本发明专利技术公开了促益生菌生长和降血糖的糖基化鱼皮蛋白肽，按质量计，包括以下原料：10～12份蛋白肽、1份低聚半乳糖通过糖基化反应生产糖基化鱼皮蛋白肽；所述蛋白肽中氨基酸序列为：Ala‑Gly‑Pro‑Arg‑Gly‑Pro‑Ala‑Gly‑Pr o‑Ile‑Asn,Gly‑Asp‑Glu‑Ile‑Pro‑Ala‑Gly‑Ser‑Pro‑His的肽达到50％以上。本发明专利技术还公开了提供上述糖基化鱼皮蛋白肽的制备方法。本发明专利技术的有益效果是：(1)本发明专利技术利用鳕鱼皮和低聚半乳糖开发的糖基化鱼皮蛋白肽整个加工过程中没有添加酸或碱进行pH的调整，产品保持较好的功能特性；(2)开发的糖基化鱼皮蛋白肽具有较好的促进益生菌生长和降血糖作用；(3)本发明专利技术利用特定频率超声波结合超高压技术处理的蛋白液，明显改善鱼皮蛋白对酶的敏感性，酶解液中蛋白质含量为11％以上，降低酶的使用量。
【技术实现步骤摘要】
促益生菌生长和降血糖的糖基化鱼皮蛋白肽及其制备方法
本专利技术涉及鱼皮蛋白肽领域，尤其涉及促益生菌生长和降血糖的糖基化鱼皮蛋白肽及其制备方法。
技术介绍
益生菌是一类对人体健康具有重大意义的微生物。常见有双歧杆菌属、乳杆菌属、乳球菌属、嗜热链球菌属等乳酸菌。益生菌具有促进机体吸收营养物质，提高机体免疫力，提高机体抗氧化水平，抑制肠道炎症等功能，对人体健康具有重要作用，如何高效促进益生菌的生长成为产业需要解决的问题。目前有许多研究报道，功能性低聚糖可以选择性地促进乳酸菌的增殖，常见的功能性低聚糖有大豆低聚糖、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖等。近些年来，随着对人类健康研究的深入和物质分离纯化、鉴定技术的进步，介于氨基酸单体与大分子蛋白质之间的多肽的生理功能日益赢得科学界关注。依据肽的原料来源，外源性生物活性肽可分为动物源、植物源、微生物源活性肽等。生物活性肽的众多来源中，水生生物凭借资源丰富、生理结构和生理功能与陆生生物差别较大的特点，成为外源性生物活性肽资源的宝库。目前水生生物活性肽，发现了一系列具有抗氧化、降血压、降血糖、抗肿瘤等生理功能的活性肽。但关于蛋白肽与低聚糖结合对益生菌生长及降血糖的作用未见相关的公开文件报道。本专利技术针对目前我国鱼皮蛋白资源没有得到充分利用，并根据鱼皮蛋白的结构特性，以鱼皮为原料，通过对鱼皮超高压、高频超声波等预处理，在不添加任何酸和碱条件下，利用多种蛋白复合酶进行分步酶解，通过膜分离、凝胶分离及反相HPLC分离技术，糖基化改性技术，开发了富含具有特定氨基酸多肽序列为Ala-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ile-Asn,Gly-Asp-Glu-Ile-Pro-Ala-Gly-Ser-Pro-His的具有促进益生菌生长和降血糖功能的糖基化鱼皮蛋白肽，以及具有特定功能的糖基化鱼皮蛋白肽的制备方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种以鱼皮为原料制备具有促进益生菌生长和降血糖的糖基化鱼皮蛋白肽，该蛋白肽具有较好的促进益生菌生长和降血糖作用。促益生菌生长和降血糖的糖基化鱼皮蛋白肽，其特征在于，按质量计，包括以下原料：10～12份蛋白肽、1份低聚半乳糖；所述蛋白肽中氨基酸序列为：Ala-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ile-Asn,Gly-Asp-Glu-Ile-Pro-Ala-Gly-Ser-Pro-His的蛋白肽有50％以上。本专利技术另一目的是提供上述糖基化鱼皮蛋白肽的制备方法，按质量计，包括如下步骤：步骤(1)：选用1份鳕鱼皮，清洗后将鳕鱼皮打成浆，然后加入0.5～2.0份水，加热至110～125℃煮制60～120分钟，然后除去上层脂肪，得到去脂的蛋白液；步骤(2)：将步骤(1)得到的蛋白液，温度调整到70～80℃，然后进行频率为120～140kHz的超声波处理20～30分钟，再进行压力为80～140MPa的高静水压力处理10～30分钟；步骤(3)：调节步骤(2)得到的蛋白液中蛋白含量到10～12％，然后进行分步酶解，第一步加入蛋白液中蛋白质量0.4～0.8％的第一复合蛋白酶，在50～60℃条件下进行酶解反应0.5～2.0h；第一复合蛋白酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶，其中碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶的质量比为1～2：1：0.5；第二步加入蛋白液中蛋白质量0.1～0.3％的第二复合蛋白酶，在50～60℃条件下进行酶解反应0.2～1.0h，第二复合蛋白酶包括菠萝蛋白酶、风味蛋白酶，其中菠萝蛋白酶、风味蛋白酶的质量比为1～2：1；在90～95℃下保温10～20分钟，然后冷却至室温，然后进行过滤分离，收集分离液；步骤(4)：将步骤(3)所得的分离液通过二步超滤方法进行处理，先利用孔径为5000道尔顿的膜将分子量小于5000道尔顿的蛋白肽分离出来，再用孔径为2000道尔顿的膜将分子量小于2000道尔顿的蛋白肽分离出来，得到蛋白肽溶液；步骤(5)：将步骤(4)所得的蛋白肽溶液，经过SephadexG-15凝胶分离，洗脱液为去离子水，洗脱峰在280nm下进行检测，收集第3个洗脱峰，然后通过浓缩、冷冻干燥，得到鱼皮蛋白肽；再用RP-HPLC反相高效液相色谱对得到的鱼皮蛋白肽进行1次分离，洗脱液为5～90％乙腈溶液，取第9～13分收集的蛋白肽溶液；通过LC-MS/MS对蛋白肽的主要成分进行测定，其中氨基酸序列为：Ala-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ile-Asn,Gly-Asp-Glu-Ile-Pro-Gly-Ser-Pro-His的肽的含量为50～55％；步骤(6)：将步骤(5)所得的蛋白肽溶液与低聚半乳糖在90～100℃反应30～60min，蛋白肽与低聚半乳糖的质量比为10～12：1，然后通过浓缩、冷冻干燥，得到糖基化鱼皮蛋白肽粉。