一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法技术

一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法，属于化学分析方法技术领域。该方法包括：1）取茶叶或菊花样品，经植物磨粉碎过筛得到茶叶或菊花粉末，进行0.1M硫酸提取处理，得到提取液；2）对步骤1）得到的提取液进行PCXSPE交换柱净化处理，得到洗脱液；3）将步骤2）得到的洗脱液经0.22μm有机滤膜过滤后转移到自动进样瓶，进行超高效液相色谱‑串联质谱检测。本发明专利技术在优化茶叶中吡咯里西啶生物碱检测前处理条件和液相色谱‑串联质谱仪器参数基础上，开发了茶叶、菊花中14种吡咯里西啶生物碱高灵敏度、准确、可靠的检测技术，满足茶叶中吡咯里西啶生物碱检测要求。

【技术实现步骤摘要】
一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法
本专利技术属于化学分析方法
，具体涉及一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法。
技术介绍
吡咯里西啶生物碱(PyrrolizidineAlkaloids，PAs)是一类植物次级代谢产物，主要分布于远缘相关的被子植物科，涉及菊科、紫草科和豆科等13个科。其具有化学防卫的功能，在一定程度上可抵御草食动物、昆虫和植物病原对植物的侵害。但不饱和吡咯里西啶生物碱及大部分吡咯里西啶生物碱的氮氧化物(pyrrolizidinealkaloidN-oxides，PANO)具有肝毒性、肺毒性、致癌性、遗传毒性，及致畸胎作用等多种毒性作用。作为外源污染物，吡咯里西啶生物碱被发现广泛存在于各类茶叶中，2020年欧盟规定了茶叶中吡咯里西啶生物碱最大限量(成人为150ug/kg，婴幼儿75ug/kg)。这一限量的规定对我国茶叶出口贸易会产生一定影响。其主要原因是根据欧洲对茶叶中吡咯里西啶生物碱的监测，大多数茶叶及代用茶中均检出一种或多种吡咯里西啶生物碱，部分样品残留量大于150ug/kg，即超过欧盟限量标准，而我国作为茶叶生产大国与消费大国，目前关于适用于多种茶叶及菊花中吡咯里西啶生物碱检测方法标准处于缺失状态，同时我国关于同时检测茶叶及菊花中多种吡咯里西啶生物碱相关检测方法与监测也未见报道。因此，我国茶叶中吡咯里西啶生物碱污染水平尚不清晰，亟待开发同时茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱检测方法。
技术实现思路
针对上述现有技术中存在的缺陷，本专利技术的目的在于设计提供一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法。一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法，其特征在于包括以下步骤：1)取茶叶或菊花样品，经植物磨粉碎过筛得到茶叶或菊花粉末，进行0.1M硫酸提取处理，得到提取液；2)对步骤1)得到的提取液进行PCXSPE交换柱净化处理，得到洗脱液；3)将步骤2)得到的洗脱液经0.22μm有机滤膜过滤后转移到自动进样瓶，进行超高效液相色谱-串联质谱检测。所述的一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法，其特征在于所述步骤1)中0.1M硫酸提取处理具体为：称取茶叶或菊花粉末1～1.2g，转移至PVC离心管中，加入10～10.5mL0.1M硫酸，涡旋后离心，将上清液转入离心管中，残渣再加入10～10.5mL0.1M硫酸，涡旋后离心，将两次提取上清液合并，得到提取液。所述的一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法，其特征在于所述涡旋条件为2500～3000转/min，5～10min；离心条件为8000～10000转/min，10～12min。所述的一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法，其特征在于所述步骤2)中PCXSPE交换柱净化处理具体为：先后采用4.5～5.5mL甲醇和4.5～5.5mL去离子水活化PCXSPE交换柱，取步骤1)得到的提取液10～11mL，分两次加入到PCXSPE交换柱中，待上样液的液面与SPE填料上层齐平时，第一次采用4.5～5.5mL含1％甲酸的去离子水淋洗后，再采用4.5～5.5mL甲醇进行淋洗，最后采用4～6mL含0.5％氨水的甲醇洗脱，得到洗脱液。所述的一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法，其特征在于所述PCXSPE交换柱的规格为200mg，6mL，30/pk。所述的一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法，其特征在于所述步骤3)中液相色谱条件为：色谱柱为ACQUITYUPLCHSST3，2.1х100mm，1.8μm粒径，流动相A为1mM甲酸铵与含0.1％甲酸的甲醇溶液，流动相B为1mM甲酸铵与含0.1％甲酸的水溶液，流速为0.25mL/min，柱温40℃，进样量3uL。洗脱梯度见表1，共14min。所述的一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法，其特征在于所述步骤3)中质谱条件为：离子源和扫描方式分别采用电喷雾正离子扫描方式ESI+；检测方式采用可编程多反应监测模式sMRM；ESI设置为气体温度为500℃，毛细管电压为5500V；气帘气CUR和碰撞气CAD的流速分别设置为35psi和7psi；雾化气压力GS1和辅助气GS2均设置为50.0psi。定性与定量离子对、去簇电压DP及碰撞电压CE见表2(英文名称为定量离子对，中文名称为定性离子对)。本专利技术在优化茶叶中吡咯里西啶生物碱检测前处理条件和液相色谱-串联质谱仪器参数基础上，开发了茶叶、菊花中14种吡咯里西啶生物碱高灵敏度、准确、可靠的检测技术。本专利技术检测方法回收率为67.9～109.0％，相对标准偏差小于14.9％，定量限为1～5μg/kg，满足茶叶中吡咯里西啶生物碱检测要求。具体实施方式以下将通过实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1：(1)取40～60g的干茶经茶叶样品经植物磨粉碎过筛，得到粒径为0.075～0.150mm茶叶粉末，用感量0.0001g的电子天平称取1.0g茶叶粉末转移至50mLPVC离心管中，加入10、10.5mL0.1M硫酸，2500、2750、3000转/min涡旋5min，8000、9000、10000转/min离心10min，将上清液转移入50mL离心管；残渣中再加入10mL0.1M硫酸，2500～3000转/min涡旋5min后10000转/min离心10min，将两次提取液合并，取10、11mL，待SPE净化。(2)先后采用5mL甲醇和5mL去离子水活化PCXSPE交换柱，将上述待净化的10mL上清液用移液枪分两次加入到PCXSPE交换柱；待上样液的液面与PCXSPE柱填料上层齐平时，先后采用5mL去离子水(含1％甲酸)与5mL甲醇进行淋洗，再采用4mL甲醇(含0.5％氨水)洗脱，洗脱液经0.22μm有机滤膜后转移到自动进样瓶中，待超高效液相色谱-串联质谱检测。(3)待测样品采用超高效液相色谱-串联质谱检测，液相色谱条件为：色谱柱为ACQUITYUPLCHSST3(2.1х100mm，1.8μm)，流动相A为1mM甲酸铵的甲醇(含0.1％甲酸)，流动相B为1mM甲酸铵的水(含0.1％甲酸)，洗脱梯度见表1，共14min。流速为0.25mL/min，柱温40℃，进样量3uL。表1流动相梯度洗脱程序质谱条件为：离子源和扫描方式分别采用电喷雾正离子扫描方式(ESI+)，检测方式采用：可编程多反应监测模式(sMRM)；ESI设置为气体温度为500℃，毛细管电压为5500V。气帘气(CUR)和碰撞气(CAD)的流速分别设置为35psi和7psi。雾化气压力(GS1)和辅助气(GS2)均设置为50.0psi。定性与定量离子对、去簇电压(DP)及碰撞电压(CE)见表2(英文名称为定量离子对，中文名称为定性离子对)。表214种吡咯里西啶生物碱保留时间及MRM参数实施例2：质控样品测试(1)取40～60g的红茶、绿茶、菊花经植物磨粉碎过筛，得到粒径为0.075～0.150mm茶叶粉末，用感量0.0001g的电子天平称本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法，其特征在于包括以下步骤：/n1）取茶叶或菊花样品，经植物磨粉碎过筛得到茶叶或菊花粉末，进行0.1M硫酸提取处理，得到提取液；/n2）对步骤1）得到的提取液进行PCXSPE交换柱净化处理，得到洗脱液；/n3）将步骤2）得到的洗脱液经0.22μm有机滤膜过滤后转移到自动进样瓶，进行超高效液相色谱-串联质谱检测。/n

