一种涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测用试剂或试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测用试剂或试剂盒及其应用，属于体外诊断试剂技术领域。所述试剂包括由2～8μg/ml磁微粒标记KL‑6抗体1、20％～30％初生牛血清、0.01％～0.1％防腐剂、20％～30％甘油、0.01％～0.1％吐温20、0.1％～1％BSA和50％～70％PBS缓冲液组成的磁微粒试剂和6～10μg/ml吖啶酯标记KL‑6抗体2、10％～40％的甘油、0.5％～5％的BSA和60％～90％PBS缓冲液组成的吖啶酯试剂。KL‑6检测试剂盒具有灵敏度高、精密度好、准确度高的特点，有优秀抗干扰能力，且在40000IU/mL高浓度样本下未出现明显的HOOK效应。

【技术实现步骤摘要】
一种涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测用试剂或试剂盒及其应用
本专利技术属于体外诊断试剂
，具体涉及一种涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测用试剂或试剂盒及其应用。
技术介绍
Kohno于1985年发现，利用人肺腺癌细胞系(VMRC-LCR)免疫小鼠制备了多株单克隆抗体，将其中的第6号抗体识别的涎液化糖链抗原命名为KL-6。KL-6属于分类为Cluster9的上皮性粘蛋白1(MUC1)，表达于Ⅱ型肺泡上皮细胞表面，在正常肺组织和终末细支气管上皮细胞只有极少量表达，在退变的Ⅱ型肺泡上皮细胞表达增强。KL-6对判断Ⅱ型肺泡上皮细胞的功能具有特异性。若肺部基底膜的损害，可致血管通透性增加，使KL-6入血。血清KL-6可反映肺泡损伤，II型肺泡细胞再生和多种间质性肺疾病的活动度。KL-6水平能敏感地反映肺泡上皮和间质的损伤程度。近年来多项研究报道，KL-6高水平表达可能与间质性肺疾病(ILD)、急性肺损伤、放射性肺炎、病毒性肺炎、药物相关性间质性肺炎、肿瘤等疾病相关联，其作用可能是促进成纤维细胞增殖和迁徙，从而影响纤维化的发生和发展。目前，临床或实验室对于KL-6检测的方法有免疫比浊法和酶促化学发光法。免疫比浊有检测灵敏度低、高浓度样本容易发生HOOK效应等缺陷，而酶促化学发光法虽解决了灵敏度问题，但反应时间较长，需要开放一种反应时间短的快速检验方法来测定KL-6。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测用试剂，以化学发光效率较高的吖啶酯为化学发光试剂实现快速检测涎液化糖链抗原的目的。本专利技术提供了一种涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测用试剂，包括磁微粒试剂和吖啶酯试剂；所述磁微粒试剂包括2～8μg/ml磁微粒标记的KL-6抗体1、体积浓度20％～30％初生牛血清、质量浓度0.01％～0.1％的Proclin300、体积浓度20％～30％甘油、体积浓度0.01％～0.1％吐温20、质量浓度0.1％～1％BSA和体积浓度50％～70％pH值为7.4的PBS缓冲液；所述吖啶酯试剂包括6～10μg/ml吖啶酯标记的KL-6抗体2、体积浓度10％～40％的甘油、质量浓度0.5％～5％的BSA和60％～90％、pH值为7.4的PBS缓冲液。优选的，所述磁微粒标记的KL-6抗体1中KL-6抗体1为北京博尔迈生物技术有限公司生产的货号为8MKL-61SA的KL-6单克隆抗体。优选的，所述吖啶酯标记的KL-6抗体2中KL-6抗体2为北京博尔迈生物技术有限公司生产的货号为8MKL-62SA的KL-6单克隆抗体。优选的，还包括磁珠清洗液、化学发光试剂和KL-6标准品。优选的，所述磁珠清洗液包括含体积浓度0.01％～0.1％Proclin300、0.2M的2-(N-吗啉代)乙磺酸的水溶液。本专利技术提供了一种所述涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测试剂盒，包括所述试剂。本专利技术提供了所述涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测用试剂或所述试剂盒在非诊断目的的检测血液样本中KL-6含量的应用。本专利技术提供了所述涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测试剂在制备检测血液样本中KL-6的试剂盒中的应用。优选的，所述血液样本包括血清或血浆；所述血液样本中KL-6浓度不高于40000IU/mL。优选的，在所述血液样本中，甘油三酯的浓度不高于1000mg/dL，胆红素的浓度不高于40mg/dL，血红蛋白的浓度不高于500mg/dL。本专利技术提供的涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测试剂，包括磁微粒试剂和吖啶酯试剂。本专利技术以吖啶酯作为化学发光试剂标记抗体，具有发光系统简单，不需要催化剂、发光效率高且强度大等特点，吖啶酯化学发光为闪光型，在化学发光免疫分析领域与其它技术相比具有优势，吖啶酯化学发光在加入启动剂0.4s后发射光强度达到最大，半衰期为0.9s，2s内发光基本结束，可以实现快速检测，吖啶酯具有较高的量子产率，其化学发光效率较高，通常是鲁米诺的五倍或五倍以上。因此，吖啶酯化学发光免疫技术是一种非常精确的定量检测，使检测正确率更高更快速方便。同时，本专利技术提供的检测用试剂还具有以下特点：1)准确度高：测试企业参考品控制品，相对偏差不超过±10％；2)最低检出限：不高于50IU/mL；3)线性范围广泛：在(50～5000.0)IU/mL的测量范围内，试剂的相关系数≥0.9900；4)重复性好：测试高低两个浓度样本，所得结果的变异系数(CV)不大于10％；5)批间差小：测试高低两个浓度样本，所得结果的批间变异系数(CV)不大于15％。进一步的，本专利技术具体限定了所述试剂中用于与KL-6特异性结合的两种单克隆抗体的来源。与其他厂家提供的KL-6抗体相比，北京博尔迈生物技术有限公司提供的KL-6抗体利用夹心法原理检测KL-6时，最低检测限显著降低，最低检测限仅为40IU/mL。本专利技术提供了所述涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测用试剂在非诊断目的的检测血液样本中KL-6含量或在制备检测血液样本中KL-6的试剂盒中的应用。所述试剂能够在体外定量检测人血浆或血清中的涎液化糖链抗原KL-6的含量，可用于临床上间质性肺疾病的辅助诊断和病情监测，填补了市场上磁微粒化学发光检测KL-6类体外检测试剂的空白。进一步的，本专利技术提供的应用具体限定了适于血液样本中KL-6最高含量。由于检测体系中抗原抗体比例不合适而导致假阴性的现象，其中抗体过量叫做前带效应；抗原过量叫做后带效应。抗原抗体特异性反应时，生成结合物的量与反应物的浓度有关。本专利技术实验证明，当血液样品的KL-6浓度上升至40000IU/mL时，未出现明显钩状效应；当样本浓度在KL-6浓度上升至80000IU/mL时，才出现明显的钩状效应。由此可见，本专利技术提供的检测方法能够检测样本KL-640000IU/mL高浓度样本。进一步的，本专利技术提供的应用具体限定了血液样本中甘油三酯、胆红素和血红蛋白的干扰浓度，得到本专利技术检测血液样本中KL-6含量对高血脂样本以及黄疸样本具有较强的抗干扰能力。血脂是指体内脂肪在血液中脂质的总称，包括总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白(极低密度脂蛋白)、高密度脂蛋白等。为了检验高血脂样本对本试剂的影响，采用两个不同浓度的血清样本，然后加入不同浓度的甘油三酯，以评估高血脂样品对检测结果的影响，结果表明甘油三酯浓度≤1000mg/dL，干扰相对偏差小于10％，未发现有干扰。引起黄疸的物质叫胆红素，呈橙黄色，当待检样本中的胆红素浓度超出一定的值时，它会影响样本测定效果，从而影响检测的性能。为了检验黄疸样本对本试剂的影响，采用两个不同浓度的血清样本，然后加入不同浓度的胆红素，以评估黄疸样品对检测结果的影响，结果表明胆红素浓度≤40mg/dL，干扰相对偏差小于10％，未发现有干扰。溶血样本中血红蛋白浓度≤500mg/dL，干扰相对偏差小于10％，未发现有干扰。具体实施方式本专利技术提供了一种涎液化糖链抗原本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测试剂，其特征在于，包括磁微粒试剂和吖啶酯试剂；/n所述磁微粒试剂包括2～8μg/ml磁微粒标记的KL-6抗体1、体积浓度20％～30％初生牛血清、质量浓度0.01％～0.1％的Proclin300、体积浓度20％～30％甘油、体积浓度0.01％～0.1％吐温20、质量浓度0.1％～1％BSA和体积浓度50％～70％pH值为7.4的PBS缓冲液；/n所述吖啶酯试剂包括6～10μg/ml吖啶酯标记的KL-6抗体2、体积浓度10％～40％的甘油、质量浓度0.5％～5％的BSA和60％～90％、pH值为7.4的PBS缓冲液。/n

