免疫刺激组合物及其用途制造技术

本发明专利技术提供了一种免疫刺激组合物，其包含皂苷和CpG寡聚脱氧核苷酸或者其由包含皂苷的佐剂和CpG寡聚脱氧核苷酸组成，其中，所述CpG寡聚脱氧核苷酸序列中具有两个或两个以上拷贝的5’‑TTCGTT‑3’基序或5’‑TCGTCGTCG‑3’基序。本发明专利技术提供了所述免疫刺激组合物在制备用于治疗疾病的药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】
免疫刺激组合物及其用途
本专利技术属于生物制药领域。具体地，本专利技术涉及一种免疫刺激组合物，所述免疫刺激组合物包含皂苷和CpG寡聚脱氧核苷酸，或者所述免疫刺激组合物由包含皂苷的佐剂和CpG寡聚脱氧核苷酸组成。其中，所述CpG寡聚脱氧核苷酸序列具有两个或两个以上拷贝的5’-TTCGTT-3’基序或5’-TCGTCGTCG-3’基序。本专利技术还涉及所述免疫刺激组合物的制药用途。
技术介绍
CpG寡聚脱氧核苷酸是近年来发现的一类新型免疫刺激剂，其化学本质为含有胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸的脱氧寡核苷酸，具有与天然CpG模式识别受体相似的免疫反应，能与细胞膜上的Toll样受体结合，通过TLR9信号通路有效引发哺乳动物免疫反应。CpG引起的免疫反应以Th1型为主，可诱导Th2型免疫应答向Th1转换，从而激发细胞免疫。通过激活T细胞、B细胞、NK细胞等免疫活性细胞，大量地产生多种细胞因子，从而增强机体的特异性和非特异性免疫效应，是连接天然免疫和获得性免疫的重要纽带。皂苷是苷元为三萜或螺旋甾烷类化合物的一类糖苷，属植物来源佐剂。其中，皂树皂苷(QS)是从皂树中提取得到的皂苷，在QS系列中QS-21是目前报道最广泛的一类佐剂，但QS-21可诱导细胞溶血，有一定系统毒副作用和局部的毒副作用。Alving等(ALVINGCR,MATYASG,BECKZ,etal.RevueRoumainedeChimie,2016,61(8):631-635.)研究发现，以ALF脂质体结合MPLA和QS-21作为佐剂对抗HIVgp140蛋白可有效增加血清中抗体滴度。Ng等(NGH,FERNANDOGJP,DEPELSENAIREACI,etal.ScientificReports,2016,6(1):228-230.)使用一种皮下传递技术-纳米贴片，与QS-21构成佐剂复合物。结果表明，纳米贴片与传统肌内注射相比，可显著减少抗原和QS-21的使用剂量以及诱导更高的IgG滴度(韩子怡，曾忠良，现代农业科技，2019(14):220-221.)。现有技术(WO2001051083A3)曾报道关于包含皂苷与CpG寡聚脱氧核苷酸的免疫刺激组合物，其中CpG寡聚脱氧核苷酸涉及CpG1826和CpG7909。然而，由于CpG寡聚脱氧核苷酸具备结构多样性，不同序列的CpG佐剂间的效果差异巨大。因此，当前对免疫效果更强的佐剂以及药物存在需求。
技术实现思路
针对现有技术的不足，专利技术人在进行了大量研究之后，出乎意料的发现了免疫效果更强的免疫刺激组合物，在所述组合物中，皂苷和CpG寡聚脱氧核苷酸之间表现出高效的协同作用，可以介导更强烈的免疫应答。将所述免疫刺激组合物应用于不同的抗原或抗原组合物中，均具有显著性优势。因此，本专利技术的一个目的是提供一种免疫刺激组合物，所述组合物可用于制备多种药物，以获得高效的免疫刺激原性。本专利技术的另一个目的是提供一种疫苗佐剂，所述疫苗佐剂能强烈地引发哺乳动物的免疫反应。本专利技术的目的是通过以下技术方案实现的：一方面，本专利技术提供了一种免疫刺激组合物，所述免疫刺激组合物包含皂苷和CpG寡聚脱氧核苷酸，或者由包含皂苷的佐剂和CpG寡聚脱氧核苷酸组成，其中所述CpG寡聚脱氧核苷酸序列具有两个或两个以上拷贝的5’-TTCGTT-3’基序或5’-TCGTCGTCG-3’基序。