一种面包果种苗的高通量繁育方法技术

本发明专利技术涉及组织培养及种苗高通量繁育技术领域，特别涉及一种面包果种苗的高通量繁育方法。该方法包括：将面包果母株根段进行扦插，取根段上生长出的茎段制备外植体，清洗、消毒灭菌；将外植体接种到愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导，得到带愈伤组织的茎段；将带愈伤组织的茎段接种到丛生芽诱导培养基上进行丛生芽增殖分化，得到丛生芽；将丛生芽进行分株后，接种到生根培养基上进行生根，得到完整植株。本发明专利技术以母株根段扦插，根部上长出的茎段为外植体材料，才能诱导出丛生芽，获得丛生芽。

【技术实现步骤摘要】
一种面包果种苗的高通量繁育方法
本专利技术涉及组织培养及种苗高通量繁育
，特别涉及一种面包果种苗的高通量繁育方法。
技术介绍
面包果Artocarpusaltilis(Parkinson)Fosberg，别名面包树，英文名breadfruit，是桑科菠萝蜜属多年生热带优稀果树品种或木本粮食作物，有“长面包的树”之美称。原产于南太平洋的玻利尼西亚和西印度群岛，是当地的主要粮食作物。面包果营养丰富，不仅是热带地区的主要粮食作物，还是总糖、还原糖、蛋白质、抗坏血酸、膳食纤维、矿物质的重要来源，既可以做南方的粮食作物，也可以作为特色热带水果开发。此外，成熟的果实用途多样，可煮汤，切片用火烤或油炸，果肉松软，香味似面包；在我国引种地海南万宁兴隆地区，盛产期的面包果植株，年平均株产量可达100kg以上，产量可观，兴隆当地人家常切块煮咖喱，口感甚佳，这里需区分面包果Artocarpusaltilis和面包树Artocarpusincisa，英文名breadnut。面包树Artocarpusincisa叶子类似面包果Artocarpusaltilis，常在福建、海南、广西一些地方绿化观赏，果实有种子，不富含淀粉，两者不同，具体见图1和图2。随着市场经济的发展，人们对各种名优稀特色杂粮的需求与日俱增，健康、营养丰富的天然面包也将是大家最想了解和品尝的项目，因而，面包果产业具有很好的开发潜力和市场前景。目前，面包果在我国热区处于适度产业化阶段，在海南兴隆地区筛选的面包果无籽类型能正常开花结果，较好适应当地的气候条件，目前已开展区域试种研究，植株进入全面开花结果，但作物推广面积、产量仍然有限、果实上市少，并不为大多数人所知。究其原因，优良种苗缺乏是制约其产业发展的重要因素，且已知的面包果无籽类型良苗繁育依靠根蘖自然繁殖或刺伤地表根系产生根蘖繁殖，生长慢，周期长，数量少，且具有不确定性。因而建立一套适用可行的面包果种苗繁育技术，为进一步开发利用提供技术支撑显得尤为重要。采用无性繁育方法，如嫁接、扦插与组培等，能保证母体品种的优良遗传特性和经济性状，减少品种的分化和衰退、提高引进品种的适应性，扩大繁育和迅速推广优良品种。其中组织培养技术，主要是在室内进行种苗繁育，避免遭受天气因素的干扰，生长状态相对一致，利于集中管理，降低成本。并且以面包果愈伤组织作为外植体材料，通过丛生芽诱导或进行体细胞胚发生进行植株再生，能够摆脱对母株材料的限制，极大地提高面包果种苗的繁育效率，达到高通量繁育种苗的目的。因此组织培养技术对于面包果种苗繁育具有重要的实用价值。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种面包果种苗的高通量繁育方法。本方法最终实现了只需要以带腋芽茎段为外植体，进行增殖分化，再生根成完整植株，节省了初级诱导时间与材料，同时避免了初级诱导中内生菌污染的问题。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种面包果种苗的高通量繁育方法，包括以下步骤：步骤1：将面包果母株根段进行扦插，取根段上生长出的茎段制备外植体，清洗、消毒灭菌；步骤2：将外植体接种到愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导，得到带愈伤组织的茎段；愈伤组织诱导培养基为含有0.5～3.0mg/L6-BA、0.1～1.0mg/LIBA的MS培养基；将带愈伤组织的茎段接种到丛生芽诱导培养基上进行丛生芽增殖分化，得到丛生芽；丛生芽诱导培养基为含有0.5～3.0mg/L6-BA、0.1～1.0mg/LIBA、0.5～3.0mg/LTDZ的MS培养基；或者，将外植体接种到愈伤组织诱导培养基上直接进行丛生芽增殖分化，得到丛生芽；步骤3：将丛生芽进行分株后，接种到生根培养基上进行生根，得到完整植株；生根培养基为含有0.1～0.5mg/LNAA的1/2MS培养基。作为优选，面包果母株根段的制备方法为：采集面包果接近地表的、1.5～6厘米粗的根系，剪成15～30厘米长，根段上口剪平，下口斜剪；作为优选，扦插所用基质为椰糠，扦插的培养条件为：遮阴，苗床湿度为80％以上，温度为23～30℃。作为优选，外植体的长度为1～1.5cm。作为优选，愈伤组织诱导培养基为含有2.0mg/L6-BA、1.0mg/LIBA的MS培养基，或者为含有1.0mg/L6-BA、0.5mg/LIBA的MS培养基。作为优选，丛生芽诱导培养基为含有2.0mg/L6-BA、1.0mg/LIBA、0.5mg/LTDZ的MS培养基。作为优选，生根培养基为含有0.5mg/LNAA的1/2MS培养基。作为优选，愈伤组织诱导的条件为：28±2℃、光照强度500～1000lux、光照周期12h/d。优选地，愈伤组织诱导的光照强度600lux作为优选，丛生芽增殖分化的条件为：28±2℃、光照强度1500～2500lux、光照周期12h/d。优选地，丛生芽增殖分化的光照强度为1800～2000lux。作为优选，生根的条件为：28±2℃、光照强度1500～2500lux、光照周期12h/d。优选地，生根的光照强度为2000lux。作为优选，外植体的清洗、消毒灭菌程序为：外植体先用洗洁精清洗，然后再用升汞灭菌。优选地，外植体的清洗、消毒灭菌程序为：首先将外植体置于容器内，加入吐温-203～4滴，用纱布封口进行流水冲洗10～30min；随后转到无菌操作台上，用0.1％升汞灭菌4～8min，无菌水洗涤4～5次，无菌水每次洗涤1～2min，沥干水分。本专利技术提供了一种面包果种苗的高通量繁育方法。该方法包括：将面包果母株根段进行扦插，取根段上生长出的茎段制备外植体，清洗、消毒灭菌；将外植体接种到愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导，得到带愈伤组织的茎段；愈伤组织诱导培养基为含有0.5～3.0mg/L6-BA、0.1～1.0mg/LIBA的MS培养基；将带愈伤组织的茎段接种到丛生芽诱导培养基上进行丛生芽增殖分化，得到丛生芽；丛生芽诱导培养基为含有0.5～3.0mg/L6-BA、0.1～1.0mg/LIBA、0.5～3.0mg/LTDZ的MS培养基；将丛生芽进行分株后，接种到生根培养基上进行生根，得到完整植株；生根培养基为含有0.1～0.5mg/LNAA的1/2MS培养基。本专利技术具有如下技术效果：本专利技术以不同外植体和培养基作为对照方法，与本专利技术方法在相同环境条件下进行培养，结果显示，只有以母株根段扦插，根部上长出的茎段为外植体材料，才能诱导出丛生芽，获得丛生芽，以侧芽、顶芽与根芽为外植体材料，污染率高，并在培养中逐渐褐化死亡，没有获得愈伤组织或丛生芽，因此在面包果愈伤组织诱导与丛生芽再生方面，本专利技术方法显著优于各对照方法；本专利技术方法选择母株根部长出的茎段作为外植体，愈伤组织诱导培养基配方：以MS为基础培养基，添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和吲哚丁酸(IBA)；丛生芽诱导培养基配方：以MS为基础培养基，添加6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)、吲哚丁酸(IBA)和噻苯隆(TDZ)；丛生芽本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种面包果种苗的高通量繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：/n步骤1：将面包果母株根段进行扦插，取根段上生长出的茎段制备外植体，清洗、消毒灭菌；/n步骤2：将外植体接种到愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导，得到带愈伤组织的茎段；所述愈伤组织诱导培养基为含有0.5～3.0mg/L 6-BA、0.1～1.0mg/L IBA的MS培养基；将带愈伤组织的茎段接种到丛生芽诱导培养基上进行丛生芽增殖分化，得到丛生芽；所述丛生芽诱导培养基为含有0.5～3.0mg/L 6-BA、0.1～1.0mg/L IBA、0.5～3.0mg/L TDZ的MS培养基；/n或者，将外植体接种到愈伤组织诱导培养基上直接进行丛生芽增殖分化，得到丛生芽；/n步骤3：将丛生芽进行分株后，接种到生根培养基上进行生根，得到完整植株；所述生根培养基为含有0.1～0.5mg/L NAA的1/2MS培养基。/n

