促骨形成肽在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的功能性食品、保健品或药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及促骨形成肽在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的功能性食品、保健品或药物中的应用。该促骨形成肽的氨基酸序列为：GPAGPHGPVG。本发明专利技术提供的促骨形成肽具有较好的促进成骨细胞增殖活性，可促进成骨细胞ALP表达，有利于成骨细胞的分化和矿化，且安全无毒，在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的功能性食品、保健品或药物中有较好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
促骨形成肽在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的功能性食品、保健品或药物中的应用
本专利技术属于生物材料
，具体涉及促骨形成肽在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的功能性食品、保健品或药物中的应用。
技术介绍
我国是全球最大罗非鱼养殖加工国，2016年养殖产量达158万吨，约占同年全球总产量的13％，此中大部分罗非鱼被用于鱼片加工。据统计，罗非鱼加工过程中产生的副产物可占所用鱼体总质量的54％，然而我国目前对加工副产物合理利用率较低，不但造成了生物资源浪费，也为环境增加负担。因此，开发利用罗非鱼副产物具有丰富的原料基础和广阔的应用前景。专利CN109265536A从罗非鱼骨架中酶解得到一种钙螯合肽，该钙螯合肽具有较好的钙螯合活性，钙螯合能力达43.018mg/g。但目前此类研究还较少。因此，开发更多罗非鱼加工副产物的用途以对其合理利用具有重要的经济意义和应用价值。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有关于罗非鱼加工副产物的生物利用度的研究缺乏的缺陷或不足，提供促骨形成肽在制备治疗骨质疏松症药物中的应用。本专利技术从罗非鱼鳞中分离得到一种多肽，该多肽不仅具有较好的钙螯合能力，还具有较好的促进成骨细胞增殖活性，可促进成骨细胞ALP表达，有利于成骨细胞的分化和矿化，且安全无毒，在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的功能性食品、保健品或药物中有较好的应用前景。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案：促骨形成肽在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的功能性食品、保健品或药物中的应用，所述促骨形成肽的氨基酸序列为：GPAGPHGPVG(Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-His-Gly-Pro-Val-Gly)。本专利技术在对罗非鱼鳞进行酶解时，意外发现序列为GPAGPHGPVG的多肽，其序列与专利CN109265536A中报道的钙螯合肽的序列一致。对其生物活性进行研究时，发现其不仅具有较佳的钙螯合能力，还具有较好的促进成骨细胞增殖活性，可促进成骨细胞ALP表达，有利于成骨细胞的分化和矿化，且安全无毒，在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的功能性食品、保健品或药物中有较好的应用前景。优选地，所述促骨形成肽的质荷比为414.6975。优选地，所述促骨形成肽与EGFR的氢键作用包括ARG285、GLN8、GLY317或SER11中的一种或几种。优选地，所述促骨形成肽与EGFR的疏水相互作用包括ASP344、GLN408、GLY39、GLY410、GLY9、HIS346、HIS409、ILE318、LEU38、LYS407、PHE380、THR10或THR406中的一种或几种。优选地，所述促骨形成肽在制备治疗骨质疏松症药物中的应用。优选地，所述药物包括药学上可接受的盐、载体和/或赋形剂。优选地，所述功能性食品为奶粉或液态乳制品。优选地，所述保健品为钙片、液态钙或口服液。优选地，所述促骨形成肽以促骨形成肽及其衍生物或可药用盐的形式添加至功能性食品、保健品或药物中。促骨形成肽既可按照专利CN109265536A中报道的方法分离得到，也可通过如下过程制备得到：S1、将罗非鱼鳞用蒸馏水重复洗三次，把杂质去除；S2、碱洗脱脂：将罗非鱼鳞放入0.1mol/LNaOH溶液(w/v1:10)搅拌24h，清洗至中性；S3、脱钙处理：将罗非鱼鳞放入10％EDTA-2Na(pH7.2，w/v1:10)中，并置于4℃冷库中，期间进行搅拌处理5天，随后将鱼鳞清洗至中性后待用；S4、酸处理：将脱钙后的罗非鱼鳞用质量分数4％的盐酸处理时间18h后水洗至中性，即得到罗非鱼鳞胶原蛋白；将水洗至中性的罗非鱼鳞胶原蛋白中水分滴干，随后置于55℃烘箱中烘干，取出置于密封袋中备用；S5、酶解：选用木瓜蛋白酶进行酶解即得，料液比为8％，酶解时间为2h，酶底比为0.3％，pH为7，温度为60℃。