一种核酸的提取方法以及用于核酸提取的试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种核酸的提取方法以及用于核酸提取的试剂盒，涉及核酸提取技术领域，该提取方法包括采用裂解液对样本进行裂解，裂解液包括工作浓度为0.5～6M的强离子性离液盐、工作浓度为0.5v/v％～10v/v％的表面活性剂、工作浓度10v/v％～50v/v％的醇溶液；该裂解液在无需采用蛋白酶K的情况下，即可有效稳定地裂解样本，且裂解过程无需加热，在常温反应的条件下即可完成核酸的有效提取，此外，该提取方法通过在裂解样本时加入磁珠，实现裂解和结合一步完成，在保证提取质量的同时，提高了提取效率，简化了操作流程。

【技术实现步骤摘要】
一种核酸的提取方法以及用于核酸提取的试剂盒
本专利技术涉及核酸提取
，具体而言，涉及一种核酸的提取方法以及用于核酸提取的试剂盒。
技术介绍
核酸是遗传信息的载体，是非常重要的生物信息分子，也是分子生物学研究的主要对象，因此，核酸的提取质量将直接关系到实验的成败。核酸在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。核酸的分离主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子分开。在分离核酸时，一方面需要保证核酸结构的完整性，因为完整的一级结构是核酸结构和功能研究的基本要求，另一方面也需要尽量排除其他分子的污染，保证核酸样本的纯度。在现有提取核酸的技术中，通常采用蛋白酶K用于消化蛋白质，以释放核酸，若不添加蛋白酶K的话，核酸释放不充分，提取的核酸中容易出现蛋白污染。蛋白酶K是一种高活性的丝氨酸蛋白酶，但是使用蛋白酶K的应用条件尚未统一的标准，提取试剂中的各种溶剂和各种条件均可能对蛋白酶K的活性造成影响，导致核酸提取的障碍。且蛋白酶K的反应温度为50～65℃作用，需要进行加热处理，增加了核酸提取的流程，且核酸提取的效率和稳定性较低。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种核酸的提取方法以及用于核酸提取的试剂盒。本专利技术是这样实现的：第一方面，本专利技术实施例提供了一种核酸的提取方法，其包括采用裂解液对样本进行裂解；所述裂解液包括以下组分：工作浓度为0.5～6M的强离子性离液盐、工作浓度为0.5～10v/v％的表面活性剂、工作浓度10～50v/v％的醇溶液。第二方面，本专利技术实施例提供了一种用于核酸提取的试剂盒，应用于前述实施例所述的核酸的提取方法，其包括组成裂解液的以下试剂：强离子性离液盐、表面活性剂和醇溶液。本专利技术具有以下有益效果：通过对裂解液的成分配比以及裂解条件进行改进，在无需采用蛋白酶K的情况下，能够有效稳定地裂解样本(尤其是针对病毒核酸)，且裂解过程无需加热，在常温的反应条件下即可完成核酸的有效提取，且提取的核酸质量好，重复性好。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。图1为实施例1中核酸提取的流程示意图。具体实施方式为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。本专利技术实施例提供了一种核酸的提取方法，其包括采用裂解液对样本进行裂解；所述裂解液包括以下组分：工作浓度为0.5～6M的强离子性离液盐、工作浓度为0.5～10v/v％的表面活性剂、工作浓度10～50v/v％的醇溶液。本文中的“强离子性离液盐”可使细胞裂解，蛋白质和多糖沉淀，破坏细胞的完整结构。同时，该类盐可以使磁珠及其硅层吸附核酸的能力大大增强。其机理可能为：①高浓度离液盐可以降低磁珠材料表面电荷，从而减少磁珠表面和带负电荷的DNA间的静电斥力；②高浓度盐可通过形成水合离子降低水的活性，使DNA和磁珠表面脱水，促使DNA聚合到磁珠表面；③高浓度离液盐可破坏氢键，使双链DNA转变为单链DNA，单链DNA暴露出来的自由碱基与磁珠表面硅层形成氢键，促进DNA的进一步吸附。作为强离子性离液盐，其在较高浓度时，可使变性的蛋白质和变性DNA表现出比其正确折叠或天然构象时更高的热动力学稳定性，继而可促进DNA与磁珠的可逆性结合。同时，异硫氰酸胍除据上述功能，还可作为高效的促溶剂，具有较强蛋白变性和降解、抑制核酸酶从而减少提取过程中核酸降解的作用。优选地，所述强离子性离液盐选自异硫氰酸胍、盐酸胍、碘化钠和高氯酸钠中至少一种。本文中的所指的裂解液各组分的“工作浓度”是指裂解液中的各组分，在与样本以及后续可能添加的其他试剂(如结合液)混合后的溶液中，对样本进行裂解时的终浓度。更优选地，所述强离子性离液盐为异硫氰酸胍。优选地，所述表面活性剂为tween20、triton-X100、Brij25和NP40中的至少一种；优选地，所述醇溶液为无水乙醇和异丙醇中的任意一种。需要强调的是，本专利技术实施例提供的裂解液并不包含蛋白酶，在裂解样本释放核酸时，也无需进行加热处理。该试剂盒是一种基于SPRI技术(逆向固相固载技术)的病毒核酸分离试剂盒，能够从200μL样本体积中高回收率地提取高纯度的病毒核酸，手动操作大约需要25分钟，对于有高通量提取需求的客户，可搭配使用市售常见自动化磁珠操作平台(如KingFisher、Biomeki5，Biomeki7)，每96个样本(一块板)可以在30分钟内完成提取。进行裂解时，将裂解液和样本混合即可，优选地，裂解温度为15～30℃。在一些实施例中，裂解温度可选自15℃、17℃、19℃、21℃、23℃、25℃、27℃、29℃和30℃范围内的任意温度。在一些实施例中，进行裂解的过程中，所述提取方法还包括在样本与裂解液的混合液中添加结合液和磁珠，以使所述磁珠对样本中的核酸进行吸附。优选地，所述提取方法还可以将裂解液、结合液、磁珠和样本同时混合，实现裂解和结合一步完成，在保证提取质量的同时，提高了提取效率，简化了操作流程。优选地，所述结合液为无水乙醇。混合时，结合液与样本的体积比为2：(1～5)；在一些实施例中，结合液和样本的体积比可以为2:1、2:2、2:3、2:4或2:5；优选为2:3；磁珠与样本的体积比为1：(5～15)。具体地，磁珠与样本的体积比可以为1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9或1:10，优选为1:10。优选地，吸附核酸后，所述提取方法还包括：富集磁珠，采用洗涤液对磁珠进行洗涤。“富集磁珠”的方法为现有技术，具体为采用磁性材料对磁珠进行捕获，在此不再赘述。洗涤的目的在于除去多余的污染物。优选地，所述洗涤液包括异丙醇、无水乙醇和水中的至少一种。具体地，当洗涤液包括异丙醇和水时，且异丙醇或无水乙醇和水的体积比为(90～70)：(10～30)。洗涤液中的水为不包含DNase和RNase的超纯水。优选地，所述洗涤液包括洗涤液I和洗涤液II。所述洗涤液I中还包括强离子性离液盐，具体添加浓度为0.05～0.6M。优选地，在洗涤液I中所述强离子性离液盐选自异硫氰酸胍、盐酸胍、碘化钠和高氯酸钠中至少一种，更优选为异硫氰酸胍。优选地，洗涤后，所述提取方法还包括采用洗脱液对所述磁珠上吸附的核酸进行洗脱，获取核酸样本。优选地，所述洗脱液包括以下组分：无DNase和RNase酶的无菌水、Tris缓冲液和TE缓冲液中的至少一种。优选地，所述Tris缓冲液为摩尔浓度为1～10mM的T本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸的提取方法，其特征在于，其包括采用裂解液对样本进行裂解；所述裂解液包括以下组分：工作浓度为0.5～6M的强离子性离液盐、工作浓度为0.5v/v％～10v/v％的表面活性剂、工作浓度10v/v％～50v/v％的醇溶液。/n