【技术特征摘要】
1.一种涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测试剂，其特征在于，包括磁微粒试剂和吖啶酯试剂；
所述磁微粒试剂包括2～8μg/ml磁微粒标记的KL-6抗体1、体积浓度20％～30％初生牛血清、质量浓度0.01％～0.1％的Proclin300、体积浓度20％～30％甘油、体积浓度0.01％～0.1％吐温20、质量浓度0.1％～1％BSA和体积浓度50％～70％pH值为7.4的PBS缓冲液；
所述吖啶酯试剂包括6～10μg/ml吖啶酯标记的KL-6抗体2、体积浓度10％～40％的甘油、质量浓度0.5％～5％的BSA和60％～90％、pH值为7.4的PBS缓冲液。


2.根据权利要求1所述涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测试剂，其特征在于，所述磁微粒标记的KL-6抗体1中KL-6抗体1为北京博尔迈生物技术有限公司生产的货号为8MKL-61SA的KL-6单克隆抗体。


3.根据权利要求1所述涎液化糖链抗原磁微粒化学发光检测试剂，其特征在于，所述吖啶酯标记的KL-6抗体2中KL-6抗体2为北京博尔迈生物技术有限公司生产的货号为8MKL-62SA的KL-6单克隆抗体。


4.根据权利要求1～3任意一项所述涎...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘健，沈林，陈汝彬，靳启航，
申请(专利权)人：湖南永和阳光生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43