与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的促骨形成肽具有较好的促进成骨细胞增殖活性，可促进成骨细胞ALP表达，有利于成骨细胞的分化和矿化，且安全无毒，在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的功能性食品、保健品或药物中有较好的应用前景。附图说明图1为EGFR几何与对接盒(PDBID:1IVO)；图2为GPAGPHGPVG和EGFR之间的交互作用三维图；图3为GPAGPHGPVG和EGFR相互作用2D图；其中，绿色虚线：氢键相互作用；数：键长；红堡：疏水相互作用；图4为不同浓度的GPAGPHGPVG的增殖效果图；图5为GPAGPHGPVG的ALP酶活效果图；图6为GPAGPHGPVG的矿化效果图；图7为GPAGPHGPVG的肽谱图。具体实施方式下面结合实施例进一步阐述本专利技术。这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。下例实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照本领域常规条件或按照制造厂商建议的条件；所使用的原料、试剂等，如无特殊说明，均为可从常规市场等商业途径得到的原料和试剂。本领域的技术人员在本专利技术的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本专利技术所要求保护的范围。实施例1促骨形成肽的分离制备本实施例提供一种促骨形成肽，其氨基酸序列为：GPAGPHGPVG(Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-His-Gly-Pro-Val-Gly)。该促骨形成肽可从罗非鱼鳞中分离得到，具体过程如下：(一)罗非鱼鳞的预处理(1)将罗非鱼鳞用蒸馏水重复洗三次，把杂质去除。(2)碱洗脱脂：将罗非鱼鳞放入0.1mol/LNaOH溶液(w/v1:10)搅拌24h，清洗至中性。(3)脱钙处理：将罗非鱼鳞放入10％EDTA-2Na(pH7.2，w/v1:10)中，并置于4℃冷库中，期间进行搅拌处理5天，随后将鱼鳞清洗至中性后待用。(4)酸处理：将脱钙后的罗非鱼鳞用质量分数4％的盐酸处理时间18h后水洗至中性，即得到罗非鱼鳞胶原蛋白；将水洗至中性的罗非鱼鳞胶原蛋白中水分滴干，随后置于55℃烘箱中烘干，取出置于密封袋中备用。(二)罗非鱼鳞钙结合肽的酶解实验在料液比，8％，酶底比0.3％，pH7下60℃水浴酶解2h，100℃灭酶10mim后，4000r/min离心20min，取上清，冷冻干燥。(三)罗非鱼鳞钙结合肽的富集将冻干的罗非鱼鳞钙结合肽，加入蒸馏水形成5mg/mL体系，按肽钙比1:1加入无水氯化钙后，调节pH8，47℃水浴下螯合42min，螯合反应结束后，加入反应体系5倍体积的无水乙醇，4000r/min离心20min，弃上清，取沉淀，冷冻干燥。(1)质谱序列：将富集的罗非鱼鳞钙结合肽利用HPLC-MS/MS对罗非鱼鳞钙结合肽分析。HPLC-MS/MS法处理过程及条件如下：将C18除盐柱在平衡液(50％ACN)中吹打5次，用Washingb本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.促骨形成肽在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的功能性食品、保健品或药物中的应用，其特征在于，所述罗非鱼鳞促骨形成肽的氨基酸序列为：GPAGPHGPVG。/n

【技术特征摘要】
1.促骨形成肽在制备促进成骨细胞增殖、分化或矿化的功能性食品、保健品或药物中的应用，其特征在于，所述罗非鱼鳞促骨形成肽的氨基酸序列为：GPAGPHGPVG。


2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述促骨形成肽的质荷比为423.2168。


3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述促骨形成肽与EGFR的氢键作用包括ARG285、GLN8、GLY317或SER11中的一种或几种。


4.根据权利要求1所述促骨形成肽，其特征在于，所述促骨形成肽与EGFR的疏水相互作用包括ASP344、GLN408、GLY39、GLY410、GLY9、HIS346、HIS409、ILE318、L...

【专利技术属性】
技术研发人员：苗建银，黄文，李紫微，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东;44