一种应用于法医混合检材的高灵敏检测方法技术

本发明专利技术属于法医学应用研究技术领域，具体涉及一种应用于法医混合检材的高灵敏检测方法。本发明专利技术提供的检测方法包括微滴反应液配制、微滴制备、PCR扩增、微滴回收、毛细管电泳、分析数据及结果展示等过程。本发明专利技术提供的检测方法可以在混合检材中检出丰度低至0.001％～0.01％目标样本，具有特异性强、灵敏度高的优点，且本发明专利技术的方法同样适配于以往常用的PCR仪器和毛细管电泳检测仪器，在仪器滴定和时间方面节约了成本。方面节约了成本。方面节约了成本。

【技术实现步骤摘要】
一种应用于法医混合检材的高灵敏检测方法


[0001]本专利技术属于法医学应用研究
，具体涉及一种应用于法医混合检材的高灵敏检测方法。

技术介绍

[0002]在法医物证检验所需要分析的各类检材中，混合检材是重要的常见检材之一。混合检材的复杂程度随着组成个体的数量增加而增加，同时其检测难度也随着组成成分DNA占比变化而不同。在已有的研究中，分析鉴定混合检材的关键在于对不同组分的信息进行有效分离。目前在实际案件工作中分析混合检材的方法主要有三种：(1)在DNA提取阶段将组成成分分离后再进行检测(一般采用差异裂解法)，此方法对检材质量以及实验设备等方面要求较高；(2)在DNA扩增阶段进行分离(主要通过使用特殊遗传标记来实现)，此方法对遗传标记和数据库有特殊要求；(3)在混合检材DNA分型结果得出后(主要依赖于法医统计学和概率软件)，此方法统计学方法和软件的使用受限。这些方法的局限性，使得不能得到有效的大范围推广应用。目前对混合检材的分析在实际工作中还没有行之有效的解决方法和手段，混合检材中少量成分的分离分析仍在研究当中。/>[0003]微滴本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种应用于法医混合检材的高灵敏检测方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、微滴反应液的配制：将预扩增反应液置于室温融化，2000rpm离心10s，取12μL与3μL引物混合物，混合均匀，制成PCR预混液，每15μL分装至一个PCR管，向各管中加入1μL模板DNA，加水补充至20μL，制得微滴反应液；S2、将步骤S1制成的微滴反应液与微滴发生油混合均匀，DG8
TM Gaskets封盖，并在微滴生成仪上生成微滴，将微滴转入PCR管中，进行PCR反应，制成PCR产物；S3、将步骤S2制成的PCR产物进行回收纯化，并进行毛细管电泳，分析案件样本；S4、对步骤S3得到的结果进行数据分析，统计结果，即可。2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤S1所述的预扩增反应液为dd PCR
TM Supermix for Probes，所述引物混合物为根据8个STR位点设计的引物混合物；所述8个STR位点分别为D6S1043，D13S317，D2S1338，CSF1PO，D21S11，D7S820，D5S818，TH01。3.如权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述D6S1043位点的序列信息如SEQ ID NO.1所示；所述D13S317位点的序列信息如SEQ ID NO.2所示；所述D2S1338位点的序列信息如SEQ ID NO.3所示；所述CSF1PO位点的序列信息如SEQ ID NO.4所示；所述D21S11位点的序列信息如SEQ IDNO.5所示；所述D7S820位点的序列信息如SEQ ID NO.6所示；所述D5S818位点的序列信息如SEQ ID NO.7所示；所述TH01位点的序列信息如SEQ ID NO.8所示。4.如权利要求3所述的检测方法，其特征在于，扩增所述D6S1043位点的上游引物序列信息如SEQ ID NO.9所示，下游引物序列信息如SEQ ID NO.10所示；扩增所述D13S317位点的上游引物序列信息如SEQ ID NO.11所示；下游引物序列信息如SEQ ID NO.12所示；扩增所述D2S1338位点的上游引物序列信息如SEQ ID NO.13所示；下游引物序列信息如SEQ ID NO.14所示；扩增所述CSF1PO位点的上游引物序列信息如SEQ ID NO.15所示；下游引物序列信息如SEQ ID NO.16所示；扩增所述D21S11位点的上游引物序列信息如SEQ ID NO.17所示；下游引物序列信息如SEQ ID NO.18所示；扩增所述D7S820位点的上游引物序列信息如SEQ ID NO.19所示；下游引物序列信息如SEQ ID NO.20所示；...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈雪红，夏昊强，张振兴，董晓静，全旺，
申请(专利权)人：郑州高新生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：