根据本专利技术所述的免疫刺激组合物，其中，所述CpG寡聚脱氧核苷酸的序列选自以下中的任一种：CpGT1：TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT(SEQIDNO:6)、CpGT2：TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT(SEQIDNO:7)和CpGT3：TCGTCGTCGTCGTCGTCGTCG(SEQIDNO:8)。优选地，所述CpG寡聚脱氧核苷酸的序列为CpGT1：TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT(SEQIDNO:6)。根据本专利技术所述的免疫刺激组合物，其中，所述皂苷选自皂树皂苷、人参皂苷、桔梗皂苷、黄芪皂苷、三七皂苷、甘草皂苷、合欢皮皂苷、麦冬皂苷、柴胡皂苷或竹节参皂苷的一种或多种；优选地，所述皂苷为皂树皂苷、人参皂苷、桔梗皂苷或黄芪甲苷；更优选地，所述皂树皂苷为QS-7、QS-17、QS-18或QS-21；更优选地，所述皂树皂苷为QS-21；所述人参皂苷可以为人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rb1或人参皂苷Re；所述桔梗皂苷为桔梗皂苷D、桔梗皂苷D2或其两者的混合物；所述黄芪皂苷可以为黄芪甲苷(黄芪皂苷IV)、黄芪皂苷I、黄芪皂苷II或其中两种或两种以上皂苷单体的混合物；所述三七皂苷可以为三七皂苷R1；所述麦冬皂苷可以为麦冬皂苷D；所述柴胡皂苷可以为柴胡皂苷a、柴胡皂苷d或其两者的混合物；所述合欢皮皂苷可以为合欢皮总皂苷；所述甘草皂苷可以为甘草总皂苷；所述竹节参皂苷可以为竹节参总皂苷。根据本专利技术所述的免疫刺激组合物，其中，所述包含皂苷的佐剂为免疫刺激复合物佐剂(Iscom佐剂)。根据本专利技术所述的免疫刺激组合物，其中，所述CpG寡聚脱氧核苷酸包含硫代磷酸酯连接。特别地，所述CpG寡聚脱氧核苷酸为硫代寡聚脱氧核苷酸，优选为全硫代寡聚脱氧核苷酸。根据本专利技术所述的免疫刺激组合物，其中，所述CpG寡聚脱氧核苷酸与所述皂苷的重量比为1～40∶0.1～2，优选为2～40∶0.1～2，进一步优选为2∶1。另一方面，本专利技术还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含所述免疫刺激组合物，以及抗原或抗原组合物。根据本专利技术所述的药物组合物，其中，所述抗原或抗原组合物选择下述中任一种：人体免疫缺陷病毒，人疱疹病毒，水痘-带状疱疹病毒，人体细胞肥大病毒，甲、乙、丙或戊型肝炎病毒，呼吸合胞体病毒，人体乳头状瘤病毒，流感病毒，结核分枝杆菌，沙门氏菌，奈瑟菌如脑膜炎奈瑟菌或淋病奈瑟菌，疏螺旋体属如回归热螺旋体或杜通氏螺旋体，衣原体属如沙眼衣原体，博德特氏杆菌属如百日咳博德特氏菌，疟原虫属如恶性疟原虫(Plasmodiumfalciparum)、三日疟原虫(Plasmodiummalariae)、卵形疟原虫(Plasmodiumovale)、间日疟原虫(Plasmodiumvivax)或诺氏疟原虫(Plasmodiumknowlesi)或弓形虫属如弓形虫。根据本专利技术所述的药物组合物，其中，所述人疱疹病毒是HSV1或HSV2。根据本专利技术所述的药物组合物，其中，所述抗原为肿瘤抗原。再一方面，本专利技术提供了一种疫苗，所述疫苗包含所述免疫刺激组合物。根据本专利技术所述的疫苗，其中所述疫苗为用于预防病毒、细菌和/或寄生虫感染的疫苗，或所述疫苗为以免疫疗法治疗病毒、细菌和/或寄生虫感染的疫苗。再一方面，本专利技术提供了所述免疫刺激组合物在制备用于引起细胞溶解的T细胞应答的药物中的用途。在一些具体实施方案中，本专利技术提供了所述免疫刺激组合物在制备用于在哺乳动物中诱发干扰素γ应答的药物中的用途。在一些具体实施方案中，本专利技术提供了所述免疫刺激组合物在制备用于预防病毒、细菌和/本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种免疫刺激组合物，其包含皂苷和CpG寡聚脱氧核苷酸，或者其由包含皂苷的佐剂和CpG寡聚脱氧核苷酸组成，其中所述CpG寡聚脱氧核苷酸序列具有两个或两个以上拷贝的5’-TTCGTT-3’基序或5’-TCGTCGTCG-3’基序。/n

