一种永生化麝鼠香腺成纤维细胞的构建方法技术

本发明专利技术提供了一种永生化麝鼠香腺成纤维细胞的构建方法，解决了现有技术中麝鼠香腺细胞体外培养易凋亡的问题。该方法包括下述步骤：(1)在8月份麝鼠泌香盛期，采集雄性成年麝鼠香腺组织，将香腺组织剪碎并进行体外培养，获得麝鼠香腺成纤维细胞；将麝鼠香腺成纤维细胞进行慢病毒转染，获得转染的麝鼠香腺成纤维细胞；(2)将步骤(1)中得到的转染的麝鼠香腺成纤维细胞通过嘌呤霉素筛选出转染成功的麝鼠香腺成纤维细胞；(3)对筛选出的转染成功的麝鼠香腺成纤维细胞进行扩增培养，即可获得永生化麝鼠香腺成纤维细胞。本发明专利技术提供的永生化麝鼠香腺成纤维细胞的构建方法，采用慢病毒转染的方式永生化麝鼠香腺成纤维细胞，培养14代以后完全能保持成纤维细胞的特性，克服了体外培养成纤维细胞凋亡的缺点。

【技术实现步骤摘要】
一种永生化麝鼠香腺成纤维细胞的构建方法
本专利技术涉及一种永生化麝鼠香腺成纤维细胞的构建方法。
技术介绍
麝香是传统中药的重要成分。《中国药典》2020年版记载，麝香具有开窍醒神，活血通经，消肿止痛的功效。现代药学著作均视麝香为药材之珍品。在中成药及成药的实际应用中，麝香常居牛黄、犀角、熊胆等名贵动物药材之首。《全国中成药处方集》收载的2621个处方中，含麝香的处方就有295个。但是天然麝香的产量极低，每头雄性林麝每年只能产15克左右，因此麝香就显得极其珍贵，市场价格在黄金的3倍以上。近年来，由于天然麝香等动物药资源不足，国内外都在寻找新的资源。麝鼠香是麝香鼠分泌的麝香，可入药使用。主要是由麝鼠香中含有与天然麝香相同的麝香酮、降麝香酮、烷酮等主要成分，其减慢心率的作用更明显，具有抗炎耐缺氧、降血压、消炎、抗应敏、雄性激素等作用。麝鼠香资源分布广，数量较大，易饲养，好管理，并含有类似麝香的特性和成分，已引起学术界的广泛关注。本申请人发现现有技术至少存在以下技术问题：1、现有技术中麝鼠香腺成纤维细胞体外培养最多到第6代的时候本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种永生化麝鼠香腺成纤维细胞的构建方法，其特征在于：包括下述步骤：/n(1)在8月份麝鼠泌香盛期，采集雄性成年麝鼠香腺组织，将香腺组织剪碎并进行体外培养，获得麝鼠香腺成纤维细胞，将麝鼠香腺成纤维细胞进行慢病毒转染，获得转染的麝鼠香腺成纤维细胞；/n(2)将步骤(1)中得到的转染的麝鼠香腺成纤维细胞通过嘌呤霉素筛选出转染成功的麝鼠香腺成纤维细胞；/n(3)对筛选出的转染成功的麝鼠香腺成纤维细胞进行扩增培养，即可获得永生化麝鼠香腺成纤维细胞。/n

【技术特征摘要】
1.一种永生化麝鼠香腺成纤维细胞的构建方法，其特征在于：包括下述步骤：
(1)在8月份麝鼠泌香盛期，采集雄性成年麝鼠香腺组织，将香腺组织剪碎并进行体外培养，获得麝鼠香腺成纤维细胞，将麝鼠香腺成纤维细胞进行慢病毒转染，获得转染的麝鼠香腺成纤维细胞；
(2)将步骤(1)中得到的转染的麝鼠香腺成纤维细胞通过嘌呤霉素筛选出转染成功的麝鼠香腺成纤维细胞；
(3)对筛选出的转染成功的麝鼠香腺成纤维细胞进行扩增培养，即可获得永生化麝鼠香腺成纤维细胞。


2.根据权利要求1所述的永生化麝鼠香腺成纤维细胞的构建方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述慢病毒转染为SV40病毒转染。


3.根据权利要求1所述的永生化麝鼠香腺成纤维细胞的构建方法，其特征在于：所述步骤(1)中，将麝鼠香腺成纤维细胞进行慢病毒转染的具体步骤为：
A1、将麝鼠香腺成纤维细胞接种于6孔板上，每孔细胞数为0.8×105-1.2×105个；培养基为成纤维完全培养基；
A2、20-30h后，待细胞贴壁后，更换新的成纤维完全培养基；
A3、加入1mL成纤维完全培养基，再加20μLSV40过表达慢病毒，混匀后继续培养；
A4、12h后观察细胞状态，并更换为新鲜的成纤维完全培养基，当细胞长满板底后，传代至T25培养瓶中，细胞扩增3-4代，获得转染的麝鼠香腺成纤维细胞。


4.根据权利要求1-3中任意一项所述的永生化麝鼠香腺成纤维细胞的构建方法，其特征在于：所述步骤(2)中，将转染的麝鼠香腺成纤维细胞通过嘌呤霉素筛选出转染成功的麝鼠香腺成纤维细胞的具体步骤为：
B1、确定嘌呤霉素的使...

【专利技术属性】
技术研发人员：竭航，赵春容，郑程莉，曾德军，赵贵军，封孝兰，张承露，周磊，吴佳勇，
申请(专利权)人：重庆市药物种植研究所，
类型：发明
国别省市：重庆;50