消毒后，分成带腋芽茎段，接种到培养基MS0中培养；S2、当步骤S1中茎段腋芽鼓起萌发成带叶小枝，剪切下萌发枝条，去叶将茎切成不带芽小段，接入诱导培养基中进行诱导愈伤组织的培养，得到淡黄色、淡绿色及乳白色愈伤组织；S3、挑选步骤S2中淡黄色愈伤组织团转接到防褐化及不定芽分化培养基中培养，得到丛生不定芽；S4、挑选步骤S3中生长旺盛的密集丛芽团转接入壮苗培养基中继续培养25～30d，得到粗壮完整的茎枝；S5、挑选步骤S4中茎杆高大于3cm带有3～4片叶的茎枝，接入生根培养基中进行根系诱导，培养时间15～20d，得到生根的再生植株。本专利技术的一种具体实施方式中，所述步骤S1中，取柠檬醛型黄樟单株上当年生半木质化茎枝作为外植体。本专利技术的一种具体实施方式中，所述步骤S2中，诱导培养基的成分包括：MS+6-BA1.0～2.0mg/L+2.4-D0.2～0.5mg/L。本专利技术的一种具体实施方式中，所述步骤S3中，防褐化及不定芽分化培养基的成分包括：MS+BA0.5～1.0mg/L+TDZ0.8mg/L+NAA0.1～0.2mg/L+VC10～15mg/L+VB15～20mg/L。本专利技术的一种具体实施方式中，所述步骤S4中，壮苗培养基的成分包括：MS+6-BA0.2～0.5mg/L+NAA0～0.05mg/L+香蕉泥15～20g/L+AC0.2～0.3g/L。本专利技术的一种具体实施方式中，所述步骤S5中，生根培养基的成分包括：MS+NAA0.5mg/L+IBA1.0mg/L+AC0.2～0.3g/L+香蕉泥8～12g/L。本专利技术的一种具体实施方式中，所述步骤S1具体包括：在7月中旬～8月初，选择黄樟单株上当年生半木质化茎枝为外植体，外植体采回用剪刀去除叶片，剪成8～12cm小段，蘸取清洗液刷洗外植体表面污垢，后用清水洗去外植体表面清洁液，放入空瓶，瓶口用纱布包扎，置流水下冲洗1.5～2.5h，然后用体积分数75％酒精消毒40～50s，后用0.1％的氯化汞试剂处理5～7min，倒出，加入10％的盐酸溶液摇荡0.5～1.5min，倒出，加入无菌水摇动冲洗5～6次，消毒处理后的材料用镊子取出，放在消毒好托盘滤纸上吸干水，用镊子捏住茎段，并用消过毒的刀片切除茎段两端以及叶柄，分成带1～2个腋芽的小段，接种到培养基MS0中培养，培养温度为25±2℃，光照强度2000～3000lx，光照时间12～16h/d。本专利技术的一种具体实施方式中，所述步骤S2具体包括：茎段接种到培养基MS0中培养12～18d后，当茎段腋芽鼓起萌发成带叶小枝，剪切下萌发枝条，去叶把茎切成0.4～0.6cm不带芽小段，接入诱导培养基中，培养温度为25±2℃，光照强度2000～3000lx，光照时间12～16h/d，并茎段平贴培养基表面，经诱导起初茎两端开始产生一个乳白色瘤状组织，后慢慢延续茎整体膨大形成淡黄色、淡绿色及乳白色愈伤组织。本专利技术的一种具体实施方式中，所述步骤S3具体包括：挑选步骤S2中淡黄色愈伤组织团转接到防褐化及不定芽分化培养基中培养，培养温度为25±2℃，光照强度2000～3000lx，光照时间12～16h/d，并每隔30～35d进行转接新鲜培养基；培养18～22d后淡黄色愈伤组织细胞表面逐渐发生脱分化后形成白色乳状凸起物，细胞团也会出现原始白色胚状体或绿色小芽点，经培养后慢慢发育成绿色尖小芽点，小细胞团组织也同步扩大，继代培养3次后团状结构越来越大，慢慢出现丛状结构的丛生不定芽。本专利技术的一种具体实施方式中，所述步骤S4中，当丛芽的叶包茎状转变顶芽下嫩叶展开，叶面光亮平滑，茎变粗壮，茎尖杆微发红状，茎杆高大于3cm以上完整单株，即可进行下一步生根培养。本专利技术的一种具体实施方式中，所述步骤S5中，组培苗生根率达85％以上，单株有2～4条根系。本专利技术使用的材料是选用黄樟优株，以茎段做外植体运用生物技术的方法建立离体快繁体系，最大限度的保持了母本的优良性状，使其优良特性得到最大能效的发挥，短期内快速无性繁殖，促使优良的自然资源达到合理的、充分的、长期的永续利用，可为建设规模化的香精香料原料林提供规格一致的优质种苗。富含天然柠檬醛的植物虽然很多，但适合产业化大规模种植并能提取柠檬醛的植物资源稀少，本专利技术的申请人从大量黄樟野生资源中筛选了叶精油主成分柠檬醛的黄樟单株，通过柠檬醛型黄樟优良本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种黄樟愈伤组织高效诱导不定芽分化的繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1、取黄樟当年生半木质化茎枝作为外植体，将外植体消毒后，分成带腋芽茎段，接种到培养基MS