【技术特征摘要】
20191213 CN 20191127953601.一种免疫刺激组合物，其包含皂苷和CpG寡聚脱氧核苷酸，或者其由包含皂苷的佐剂和CpG寡聚脱氧核苷酸组成，其中所述CpG寡聚脱氧核苷酸序列具有两个或两个以上拷贝的5’-TTCGTT-3’基序或5’-TCGTCGTCG-3’基序。


2.根据权利要求1所述的免疫刺激组合物，其中，所述CpG寡聚脱氧核苷酸的序列选自以下中的任一种：CpGT1：TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT(SEQIDNO:6)、CpGT2：TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT(SEQIDNO:7)和CpGT3：TCGTCGTCGTCGTCGTCGTCG(SEQIDNO:8)；
优选地，所述CpG寡聚脱氧核苷酸的序列为CpGT1：TCGTTCGTTCGTTCGTTCGTT(SEQIDNO:6)。


3.根据权利要求1或2所述的免疫刺激组合物，其中，所述皂苷选自皂树皂苷、人参皂苷、桔梗皂苷、黄芪皂苷、三七皂苷、甘草皂苷、合欢皮皂苷、麦冬皂苷、柴胡皂苷或竹节参皂苷中的一种或多种。


4.根据权利要求3所述的免疫刺激组合物，其中，所述皂树皂苷为QS-7、QS-17、QS-18或QS-21，优选地，所述皂树皂苷为QS-21；所述人参皂苷为人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg3、人参皂苷Rb1或人参皂苷Re；所述桔梗皂苷为桔梗皂苷D、桔梗皂苷D2或其两者的混合物；所述黄芪皂苷为黄芪甲苷、黄芪皂苷I、黄芪皂苷II或其中两种或两种以上皂苷单体的混合物；所述三七皂苷为三七皂苷R1；所述麦冬皂苷为麦冬皂苷D；所述柴胡皂苷为柴胡皂苷a、柴胡皂苷d或其两者的混合物；所述合欢皮皂苷为合欢皮总皂苷；所述甘草皂苷为甘草总皂苷；所述竹节参皂苷为竹节参总皂苷。


5.根据权利要求1至4中任一项所述的免疫刺激组合物，其中所述包含皂苷的佐剂为Iscom佐剂。


6.根据权利要求1至5中任一项所述的免疫刺激组合物，其中所述CpG寡聚脱氧核苷酸包含硫代磷酸酯连接。


7.根据权利要求5所述的免疫刺激组合物，其中所述CpG寡聚脱氧核苷酸是全硫代寡聚脱氧核苷酸。


8.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛君，李建强，孙娇娇，周童，任苏林，顾月，黄红颖，王世伟，黄精俸，
申请(专利权)人：远大赛威信生命科学南京有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32