一种高稳定性类Fab抗体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属生物技术领域，涉及类Fab抗体片段或抗原结合片段、分离的VH

【技术实现步骤摘要】
一种高稳定性类Fab抗体及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及类Fab抗体片段或抗原结合片段、分离的VH-CH3多肽、VL-CH3多肽，以及构建上述类Fab抗体片段或抗原结合片段、VH-CH3多肽、VL-CH3多肽的方法，所需的核酸、质粒、宿主细胞，相应的药用组合物及其应用。

技术介绍

[0002]现有技术公开了单抗药物具有靶向性强、疗效显著及毒副作用低等特点，在多种疾病治疗上显示了极好的疗效与广阔的应用前景。相对于癌症治疗与免疫性疾病治疗，单抗药物在其它一些种类疾病的治疗领域中的开发与应用相对较缓慢。其中主要是因为全长的单抗IgG分子量过大(约150kD)，从而导致其在一些临床应用时存在显著的缺陷，如，首先，分子量过大造成组织渗透性较差，影响治疗效果；其次，无法达到一些具有空间位阻的靶点；更重要的是，大分子量导致单抗药物生产成本高、价格昂贵，严重阻碍了其在抗病毒治疗等疾病治疗领域的临床应用，成为本领域瓶颈。长期以来业内研究人员在探索用具有更小分子量、可在原核细胞中可溶表达的“抗体片段”(antibody fragment)代替单克隆抗体，作为生产成本低、组织渗透能力强的新一代抗体药物。因此，研发分子量小，特异性高，可在原核系统高效可溶表达的小分子抗体片段药物已成为研究人员的关注点。
[0003]基于现有技术的现状，本申请的专利技术人拟提供一种高稳定性类Fab抗体及其制备方法和应用，尤其涉及类Fab抗体片段或抗原结合片段、分离的VH-CH3多肽、VL-CH3多肽及其制备方法。r/>
技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于，基于现有技术的现状，为解决现有技术存在的问题，通过计算机模拟及基因工程改造，制得一种新型类Fab抗体片段或抗原结合片段，尤其涉及类Fab抗体片段或抗原结合片段、分离的VH-CH3多肽、VL-CH3多肽及其制备方法。所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段其具有更高的稳定性和更好的抗原结合能力，能实现原核系统共表达。
[0005]本专利技术提供了一种类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段包含：
[0006]1)重链可变区、连接子和抗体恒定区CH3片段，和
[0007]2)轻链可变区、连接子和抗体恒定区CH3片段。
[0008]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的重链可变区以氨基酸QVQL/QMQL/EVQL/QIQL/QVTL/TVQL/EVHL/EMQL/EVEL/EDQL/QLQL/EAQL起始，以氨基酸TVSS结束。
[0009]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段包含的重链可变区的氨基酸序列与SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7具有至少95％的同源性。
[0010]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的轻链可变区以氨基酸DIQMT/AIQMT/AIRMT/DIQLT/AIQLT/VIWMT/NIQMT/DIVMT/EIVMT/EIVLT/ETTLT/DVVMT/DIVLT起始，
以氨基酸VEIK结束。
[0011]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的轻链可变区包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:8具有至少95％的同源性。
[0012]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的连接子包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少80％的同源性。
[0013]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的连接子，连接重链可变区和抗体恒定区CH3片段的连接子包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:4具有至少80％的同源性。
[0014]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的连接子，连接轻链可变区和抗体恒定区CH3片段的连接子包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:3具有至少80％的同源性。
[0015]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的抗体恒定区CH3片段包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少95％的同源性。
[0016]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的抗体恒定区CH3片段的氨基酸序列含有：
[0017]SEQ ID NO:1，其中X1是氨基酸S或T，X2是氨基酸L或A，X3是氨基酸V或Y，或，
[0018]SEQ ID NO:2，其中X1是氨基酸W或T。
[0019]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的抗体恒定区CH3片段，通过连接子与重链可变区连接的抗体恒定区CH3片段包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少95％的同源性。
[0020]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的抗体恒定区CH3片段，通过连接子与重链可变区连接的抗体恒定区CH3片段包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少95％的同源性，其中X1是氨基酸S或T，X2是氨基酸L或A，X3是氨基酸V或Y。
[0021]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的抗体恒定区CH3片段，通过连接子与轻链可变区连接的抗体恒定区CH3片段包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少95％的同源性。
[0022]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的抗体恒定区CH3片段，通过连接子与轻链可变区连接的抗体恒定区CH3片段包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少95％的同源性，其中X1是氨基酸W或T。
[0023]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段包含：
[0024]1)以氨基酸QVQL/QMQL/EVQL/QIQL/QVTL/TVQL/EVHL/EMQL/EVEL/EDQL/QLQL/EAQL起始，以氨基酸TVSS结束的重链可变区，含有氨基酸序列与SEQ ID NO:4具有至少80％同源性的连接子和含有氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少95％同源性的抗体恒定区CH3片段，和
[0025]2)以氨基酸