【技术特征摘要】
1.一种黄樟愈伤组织高效诱导不定芽分化的繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、取黄樟当年生半木质化茎枝作为外植体，将外植体消毒后，分成带腋芽茎段，接种到培养基MS0中培养；
S2、当步骤S1中茎段腋芽鼓起萌发成带叶小枝，剪切下萌发枝条，去叶将茎切成不带芽小段，接入诱导培养基中进行诱导愈伤组织的培养，得到淡黄色、淡绿色及乳白色愈伤组织；
S3、挑选步骤S2中淡黄色愈伤组织团转接到防褐化及不定芽分化培养基中培养，得到丛生不定芽；
S4、挑选步骤S3中生长旺盛的密集丛芽团转接入壮苗培养基中继续培养25～30d，得到粗壮完整的茎枝；
S5、挑选步骤S4中茎杆高大于3cm带有3～4片叶的茎枝，接入生根培养基中进行根系诱导，培养时间15～20d，得到生根的再生植株。


2.根据权利要求1所述的一种黄樟愈伤组织高效诱导不定芽分化的繁育方法，其特征在于，所述步骤S1中，取柠檬醛型黄樟单株上当年生半木质化茎枝作为外植体。


3.根据权利要求1所述的一种黄樟愈伤组织高效诱导不定芽分化的繁育方法，其特征在于，所述步骤S2中，诱导培养基的成分包括：MS+6-BA1.0～2.0mg/L+2.4-D0.2～0.5mg/L。


4.根据权利要求1所述的一种黄樟愈伤组织高效诱导不定芽分化的繁育方法，其特征在于，所述步骤S3中，防褐化及不定芽分化培养基的成分包括：MS+BA0.5～1.0mg/L+TDZ0.8mg/L+NAA0.1～0.2mg/L+VC10～15mg/L+VB15～20mg/L。


5.根据权利要求1所述的一种黄樟愈伤组织高效诱导不定芽分化的繁育方法，其特征在于，所述步骤S4中，壮苗培养基的成分包括：MS+6-BA0.2～0.5mg/L+NAA0～0.05mg/L+香蕉泥15～20g/L+AC0.2～0.3g/L。


6.根据权利要求1所述的一种黄樟愈伤组织高效诱导不定芽分化的繁育方法，其特征在于，所述步骤S5中，生根培养基的成分包括：MS+NAA0.5mg/L+IBA1.0mg/L+AC0.2～0.3g/L+香蕉泥8～12g/L。


7.根据权利要求1所述的一种黄樟愈伤组织高效诱导不定芽分化的繁育方法，其特征在于，所述步骤S1具体包...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘新亮，戴小英，章挺，汪信东，邱凤英，杨海宽，何小三，张月婷，
申请(专利权)人：江西省林业科学院，
类型：发明
国别省市：江西;36