【技术特征摘要】
1.一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
1）取茶叶或菊花样品，经植物磨粉碎过筛得到茶叶或菊花粉末，进行0.1M硫酸提取处理，得到提取液；
2）对步骤1）得到的提取液进行PCXSPE交换柱净化处理，得到洗脱液；
3）将步骤2）得到的洗脱液经0.22μm有机滤膜过滤后转移到自动进样瓶，进行超高效液相色谱-串联质谱检测。


2.如权利要求1所述的一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法，其特征在于所述步骤1）中0.1M硫酸提取处理具体为：称取茶叶或菊花粉末1～1.2g，转移至PVC离心管中，加入10～10.5mL0.1M硫酸，涡旋后离心，将上清液转入离心管中，残渣再加入10～10.5mL0.1M硫酸，涡旋后离心，将两次提取上清液合并，得到提取液。


3.如权利要求2所述的一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法，其特征在于所述涡旋条件为2500～3000转/min，5～10min；离心条件为8000～10000转/min，10～12min。


4.如权利要求1所述的一种茶叶、菊花中吡咯里西啶生物碱的检测方法，其特征在于所述步骤2）中PCXSPE交换柱净化处理具体为：先后采用4.5～5.5mL甲醇和4.5～5.5mL去离子水活化PCXSPE交换柱，取...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈红平，韩浩蕾，姜长岭，王晨，柴云峰，刘新，鲁成银，
申请(专利权)人：中国农业科学院茶叶研究所，
类型：发明
国别省市：浙江;33