工程化的FC制造技术

公开了一种包含Fc区的抗原结合分子，所述Fc区包含多肽，其具有：(i)对应于第242位处的C，和对应于第334位处的C，和(i i)对应于第236位处的A，对应于第239位处的D，对应于第332位处的E，对应于第330位处的L，对应于第345位处的K，和对应于第430位处的G的一个或多个。还公开了这种Fc区的组成多肽，编码这种抗原结合分子和多肽的核酸，包含这种抗原结合分子、多肽和核酸的组合物，以及使用这些的方法。以及使用这些的方法。以及使用这些的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】工程化的FC
[0001]本申请要求于2018年10月25日提交的GB 1817354.2的优先权，其内容和要素出于所有目的通过引用合并于此。
专利

[0002]本专利技术涉及分子生物学领域，更具体地抗体技术。
[0003]专利技术背景
[0004]调节(增强或衰减)抗体FC效应功能(ADCC，ADCP，CDC)的两种主要(非相互排斥)策略是通过改变Fc：Fc受体和Fc：补体成分1q(C1)相互作用。
[0005]最常见的方法涉及向Fc区的多肽链提供氨基酸取代以产生对称(同型二聚体)IgG分子。
[0006]或者，抗体可以是糖工程化的；最常见的策略包括通过操纵宿主细胞中的聚糖生物合成途径来进行N
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连接的寡聚糖的修饰，以及体外重塑聚糖。修饰包括去岩藻糖基化，增加的末端半乳糖基化和增加的末端唾液酸化。
[0007]然而，影响效应功能的已知修饰具有缺点。去岩藻糖(Afucosyl)抗体的生产在技术上具有挑战性，通常需要在突变细胞类型(例如LEC13 CHO细胞，FUT8敲除CHO细胞等)中表达或从治疗的细胞中表达以减少参与聚糖合成/加工的因子的表达(例如用FUT8 siRNA或几夫碱(kifunensine)抑制剂处理的细胞)，或者需要在其表达后用抗体制剂处理，以除去具有岩藻糖基残基的聚糖。这种抗体制剂经常被岩藻糖基化的抗体污染，使得在岩藻糖基化抗体制剂上的Fcγ受体结合活性的提高限制为～3倍(参见例如Chung等人，MAbs(2012)4(3)：326
‑
>340)。
[0008]相对于具有未取代的Fc区的抗体，通过在Fc区中引入氨基酸取代改善效应功能的现有方法通常与ADCC活性提高～2
‑
5倍有关。
[0009]仍然需要具有改进的结构和功能性质的Fc区。

