一种用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲液及其应用制造技术

本发明专利技术提供一种用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲液及其应用，所述缓冲溶液包括少于四种碱基类型的dNTPs或少于四种碱基类型的dNTPs的类似物、包含SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列的DNA聚合酶。通过本发明专利技术制备的用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲液，可支持含有特定三个或三个以下碱基类型的目标序列的扩增。当目标序列中含有第四个碱基时，扩增反应将终止，因而可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增。产生的非特异性扩增。产生的非特异性扩增。

【技术实现步骤摘要】
一种用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲液及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲液及其应用。

技术介绍

[0002]缓冲溶液是指具有能够维持PH相对稳定性能的溶液。在缓冲溶液中，pH值在一定的范围内不因稀释或外加少量的酸或碱而发生显著的变化，缓冲溶液依据共轭酸碱对及其物质的量不同而具有不同的pH值和缓冲容量。在生化研究工作中，常常需要使用缓冲溶液来维持实验体系的酸碱度。研究工作的溶液体系pH值的变化往往直接影响到DNA聚合酶研究工作的成效。如果DNA聚合酶实验体系的pH值变动或大幅度变动，酶活性就会下降甚至完全丧失，所以配制缓冲溶液是一个不可或缺的关键步骤。尽管DNA聚合酶的缓冲溶液对于DNA聚合酶的活性发挥尤其重要，但是，具体到，如何研发一种特异性识别特定碱基序列的DNA聚合酶的缓冲溶液，能避免DNA聚合酶扩增过程存在的非特异性扩增，在世界范围内还处于一个研究难题。
[0003]此外，现有的DNA聚合酶适配的缓冲溶液，在样本中进行聚合酶链式反应时，在样本缓冲溶液中需添加各种dNTPs，才能完成特异性碱基序列识别、扩增或检测。但是对于一些目标序列中含有少于四种碱基的序列的识别过程中，现有的DNA聚合酶普遍存在特异性碱基序列识别的难题，无法有效地扩增出特异性碱基序列。尤为重要的是，现有的DNA聚合酶适配的缓冲溶液，无法完成单一反应体系内超多重PCR的高效和准确的扩增。
[0004]因此，亟需开发一种能够用于特异性碱基序列识别的DNA聚合酶的缓冲液。r/>
技术实现思路

