一种无标记褪黑素膜受体MT1的细胞筛选模型及应用制造技术

本发明专利技术涉及无标记G蛋白偶联受体（GPCR）的细胞筛选模型构建方法及应用，具体地说是一种无标记褪黑素膜受体亚型MT1的细胞筛选模型。本发明专利技术基于无标记细胞整合药理学技术，利用MT1稳定表达的细胞系，建立了筛选MT1受体激动剂和拮抗剂的方法。此方法还可以用于研究影响MT1受体下游通路的调节剂。本发明专利技术构建的MT1细胞筛选模型不需要荧光标记且检测过程无需额外添加指示剂，具有靶点‑通路整合响应、对细胞无损伤、检测结果可靠、灵敏度高、筛选通量高及操作简便等特点。其用于从天然产物库、代谢产物库及组合化学库中寻找MT1受体的激动剂、拮抗剂和通路调节剂，及MT1受体参与的失眠、异常生理节律、情绪障碍及肿瘤相关疾病的药物筛选。

【技术实现步骤摘要】
一种无标记褪黑素膜受体MT1的细胞筛选模型及应用
本专利技术涉及无标记GPCR细胞筛选模型的构建方法，具体地说是一种无标记褪黑素膜受体MT1的细胞筛选模型及应用。
技术介绍
G蛋白偶联受体（G-protein-coupledreceptor,GPCR）是细胞信号传导中最重要的一类膜受体，也是小分子药物开发中最受关注的药物靶点之一，约34％的现代药物直接靶向该受体家族[Hauser,A.S.,etal.,NatureReviewsDrugDiscovery2017,16,829-842.]。褪黑素膜受体（MT1）属于GPCR家族的一员，于1994年首次从青蛙、羊和人克隆出MT1受体，由350个氨基酸组成[EbisawaT.,etal.,ProcNatlAcadSciUSA1994,91,6133–6137；ReppertSM.,etal.,Neuron1994,13,1177–1185.]。MT1受体在大脑，心血管系统（包括外周血管，主动脉和心脏），免疫系统，睾丸，卵巢，皮肤，肝脏，肾脏，肾上腺皮质，胎盘，乳腺，视网膜，胰腺和脾脏中均有表达[Du本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种无标记褪黑素膜受体MT1的细胞筛选模型，其特征在于：基于无标记细胞整合药理学技术，利用稳定表达MT1的细胞系CHO-MT1，借助于已知的MT1受体激动剂和拮抗剂，建立MT1受体的细胞筛选模型。/n

【技术特征摘要】
1.一种无标记褪黑素膜受体MT1的细胞筛选模型，其特征在于：基于无标记细胞整合药理学技术，利用稳定表达MT1的细胞系CHO-MT1，借助于已知的MT1受体激动剂和拮抗剂，建立MT1受体的细胞筛选模型。


2.根据权利要求1所述的一种无标记褪黑素膜受体MT1的细胞筛选模型，其特征在于：在细胞兼容的具有光学生物传感功能的384微孔板中接种CHO-MT1细胞，接种的细胞密度为1.0~4.5×104个/孔，细胞培养液体积为40µL/孔，接种后细胞培养时间为18~24h。


3.按照权利要求1所述的一种无标记褪黑素膜受体MT1的细胞筛选模型，其特征在于：具体包括以下步骤：
[1]将溶解在HBSS缓冲盐中的MT1受体激动剂褪黑素以浓度为0.01~50000nM加入到接种CHO-MT1细胞的384微孔板中，检测其DMR特征信号谱；
[2]将溶解在HBSS缓冲盐中的MT1受体拮抗剂Luzindole以浓度为0.01~100000nM加入到接种CHO-MT1细胞的384微孔板中，检测其DMR特征信号谱；
[3]再向步骤[1][2]中加入了褪黑素和Luzindole的细胞板中继续加入与具有最高响应强度对应的最低浓度的褪黑素，分别检测脱敏DMR特征信号谱和拮抗DMR特征信号谱；
[4]获得的所有DMR特征信号谱具有浓度-响应依赖关系且具有灵敏性、饱和性及特异性的特点。


4.根据权利要求1所述的一种无标记褪黑素膜受体MT1的细胞筛选模型，其特征在于，待测样品具有激动活性的筛选步骤如下：：
[1]将溶解在HBSS缓冲盐中的MT1受体激动剂褪黑素以浓度为0.01~50000nM加入到接种CHO-MT1细胞的384微孔板中，检测其DMR特征信号谱；
[2]将待测样品以0.01nM~100µM加入到接种CHO-MT1细胞的微孔板中，检测其DMR信号谱；
[3]关联分析步骤[1]和步骤[2]中的DMR信号谱，若步骤[2]的DMR信号谱与[1]中的DMR特征谱具有轮廓相似性，则进行下一步骤；
[4]将MT1受体拮抗剂Luzind...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁鑫淼，单彩龙，王纪霞，侯滔，薛珍珍，陆金立，
申请(专利权)人：泰州医药城国科化物生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32