一种德氏兜兰种子非共生萌发的方法技术

本发明专利技术提供了一种德氏兜兰种子非共生萌发的方法，属于植物组培技术领域。本发明专利技术以德氏兜兰种子作为外植体，通过在特定的培养基上和光环境条件下进行播种、分化和壮苗与生根培养，提高了种子的萌发和生长速率，并且种子萌发率高、出苗快、种苗品质好，在短时间内生产出大量优质的德氏兜兰种苗。实施例的实验结果表明，本发明专利技术提供的方法对德氏兜兰种子进行培养60d，萌发率可达47.7％，经40d即可分化为高1.0cm左右的小苗，再经60d可生长为株高3～4cm根系发达的完整植株，且移栽成活率可达100％。

【技术实现步骤摘要】
一种德氏兜兰种子非共生萌发的方法
本专利技术属于植物组培
，具体涉及一种德氏兜兰种子非共生萌发的方法。
技术介绍
德氏兜兰(PaphiopedilumdelenatiiGuill.)为兰科(Orchidaceae)兜兰属多年生植物，分布于我国广西北部、云南东南部和越南北部，分布地域十分狭窄。由于其生境的破坏和人为的过度采挖，其野生植物数量已极为稀少，被《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES)列入附录I而禁止交易，也被世界自然保护联盟(IUCN)红色名录中列为极危物种(CR)亟待保护。另一方面，德氏兜兰还是最奇特的观赏兰花之一，因花朵硕大、花型奇特、花色艳丽和持久的花期，具有极高的观赏价值，被奉为兰花精品，在全世界拥有为数众多的爱好者。德氏兜兰花朵具有香味，更是未来花香型兜兰育种的潜在种质。可见，德氏兜兰野生资源还是开发高档花卉和培育花卉新品种难得的好材料，具有十分重要的经济价值。进行德氏兜兰的资源保护和开发利用，繁殖足够多的种苗是关键。德氏兜兰的繁殖可采取无性繁殖和有性繁殖两大类，无性繁殖可采用常规分株和无性组织培养。其中，德氏兜兰的分株繁殖即在自然状态下萌出侧芽长成新苗，但繁殖速度慢，繁殖率低；德氏兜兰的无性组织培养与其他兜兰属植物一样，通常是以芽、叶片和根系为外植体进行繁殖，但由于外植体去污难、易褐化及增殖速度慢等原因，其无性组织培养难度极大；而有性繁殖中，由于德氏兜兰在野外的结实率低，即使结实种子萌发率也极低。因此，亟需提供一种萌发率高、出苗快、种苗品质好的德氏兜兰种子非共生萌发的方法。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种德氏兜兰种子非共生萌发的方法。本专利技术提供的方法种子萌发率高、出苗快、种苗品质好，有利于德氏兜兰的资源保护和可持续利用。本专利技术提供了一种德氏兜兰种子非共生萌发的方法，包括以下步骤：(1)将德氏兜兰种子接种于萌发培养基上，在萌发光环境下诱导种子萌发，得到原球茎；所述萌发培养基为含香蕉80～100g/L、6-苄基腺嘌呤1.0～2.0mg/L、萘乙酸0.3～0.5mg/L、活性炭1.0～2.0g/L、蔗糖20～30g/L和琼脂3.5～5.5g/L的1/2MS培养基；所述萌发培养基的pH值为5.8～6.2；所述萌发光环境为：先进行遮光培养20～30d，然后进行间歇光照培养；所述间歇光照培养时所用的光源为复合波长的日光灯，光照度为2000～3000lx，光照时间为10～16h/d；(2)将所述步骤(1)得到的原球茎接种于分化培养基上，在分化光环境下培养，得到小苗；所述分化培养基为含硝酸银0.2～0.5mg/L、6-苄基腺嘌呤2.0～3.0mg/L、萘乙酸0.5～1.0mg/L、香蕉80～100g/L、活性炭1.0～2.0g/L、蔗糖20～30g/L和琼脂3.5～5.5g/L的1/2MS培养基；所述分化培养基的pH值为5.8～6.2；所述分化光环境为：光质为波长475±5nm的蓝光，光照度为2000～3000lx，光照时间为10～16h/d；(3)将所述步骤(2)得到的小苗接种于壮苗与生根培