一种构建KLF12高表达小鼠的方法及在构建非叶酸依赖的神经管缺陷小鼠模型的应用技术

本发明专利技术公开了一种构建KLF12高表达小鼠的方法及在构建非叶酸依赖的神经管缺陷(neural tube defects,NTDs)小鼠模型的应用，其包括根据Klf12基因序列，利用Cre‑loxP基因重组技术，构建Rosa26

【技术实现步骤摘要】
一种构建KLF12高表达小鼠的方法及在构建非叶酸依赖的神经管缺陷小鼠模型的应用
本专利技术属于生物
，涉及一种构建Krüppel-likefactor12(KLF12)高表达小鼠的方法及在构建非叶酸依赖的神经管缺陷小鼠模型的应用。
技术介绍
神经管缺陷(neuraltubedefects,NTDs)是一种常见的胎儿严重畸形，因妊娠前四周神经管未能完全闭合所致。根据解剖学特点，NTDs主要分为无脑儿、脊膨出、脑膨出和脊柱裂等类型。人们已经证实，叶酸能够参与DNA修复、核苷酸合成和甲基化反应等生物学过程，其缺乏是造成NTDs的主要原因之一。得益于叶酸服用的普及，我国NTDs发生率由1996年的13.6/万，下降至2011年的4.5/万。虽然成效显著，但由于我国人口基数大，每年新增NTDs总例数仍然庞大，这些补充叶酸仍不能避免发生的NTDs病例给家庭和社会造成了严重负担，是全面实现“健康中国”亟待解决的问题之一，有待进一步研究。因此，为了针对非叶酸依赖的NTDs实施有效的诊断及治疗，开发用于非叶酸依赖的NTDs的机理研究与治疗方法研究的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种构建KLF12条件性高表达小鼠的方法，其特征在于：根据Klf12基因序列，利用Cre-loxP基因重组技术，构建Rosa26

【技术特征摘要】
1.一种构建KLF12条件性高表达小鼠的方法，其特征在于：根据Klf12基因序列，利用Cre-loxP基因重组技术，构建Rosa26Klf12/Klf12小鼠，包括如下步骤，
(1)根据Klf12基因，构建打靶载体，所述打靶载体的序列如SEQIDNO.1所示；
(2)ES细胞筛选：复苏MEFs，制作Feeder，复苏ES并传代，用所述打靶载体进行电转，加抗生素筛选后培养，筛选3’和5’端均阳性的克隆细胞；
(3)囊胚注射：体外培养2.5d的胚胎，囊胚注射步骤(2)中筛选的3’和5’端均阳性的克隆细胞至胚胎内，体外培养后移植到假孕雌鼠体内，至嵌合鼠诞生作为Funder鼠配种繁殖，通过基因型鉴定可得Rosa26Klf12/Klf12小鼠。


2.如权利要求1所述的构建KLF12条件性高表达小鼠的方法，其特征在于：使用的序列还包括如SEQIDNO.9～SEQIDNO.21所示序列中的一种或几种。


3.如权利要求1所述的构建KLF12条件性高表达小鼠的方法，其特征在于：所述构建打靶载体，其步骤为，
根据Klf12基因，获得线性化套取载体，电转BAC到EL350中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙海翔，颜桂军，刘洋，
申请(专利权)人：南京鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32