一种DNA聚合酶及其制备方法和应用技术

本申请涉及生物医药领域，尤其涉及一种DNA聚合酶及其制备方法和应用，通过构建重组表达质粒，将质粒转入宿主细胞，并表达SEQ ID NO:1所示的氨基酸，得到Pv酶，同时表达Pv酶的变体酶，变体包括：单位点突变：K198G、K198E、I224A、N243S；双位点突变：K198G/I224A、K198G/N243S、K198E/I224A、K198E/N243S；三位点突变：K198G/I224A/N243S、K198E/I224A/N243S。通过实验验证本申请提供的Pv酶及其变体酶，发现其具有DNA聚合酶的活性，并且相对的可以抑制非特异性扩增，可直接扩增血液样本，且血液的体积浓度占比高达80％，具有相对高的保真性，相对敏感性高，在进行多重PCR时，相对少量的酶可扩增多对引物。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及生物学领域，尤其涉及一种dna聚合酶及其制备方法和应用。

技术介绍

1、dna的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链dna在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在dna聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。在实验中发现，dna在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制dna的变性和复性，加入设计引物，dna聚合酶、dntp就可以完成特定基因的体外复制。

2、但是，dna聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的dna聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了pcr技术的应用和发展。

3、耐热dna聚合酶-taq酶的发现对于pcr的应用有里程碑的意义，该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，不需要每个循环加酶，使pcr技术变得非常简捷、同时也大大降低了成本，pcr技术得以大量应用，并逐步应用于临床。

4、然而随着pcr技术的发展，对dna聚合酶的要求也越来越高，由于各种条件的限制，taq酶或多或少被报道存在以下缺陷：①相对的不具有抑制非特异性扩本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种DNA聚合酶，其特征在于，包括SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

2.一种DNA聚合酶，其特征在于，所述DNA聚合酶选自以下(a)-(g)任意一种：

3.编码权利要求1或2所述的DNA聚合酶的基因。

4.含有权利要求3所述的基因的重组载体。

5.含有权利要求4所述的重组载体的宿主细胞。

6.一种制备权利要求1或2所述的DNA聚合酶的方法，其特征在于，包括：培养如权利要求5所述的宿主细胞，使所述的宿主细胞表达所述DNA聚合酶。

7.一种用于扩增靶核酸的试剂盒，所述试剂盒包含(i)权利要求1或2所述的DNA...

【技术特征摘要】

1.一种dna聚合酶，其特征在于，包括seq id no:1所示的氨基酸序列。

2.一种dna聚合酶，其特征在于，所述dna聚合酶选自以下(a)-(g)任意一种：

3.编码权利要求1或2所述的dna聚合酶的基因。

4.含有权利要求3所述的基因的重组载体。

5.含有权利要求4所述的重组载体的宿主细胞。

6.一种制备权利要求1或2所述的dna聚合酶的方法，其特征在于，包括：培养如权利要求5所述的宿主细胞，使所述的宿主细胞表达所述dna聚合酶。...

【专利技术属性】
技术研发人员：尚午，王友祥，
申请(专利权)人：南京普济生物有限公司，
类型：发明
国别省市：