养基上，在壮苗与生根光环境下培养获得完整植株；所述壮苗与生根培养基为含硝酸银0.5～1.0mg/L、6-苄基腺嘌呤0.2～0.5mg/L、萘乙酸0.5～1.0mg/L、香蕉80～100g/L、活性炭1.0～2.0g/L、蔗糖20～30g/L、琼脂3.5～5.5g/L的1/2MS培养基；所述壮苗培养基的pH值为5.8～6.2；所述壮苗与生根光环境为：光质为波长660±5nm的红光，光照度为2000～3000lx，光照时间为10～16h/d；(4)将所述步骤(3)得到的植株进行炼苗，再经移栽后得到德氏兜兰种苗。优选的，所述步骤(1)中德氏兜兰种子由蒴果经消毒处理后切开得到；所述蒴果在消毒处理前进行低温沉积。优选的，所述低温沉积的温度为0～10℃，所述低温沉积的时间为20～30d。优选的，所述蒴果为德氏兜兰花朵开放的第10～15d时进行异株人工授粉获得。优选的，所述异株人工授粉为：选取花朵完全开放的不同单株为父母亲本，把父母亲本花朵唇瓣的兜囊剪掉，然后将父本的花粉囊涂抹在母本的柱头面上。优选的，所述消毒处理包括：将蒴果在自来水下用软毛刷刷洗掉外表的灰尘和杂物，再用体积分数70～80％的酒精浸泡60～120s后，无菌水漂洗1～2次，然后用质量分数0.1～0.2％的升汞溶液消毒10～15min，无菌水漂洗4～5次。优选的，所述步骤(1)中的萌发培养、步骤(2)中的分化培养和步骤(3)中的生根培养的温度独立地为25～27℃。优选的，所述步骤(4)中的炼苗在自然光下进行，炼苗的时间为10～15d。优选的，所述步骤(4)中的移栽后的栽培基质包括植金石、松树皮和泥炭土。优选的，所述植金石、松树皮和泥炭土的体积比为1:(4～5)：1。本专利技术提供了一种德氏兜兰种子非共生萌发的方法，将德氏兜兰种子接种于特定的萌发培养基上在一定光环境下进行萌发培养，得到原球茎；将所述原球茎接种于特定的分化培养基上在一定光环境下进行分化，得到小苗；将所述小苗接种于特定的壮苗与生根培养基上，在一定光环境下培养，得到植株；将所述植株进行炼苗，再经移栽后得到德氏兜兰种苗。本专利技术以德氏兜兰种子作为外植体，通过在特定的培养基上和光环境条件下进行播种、分化和壮苗与生根培养，提高了种子的萌发和生长速率，并且种子萌发率高、出苗快、种苗品质好，在短时间内生产出大量优质的德氏兜兰种苗。实施例的实验结果表明，本专利技术提供的方法对德氏兜兰种子进行培养60d萌发率可达47.7％，经40d即可分化为高1.0cm左右的小苗，再经60d可生长为株高3～4cm根系发达的完整植株，且移栽成活率可达100％。附图说明图1为本专利技术对比例1中德氏兜兰的萌发培养情况照片；图2为本专利技术实施例1中德氏兜兰的分化培养情况照片；图3为本专利技术实施例2中德氏兜兰的生根培养情况照片。具体实施方式本专利技术提供了一种德氏兜兰种子非共生萌发的方法，包括以下步骤：(1)将德氏兜兰种子接种于萌发培养基上，在萌发光环境下诱导种子萌发，得到原球茎；所述萌发培养基为含香蕉80～100g/L、6-苄基腺嘌呤1.0～2.0mg/L、萘乙酸0.3～0.5mg/L、活性炭1.0～2.0g/L、蔗糖20～30g/L和琼脂3.5～5.5g/L的1/2MS培养基；所述萌发培养基的pH值为5.8～6.2；所述萌发光环境为：先进行遮光培养20～30d，然后进行间歇光照培养；所述间歇光照培养时所用的光源为复合波长的日光灯，光照度为2000～3000lx，光照时间为10～16h/d；(2)将所述步骤(1)得到的原球茎接种于分化培养基上，在分化光环境下培养，得到小苗；所述分化培养基为含硝酸银0.2～0.5mg/L、6-苄基腺嘌呤2.0～3.0mg/L、萘乙酸0.5本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种德氏兜兰种子非共生萌发的方法，包括以下步骤：/n(1)将德氏