[0005]为解决现有技术存在的问题，本专利技术提供一种用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲液、及其制备方法与应用，可支持含有特定三个或三个以下碱基类型的目标序列的扩增。当目标序列中含有第四个碱基时，扩增反应将终止。因此，本专利技术可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增，支持完成单一反应体系内超多重PCR的高效和准确的扩增。
[0006]本专利技术第一方面提供一种用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲溶液，其特征在于，所述缓冲溶液包括少于四种碱基类型的dNTPs或少于四种碱基类型的dNTPs的类似物。通过本技术方案，可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增。
[0007]优选地，如前所述的缓冲溶液，包括DNA聚合酶，所述DNA聚合酶包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。通过本技术方案，可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增，支持完成单一反应体系内超多重PCR的高效和准确的扩增。
[0008]优选地，如前所述的缓冲溶液，包括DNA聚合酶，所述的DNA聚合酶蛋白序列包含在一个或多个位置发生氨基酸取代的SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；其中，所述一个或多个位置选自SEQ ID No:1所示的氨基酸序列中第6位、第8位、第10位、第104位、第205位或其任意组合。通过本技术方案，可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增，支持完成
单一反应体系内超多重PCR的高效和准确的扩增。当目标序列中含有第四个碱基时，扩增反应将终止。因此，本专利技术可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增。
[0009]优选地，如前所述的缓冲溶液包括包括DNA聚合酶，所述的DNA聚合酶蛋白序列包含在多个位置发生氨基酸取代的SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，其中，所述多个位置选自SEQ ID No:1所示的氨基酸序列中第6位、第8位、第10位、第104位和第205位全部发生氨基酸取代。通过本技术方案，可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增，支持完成单一反应体系内超多重PCR的高效和准确的扩增。
[0010]优选地，在如前所述的缓冲溶液中，所述的SEQ ID No:1所示的氨基酸序列的第6位的氨基酸取代为脯氨酸、甘氨酸、羟脯氨酸、丝氨酸或苏氨酸，和/或第8位的氨基酸取代为异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸、苯丙氨酸或正亮氨酸取代赖氨酸，和/或第10位的氨基酸取代为苏氨酸或丝氨酸，和/或第104位的氨基酸取代为甘氨酸或脯氨酸，和/或第205位的氨基酸取代为酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、或苏氨酸。通过本技术方案，可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增，支持完成单一反应体系内超多重PCR的高效和准确的扩增。当目标序列中含有第四个碱基时，扩增反应将终止。因此，本专利技术可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增。
[0011]优选地，在如前所述的缓冲溶液中，所述的DNA聚合酶包含如SEQ ID No:2所示的氨基酸序列，或由如SEQ IDNo:2所示的氨基酸序列组成。通过本技术方案，可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增，支持完成单一反应体系内超多重PCR的高效和准确的扩增。当目标序列中含有第四个碱基时，扩增反应将终止。因此，本专利技术可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增。
[0012]优选地，在如前所述的缓冲溶液中，所述DNA聚合酶只识别选自碱基A、T、C和G中的三种碱基构成的核酸序列。
[0013]本专利技术第二方面提供一种识别特异性DNA聚合酶，所述识别特异性DNA聚合酶在应用过程中，采用了权利要求1至6任一权项所述的缓冲溶液。通过本技术方案，可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增，支持完成单一反应体系内超多重PCR的高效和准确的扩增。
[0014]优选地，在如前所述的识别特异性DNA聚合酶，只识别选自碱基A、T、C和G中的三种碱基构成的核酸序列。通过本技术方案，可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增，支持完成单一反应体系内超多重PCR的高效和准确的扩增。当目标序列中含有第四个碱基时，扩增反应将终止。因此，本专利技术可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增。
[0015]本专利技术第三方面提供一种所述的缓冲溶液、或所述识别特异性DNA聚合酶在生物或医学领域的应用。
[0016]本专利技术创造的有益效果：通过本专利技术制备的用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲液，可支持含有特定三个或三个以下碱基类型的目标序列的扩增。当目标序列中含有第四个碱基时，扩增反应将终止。因此，本专利技术可明显地控制DNA序列扩增过程产生的非特异性扩增。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简
单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0018]图1.识别、扩增仅含有三个碱基的目标片段(Target 1，碱基C不能被DNA聚合酶识别)；图2.市售的DNA聚合酶扩增仅含有三个碱基的目标片段和正常目标片段；图3.市售的DNA聚合酶&缓冲液v.s.本实施例的DNA聚合酶&缓冲液的qPCR扩增结果(SYBR Green法)。
具体实施方式
[001本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于DNA聚合酶识别特异性的缓冲溶液，其特征在于，所述缓冲溶液包括少于四种碱基类型的dNTPs或少于四种碱基类型的dNTPs的类似物。2.根据权利要求1所述的缓冲溶液，其特征在于，所述的缓冲溶液包括DNA聚合酶，所述DNA聚合酶包含SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。3.根据权利要求1所述的缓冲溶液，其特征在于，所述的缓冲溶液包括DNA聚合酶，所述的DNA聚合酶蛋白序列包含在一个或多个位置发生氨基酸取代的SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列 ；其中，所述一个或多个位置选自SEQ ID No:1所示的氨基酸序列中第6位、第8位、第10位、第104位、第205位或其任意组合。4.根据权利要求1所述的缓冲溶液，其特征在于，所述的缓冲溶液包括包括DNA聚合酶，所述的DNA聚合酶蛋白序列包含在多个位置发生氨基酸取代的SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列 ，其中，所述多个位置选自SEQ ID No:1所示的氨基酸序列中第6位、第8位、第10位、第104位和第205位全部发生氨基酸取代。5.根据权利要求4所述的缓冲溶液，其特征在于，SEQ ID No:1所示的氨基酸序列的第...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚午，王友祥，杨志劼，
申请(专利权)人：南京普济生物有限公司，
类型：发明
国别省市：