【技术特征摘要】
1.一种核酸的提取方法，其特征在于，其包括采用裂解液对样本进行裂解；所述裂解液包括以下组分：工作浓度为0.5～6M的强离子性离液盐、工作浓度为0.5v/v％～10v/v％的表面活性剂、工作浓度10v/v％～50v/v％的醇溶液。


2.根据权利要求1所述的核酸的提取方法，其特征在于，所述强离子性离液盐选自异硫氰酸胍、盐酸胍、碘化钠和高氯酸钠中至少一种；
优选地，所述表面活性剂为tween20、triton-X100、Brij25和NP40中的至少一种；
优选地，所述醇溶液为无水乙醇和异丙醇中的任意一种。


3.根据权利要求1所述的核酸的提取方法，其特征在于，裂解温度为15～30℃。


4.根据权利要求1～3任一项所述的核酸的提取方法，其特征在于，进行裂解的过程中或裂解后，所述提取方法还包括在样本与裂解液的混合液中添加结合液和磁珠，以使所述磁珠对样本中的核酸进行吸附；
优选地，所述结合液包括无水乙醇。


5.根据权利要求4所述的核酸的提取方法，其特征在于，吸附核酸后，所述提取方法还包括：富集磁珠，采用洗涤液对磁珠进行洗涤；
优选地，所述洗涤液包括异丙醇、无水乙醇和水中的至少一种。


6.根据权利要求5所述的核酸的提取方法，其特征在于，洗涤后，所述提取方法还包括采...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘莹，张博，宋昆，李毅，邵攀霖，程立，傅暘，杨烽，王光会，
申请(专利权)人：南方科技大学，
类型：发明
国别省市：广东;44