[0026]DIQMT/AIQMT/AIRMT/DIQLT/AIQLT/VIWMT/NIQMT/DIVMT/EIVMT/EIVLT/ETTLT/DVVMT/DIVLT起始，以氨基酸VEIK结束的轻链可变区，含有氨基酸序列与SEQ ID NO:3具有至少80％同源性的连接子和含有氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少95％同源性的抗体恒定区CH3片段。
[0027]优选的，所述类Fab抗体片段或抗原结合片段包含：
[0028]1)以氨基酸QVQL/QMQL/EVQL/QIQL/QVTL/TVQL/EVHL/EMQL/EVEL/EDQL/QLQL/EAQL
起始，以氨基酸TVSS结束的重链可变区，含有氨基酸序列与SEQ ID NO:4具有至少80％同源性的连接子和含有氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少95％同源性的抗体恒定区CH3片段，其中SEQ ID NO:1中的X本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段包含：1)重链可变区、连接子和抗体恒定区CH3片段，和2)轻链可变区、连接子和抗体恒定区CH3片段。2.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的重链可变区以氨基酸QVQL/QMQL/EVQL/QIQL/QVTL/TVQL/EVHL/EMQL/EVEL/EDQL/QLQL/EAQL起始，以氨基酸TVSS结束。3.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的重链可变区包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7具有至少95％的同源性。。4.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的轻链可变区以氨基酸DIQMT/AIQMT/AIRMT/DIQLT/AIQLT/VIWMT/NIQMT/DIVMT/EIVMT/EIVLT/ETTLT/DVVMT/DIVLT起始，以氨基酸VEIK结束。5.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的轻链可变区包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:8具有至少95％的同源性。6.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的连接子包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4具有至少80％的同源性。7.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的连接子，连接重链可变区和抗体恒定区CH3片段的连接子包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:4具有至少80％的同源性。8.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的连接子，连接轻链可变区和抗体恒定区CH3片段的连接子包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:3具有至少80％的同源性。9.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的抗体恒定区CH3片段包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:1或SEQ ID NO:2具有至少95％的同源性。10.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的抗体恒定区CH3片段的氨基酸序列含有：SEQ ID NO:1，其中X1是氨基酸S或T，X2是氨基酸L或A，X3是氨基酸V或Y，或，SEQ ID NO:2，其中X1是氨基酸W或T。11.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的抗体恒定区CH3片段，通过连接子与重链可变区连接的抗体恒定区CH3片段包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少95％的同源性。12.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的抗体恒定区CH3片段，通过连接子与重链可变区连接的抗体恒定区CH3片段包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少95％的同源性，其中X1是氨基酸S或T，X2是氨基酸L或A，X3是氨基酸V或Y。13.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体
片段或抗原结合片段中的抗体恒定区CH3片段，通过连接子与轻链可变区连接的抗体恒定区CH3片段包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少95％的同源性。14.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段中的抗体恒定区CH3片段，通过连接子与轻链可变区连接的抗体恒定区CH3片段包含的氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少95％的同源性，其中X1是氨基酸W或T。15.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段包含：1)以氨基酸QVQL/QMQL/EVQL/QIQL/QVTL/TVQL/EVHL/EMQL/EVEL/EDQL/QLQL/EAQL起始，以氨基酸TVSS结束的重链可变区，含有氨基酸序列与SEQ ID NO:4具有至少80％同源性的连接子和含有氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少95％同源性的抗体恒定区CH3片段，和2)以氨基酸DIQMT/AIQMT/AIRMT/DIQLT/AIQLT/VIWMT/NIQMT/DIVMT/EIVMT/EIVLT/ETTLT/DVVMT/DIVLT起始，以氨基酸VEIK结束的轻链可变区，含有氨基酸序列与SEQ ID NO:3具有至少80％同源性的连接子和含有氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少95％同源性的抗体恒定区CH3片段。16.根据权利要求1所述的类Fab抗体片段或抗原结合片段，其特征在于所述类Fab抗体片段或抗原结合片段包含：1)以氨基酸QVQL/QMQL/EVQL/QIQL/QVTL/TVQL/EVHL/EMQL/EVEL/EDQL/QLQL/EAQL起始，以氨基酸TVSS结束的重链可变区，含有氨基酸序列与SEQ ID NO:4具有至少80％同源性的连接子和含有氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少95％同源性的抗体恒定区CH3片段，其中SEQ ID NO:1中的X1是氨基酸S或T，X2是氨基酸L或A，X3是氨基酸V或Y，和2)以氨基酸DIQMT/AIQMT/AIRMT/DIQLT/AIQLT/VIWMT/NIQMT/DIVMT/EIVMT/EIVLT/ETTLT/DVVMT/DIVLT起始，以氨基酸VEIK结束的轻链可变区，含有氨基酸序列与SEQ ID NO:3具有至少80％同源性的连接子和含有氨基酸序列与SEQ ID NO:2具有至少95％同源性的抗体恒定区CH3...

【专利技术属性】
技术研发人员：应天雷，王春雨，吴艳玲，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：