【技术特征摘要】
1.一种面包果种苗的高通量繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1：将面包果母株根段进行扦插，取根段上生长出的茎段制备外植体，清洗、消毒灭菌；
步骤2：将外植体接种到愈伤组织诱导培养基上进行愈伤组织诱导，得到带愈伤组织的茎段；所述愈伤组织诱导培养基为含有0.5～3.0mg/L6-BA、0.1～1.0mg/LIBA的MS培养基；将带愈伤组织的茎段接种到丛生芽诱导培养基上进行丛生芽增殖分化，得到丛生芽；所述丛生芽诱导培养基为含有0.5～3.0mg/L6-BA、0.1～1.0mg/LIBA、0.5～3.0mg/LTDZ的MS培养基；
或者，将外植体接种到愈伤组织诱导培养基上直接进行丛生芽增殖分化，得到丛生芽；
步骤3：将丛生芽进行分株后，接种到生根培养基上进行生根，得到完整植株；所述生根培养基为含有0.1～0.5mg/LNAA的1/2MS培养基。


2.根据权利要求1所述的高通量繁育方法，其特征在于，所述面包果母株根段的制备方法为：采集面包果接近地表的、1.5～6厘米粗的根系，剪成15～30厘米长，根段上口剪平，下口斜剪；
所述扦插所用基质为椰糠，所述扦插的培养条件为：遮阴，苗床湿度为80％以上，温度为23～30℃。


3.根据权利要求1所述的高通量繁育方法，其特征在于，所述外植体的长度为1～1.5cm。
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【专利技术属性】
技术研发人员：吴刚，吉训志，苏兰茜，秦晓威，白亭玉，孟倩倩，谭乐和，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院香料饮料研究所，
类型：发明
国别省市：海南;46