步骤(1)中使用符合饮用水卫生标准的清洁水对鳕鱼皮进行清洗。步骤(1)中通过打浆机对鳕鱼皮进行打浆。步骤(3)中，第二步酶解，冷却至室温后，通过板框过滤进行过滤分离，收集分离液。本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术利用鳕鱼皮和低聚半乳糖开发的糖基化鱼皮蛋白肽整个加工过程中没有添加酸或碱进行pH的调整，产品保持较好的功能特性；(2)开发的糖基化鱼皮蛋白肽具有较好的促进益生菌生长和降血糖作用；(3)本专利技术利用特定频率超声波结合超高压技术处理的蛋白液，明显改善鱼皮蛋白对酶的敏感性，酶解液中蛋白质含量为11％以上，降低酶的使用量；(4)开发的产品在温和条件下，经过适度酶解获得的鱼皮蛋白肽与低聚半乳糖在较温和的条件下进行反应，不加任何添加剂；(5)本专利技术开发的产品具有良好的风味和色泽，能广泛应用于特需食品和营养食品；(6)本专利技术开发的产品具有较明确的肽的组成，其中Ala-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ile-Asn,Gly-Asp-Glu-Ile-Pro-Ala-Gly-Ser-Pro-His的肽的含量为52％以上。具体实施方式下面对本专利技术的实施例进行详细阐述，以使本专利技术的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本专利技术的保护范围做出更为清楚明确的界定。实施例1一种促益生菌生长和降血糖的糖基化鱼皮蛋白肽制备方法，包括以下步骤，(1)选用冷冻鳕鱼皮，用符合饮用水卫生标准的清洁水清洗,用打浆机将鱼皮打成浆，然后加入0.5倍鱼皮重量的水，通过125℃处理60分钟，得到鱼皮浆液。去上层脂肪，得到去脂的鱼皮蛋白液。(2)将(1)得到的鱼皮蛋白液，温度调整到70℃，利用超声波发生器经超声波(频率为140kHz)处理20分钟，再利用高静水压力(80Mpa)处理30分钟，改变鱼皮蛋白的组织结构。(3)调节鱼皮蛋白液中蛋白含量为12％，按照鱼皮蛋白液中蛋白重量0.6％的重量百分比加入复合蛋白酶进行分步酶解，第一步为蛋白重量0.5％的复合蛋白酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶)，碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.促益生菌生长和降血糖的糖基化鱼皮蛋白肽，其特征在于，按质量计，包括以下原料：10～12份蛋白肽、1份低聚半乳糖；所述蛋白肽中氨基酸序列为：Ala-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ile-Asn,Gly-Asp-Glu-Ile-Pro-Ala-Gly-Ser-Pro-His的蛋白肽有50％以上。/n
【技术特征摘要】
1.促益生菌生长和降血糖的糖基化鱼皮蛋白肽，其特征在于，按质量计，包括以下原料：10～12份蛋白肽、1份低聚半乳糖；所述蛋白肽中氨基酸序列为：Ala-Gly-Pro-Arg-Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ile-Asn,Gly-Asp-Glu-Ile-Pro-Ala-Gly-Ser-Pro-His的蛋白肽有50％以上。
2.促益生菌生长和降血糖的糖基化鱼皮蛋白肽制备方法，其特征在于，按质量计，包括如下步骤：
步骤(1)：选用1份鳕鱼皮，清洗后将鳕鱼皮打成浆，然后加入0.5～2.0份水，加热至110～125℃煮制60～120分钟，然后除去上层脂肪，得到去脂的蛋白液；
步骤(2)：将步骤(1)得到的蛋白液，温度调整到70～80℃，然后进行频率为120～140kHz的超声波处理20～30分钟，再进行压力为80～140MPa的高静水压力处理10～30分钟；
步骤(3)：调节步骤(2)得到的蛋白液中蛋白含量到10～12％，然后进行分步酶解，第一步加入蛋白液中蛋白质量0.4～0.8％的第一复合蛋白酶，在50～60℃条件下进行酶解反应0.5～2.0h；第一复合蛋白酶包括碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶，其中碱性蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶的质量比为1～2：1：0.5；第二步加入蛋白液中蛋白质量0.1～0.3％的第二复合蛋白酶，在50～60℃条件下进行酶解反应0.2～1.0h，第二复合蛋白酶包括菠萝蛋白酶、风味蛋白酶，其中菠萝蛋白酶、风味蛋白酶的质量比为1～2：1；在90～95℃下保温10～20分钟，然后冷却至室温，然后进行过滤分离，收集分离液；
步骤(4)：将步骤(3)所得的分离液通...
【专利技术属性】
技术研发人员：朱江华，罗永康，隋永玲，
申请(专利权)人：临沂华兴生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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