兜兰种子接种于萌发培养基上，在萌发光环境下诱导种子萌发，得到原球茎；/n所述萌发培养基为含香蕉80～100g/L、6-苄基腺嘌呤1.0～2.0mg/L、萘乙酸0.3～0.5mg/L、活性炭1.0～2.0g/L、蔗糖20～30g/L和琼脂3.5～5.5g/L的1/2MS培养基；所述萌发培养基的pH值为5.8～6.2；/n所述萌发光环境为：先进行遮光培养20～30d，然后进行间歇光照培养；所述间歇光照培养时所用的光源为复合波长的日光灯，光照度为2000～3000lx，光照时间为10～16h/d；/n(2)将所述步骤(1)得到的原球茎接种于分化培养基上，在分化光环境下培养，得到小苗；/n所述分化培养基为含硝酸银0.2～0.5mg/L、6-苄基腺嘌呤2.0～3.0mg/L、萘乙酸0.5～1.0mg/L、香蕉80～100g/L、活性炭1.0～2.0g/L、蔗糖20～30g/L和琼脂3.5～5.5g/L的1/2MS培养基；所述分化培养基的pH值为5.8～6.2；/n所述分化光环境为：光质为波长475±5nm的蓝光，光照度为2000～3000lx，光照时间为10～16h/d；/n(3)将所述步骤(2)得到的小苗接种于壮苗与生根培养基上，在壮苗与生根光环境下培养获得完整植株；/n所述壮苗与生根培养基为含硝酸银0.5～1.0mg/L、6-苄基腺嘌呤0.2～0.5mg/L、萘乙酸0.5～1.0mg/L、香蕉80～100g/L、活性炭1.0～2.0g/L、蔗糖20～30g/L、琼脂3.5～5.5g/L的1/2MS培养基；所述壮苗培养基的pH值为5.8～6.2；/n所述壮苗与生根光环境为：光质为波长660±5nm的红光，光照度为2000～3000lx，光照时间为10～16h/d；/n(4)将所述步骤(3)得到的植株进行炼苗，再经移栽后得到德氏兜兰种苗。/n...

【技术特征摘要】
1.一种德氏兜兰种子非共生萌发的方法，包括以下步骤：
(1)将德氏兜兰种子接种于萌发培养基上，在萌发光环境下诱导种子萌发，得到原球茎；
所述萌发培养基为含香蕉80～100g/L、6-苄基腺嘌呤1.0～2.0mg/L、萘乙酸0.3～0.5mg/L、活性炭1.0～2.0g/L、蔗糖20～30g/L和琼脂3.5～5.5g/L的1/2MS培养基；所述萌发培养基的pH值为5.8～6.2；
所述萌发光环境为：先进行遮光培养20～30d，然后进行间歇光照培养；所述间歇光照培养时所用的光源为复合波长的日光灯，光照度为2000～3000lx，光照时间为10～16h/d；
(2)将所述步骤(1)得到的原球茎接种于分化培养基上，在分化光环境下培养，得到小苗；
所述分化培养基为含硝酸银0.2～0.5mg/L、6-苄基腺嘌呤2.0～3.0mg/L、萘乙酸0.5～1.0mg/L、香蕉80～100g/L、活性炭1.0～2.0g/L、蔗糖20～30g/L和琼脂3.5～5.5g/L的1/2MS培养基；所述分化培养基的pH值为5.8～6.2；
所述分化光环境为：光质为波长475±5nm的蓝光，光照度为2000～3000lx，光照时间为10～16h/d；
(3)将所述步骤(2)得到的小苗接种于壮苗与生根培养基上，在壮苗与生根光环境下培养获得完整植株；
所述壮苗与生根培养基为含硝酸银0.5～1.0mg/L、6-苄基腺嘌呤0.2～0.5mg/L、萘乙酸0.5～1.0mg/L、香蕉80～100g/L、活性炭1.0～2.0g/L、蔗糖20～30g/L、琼脂3.5～5.5g/L的1/2MS培养基；所述壮苗培养基的pH值为5.8～6.2；
所述壮苗与生根光环境为：光质为波长660±5nm的红光，光照度为2000～3000lx，光...

【专利技术属性】
技术研发人员：付传明，冼康华，苏江，何金祥，刘宝骏，黄宁珍，
申请(专利权)人：广西壮族自治区中国科学院广西植物研究所，
类型：发明
国别省市：广西;45