技术实现思路

[0010]在第一方面，本专利技术提供了一种任选地分离的抗原结合分子，
[0011]其包含Fc区，所述Fc区包含多肽，其具有：(i)对应于第242位处的C，和对应于第334位处的C，和(ii)对应于第236位处的A，对应于第239位处的D，对应于第332位处的E，对应于第330位处的L，对应于第345位处的K，和对应于第430位处的G中的一个或多个。
[0012]除非另有说明，否则Fc区的多肽的位置根据Eu编号系统，如在Kabat等人，《免疫学感兴趣的蛋白质序列》(第五版)，公共卫生服务，国立卫生研究院，马里兰州贝塞斯达，1991中所述。
[0013]在一些实施方式中，所述Fc区包含多肽，其具有：(i)对应于第242位处的C，和对应于第334位处的C，以及(ii)对应于第236位处的A，对应于第239位处的D，对应于第332位处的E，和对应于第330位处的L；或对应于第236位处的A，对应于第239位处的D，和对应于第332位处的E；或对应于第236位处的A和对应于第239位处的D；或对应于第345位处的K，和对
应于第430位处的G。
[0014]在一些实施方式中，所述Fc区包含多肽，其具有：(i)对应于第242位处的C，和对应于第334位处的C，以及(ii)对应于第236位处的A，对应于第239位处的D，对应于第332位处的E，和对应于第330位处的L。
[0015]在一些实施方式中，所述Fc区包含多肽，其具有：(i)对应于第242位处的C，和对应于第334位处的C，以及(ii)对应于第236位处的A，对应于第239位处的D，和对应于第332位处的E。
[0016]在一些实施方式中，所述Fc区包含多肽，其具有：(i)对应于第242位处的C，和对应于第334位处的C，以及(ii)对应于第236位处的A和对应于第239位处的D。
[0017]在一些实施方式中，所述Fc区包含多肽，其具有：(i)对应于第242位处的C，和对应于第334位处的C，以及(ii)对应于第345位处的K，和对应于第430位处的G。
[0018]在一些实施方式中，所述Fc区包含含有与SEQ ID NO:39、38、37、41、22、21、20或24具有至少60％序列同一性的氨基酸序列的多肽。
[0019]还提供了一种任选分离的多肽，其包含：与SEQ ID NO：31或6具有至少60％序列同一性的氨基酸序列，其中所述多肽包含相对于SEQ ID NO:31或6编号的特定位置处的下列氨基酸残基：(i)在第15位的C，和在第107位的C，以及(ii)在第9位的A，在第12位的D，在第103位的L，在第105位的E，在第118位的K，和在第203位的G的一个或多个。
[0020]在一些实施方式中，所述多肽在相对于SEQ ID NO：31或6的特定位置包含以下氨基酸残基：在第15位的C，和在第107位的C，以及(ii)在第9位的A，在第12位的D，在第103位的L，和在第105位的E；或在第9位的A，在第12位的D，和在第105位的E；或在第9位的A和在第12位的D；或在第118位的K，和在第203位的G。
[0021]在一些实施方式中，所述多肽在相对于SEQ ID NO：31或6的特定位置包含以下氨基酸残基：(i)在第15位的C，和在第107位的C，以及(ii)在第9位的A，在第12位的D，在第103位的L，和在第105位的E。
[0022]在一些实施方式中，所述多肽在相对于SEQ ID NO：31或6的特定位置包含以下氨基酸残基：(i)在第15位的C，和在第107位的C，以及(ii)在第9位的A，在第12位的D，和在第105位的E。
[0023]在一些实施方式中，所述多肽在相对于SEQ ID NO：31或6的特定位置包含以下氨基酸残基：(i)在第15位的C，和在第107位的C，以及(ii)在第9位的A和在第12位的D。
[0024]在一些实施方式中，所述多肽在相对于SEQ ID NO：31或6的特定位置包含以下氨基酸残基：(i)在第15位的C，和在第107位的C，以及(ii)在第118位的K，和在第203位的G。
[0025]还提供了一种任选分离的多肽，其包含SEQ ID NO：39、38、37、41、22、21、20或24的氨基酸序列。
[0026]还提供了一种任选分离的Fc区，其包含如本文所述的多肽。
[0027]还提供了一种任选分离的抗原结合分子，其包含如本文所述的多肽或Fc区。
[0028]还提供了一种或多种任选分离的核酸，其编码如本文所述的抗原结合分子、多肽或Fc区。
[0029]还提供了一种或多种表达载体，其包含如本文所述的一种或多种核酸。
[0030]还提供了一种细胞，其包含如本文所述的抗原结合分子、多肽、Fc区、一种或多种
核酸、或一种或多种表达载体。
[0031]还提供了一种方法，包括在适于表达来自一种或多种核酸或一种或多种表达载体的抗原结合分子、多肽或Fc区的条件下，培养如本文所述的包含一种或多种核酸或一种或多种表达载体的细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种任选分离的包含Fc区的抗原结合分子，所述Fc区包含多肽，其具有：(i)对应于第242位处的C，和对应于第334位处的C，和(ii)对应于第236位处的A，对应于第239位处的D，对应于第332位处的E，对应于第330位处的L，对应于第345位处的K，和对应于第430位处的G的一个或多个。2.根据权利要求1所述的抗原结合分子，其中所述Fc区包含多肽，其具有：(i)对应于第242位处的C，和对应于第334位处的C，以及(ii)对应于第236位处的A，对应于第239位处的D，对应于第332位处的E，和对应于第330位处的L；或对应于第236位处的A，对应于第239位处的D，和对应于第332位处的E；或对应于第236位处的A和对应于第239位处的D；或对应于第345位处的K，和对应于第430位处的G。3.根据权利要求1或权利要求2所述的抗原结合分子，其中所述Fc区包含多肽，其具有：(i)对应于第242位处的C，和对应于第334位处的C，以及(ii)对应于第236位处的A，对应于第239位处的D，对应于第332位处的E，和对应于第330位处的L。4.根据权利要求1或权利要求2所述的抗原结合分子，其中所述Fc区包含多肽，其具有：(i)对应于第242位处的C，和对应于第334位处的C，以及(ii)对应于第236位处的A，对应于第239位处的D，和对应于第332位处的E。5.根据权利要求1或权利要求2所述的抗原结合分子，其中所述Fc区包含多肽，其具有：(i)对应于第242位处的C，和对应于第334位处的C，以及(ii)对应于第236位处的A和对应于第239位处的D。6.根据权利要求1或权利要求2所述的抗原结合分子，其中所述Fc区包含多肽，其具有：(i)对应于第242位处的C，和对应于第334位处的C，以及(ii)对应于第345位处的K，和对应于第430位处的G。7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗原结合分子，其中所述Fc区包含含有氨基酸序列与SEQ ID NO：39、38、37、41、22、21、20或24具有至少60％序列同一性的多肽。8.一种任选分离的多肽，其包含：与SEQ ID NO：31或6具有至少60％序列同一性的氨基酸序列，其中所述多肽包含相对于SEQ ID NO:31或6的特定位置处编号的下列氨基酸残基：(i)在第15位的C，和在第107位的C，和(ii)在第9位的A，在第12位的D，在第103位的L，在第105位的E，在第118位的K，和在第203位的G中的一个或多个。9.根据权利要求8所述的多肽，其中所述多肽包含相对于SEQ ID NO:31或6的特定位置处编号的下列氨基酸残基：(i)在第15位的C，和在第107位的C，以及(ii)在第9位的A，在第12位的D，在第103位的L，和在第105位的E；或在第9位的A，在第12位的D，和在第105位的E；或在第9位的A，和在第12位的D；或在第118位的K，和在第203位的G。10.根据权利要求8或权利要求9所述的多肽，其中所述多肽包含相对于SEQ ID NO:31或6的特定位置处编号的下列氨基酸残基：(i)在第15位的C，和在第107位的C，以及(ii)在第9位的A，在第12位的D，在第103位的L，和在第105位的E。11.根据权利要求8或权利要求9...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：蜂鸟生物科技控股私人有限公司，
类型：发明
国别省市：