一种NAMPT基因修饰间充质干细胞外泌体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，包括以下步骤：a、构建NAMPT高表达慢病毒载体；b、将NAMPT高表达慢病毒质粒与vsvg包膜质粒、PCMV‑delta R8.2包装质粒共转染293T细胞，包装病毒，收集上清；c、用收集的病毒上清感染间充质干细胞，药筛后得到稳定高表达NAMPT基因间充质干细胞株；d、收集高表达NAMPT细胞株培养基，利用外泌体试剂盒提取，获得高表达NAMPT基因的间充质干细胞外泌体。本发明专利技术通过NAMPT的慢病毒载体在人脐带间充质干细胞中高表达进而使MSC来源的外泌体NAMPT高表达，从而使其具有有效的抗衰老作用。

【技术实现步骤摘要】
一种NAMPT基因修饰间充质干细胞外泌体的制备方法
本专利技术属于细胞工程
，特别是涉及一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法。
技术介绍
外泌体是一类直径在30-150nm之间的纳米级囊泡，可由许多类型的细胞分泌产生，其内容物包含蛋白质、DNA、miRNA、mRNA等，参与细胞间的物质交换和信息交流。外泌体可用于新型理想的无细胞疗法，可以作为天然载体来运输药物，还可以携带细胞释放的信息和物质来调控远端细胞的生物作用，也可以凭借作为细胞微环境中的重要成员成为疾病的预测、诊断、治疗的标志物。抗衰老领域是当今生命科学领域和社会领域的研究热点。2018年，美国北卡罗莱纳州立大学科学家研究表明，人真皮成纤维细胞分泌的外泌体可以更好地修复光老化引起的皮肤损伤。2019年6月，华盛顿大学医学院的研究人员发现了一种存在于人和小鼠等动物细胞内的烟酰胺磷酸核糖转移酶(eNAMPT)，当把年轻小鼠的eNAMPT注入老年小鼠时，可有效防止衰老相关的功能下降和疾病，甚至延长寿命。
技术实现思路
本专利技术主要解决的技术问本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：/na、构建NAMPT高表达慢病毒载体；/nb、将NAMPT高表达慢病毒质粒与vsvg包膜质粒、PCMV-delta R8.2包装质粒共转染293T细胞，包装病毒，收集上清；/nc、用收集的病毒上清感染间充质干细胞，药筛后得到稳定高表达NAMPT基因间充质干细胞株；/nd、收集高表达NAMPT细胞株培养基，利用外泌体试剂盒提取，获得高表达NAMPT基因的间充质干细胞外泌体。/n

【技术特征摘要】
1.一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
a、构建NAMPT高表达慢病毒载体；
b、将NAMPT高表达慢病毒质粒与vsvg包膜质粒、PCMV-deltaR8.2包装质粒共转染293T细胞，包装病毒，收集上清；
c、用收集的病毒上清感染间充质干细胞，药筛后得到稳定高表达NAMPT基因间充质干细胞株；
d、收集高表达NAMPT细胞株培养基，利用外泌体试剂盒提取，获得高表达NAMPT基因的间充质干细胞外泌体。


2.根据权利要求1所述的一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述NAMPT基因的核苷酸序列如SEQIDNo:1所示。


3.根据权利要求1所述的一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：所述步骤b中所述NAMPT高表达慢病毒质粒中慢病毒的元件顺序为CMV-MCS-3XFLAG-6xHis-IRES-puro。


4.根据权利要求1所述的一种NAMPT基因修饰的间充质干细胞外泌体的制备方法，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔恒宓，周琦琦，
申请(专利权)人：江苏易诺维生物医学研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32