一种利普斯他汀发酵方法与发酵培养基技术

为克服现有利普斯他汀发酵方法中发酵单位偏低、发酵原料成本高、工艺复杂难控、不适用于大规模工业化生产等问题，本发明专利技术提供了一种简便高效的利普斯他汀发酵方法与发酵培养基，包括以下步骤：平皿分离与斜面培养、菌种斜面摇瓶发酵筛选、摇瓶种子液制备、一级种子罐培养、二级种子罐培养和发酵罐培养。本发明专利技术通过摇瓶发酵筛选高产菌株、各级培养基优化以及发酵过程工艺改进等组合优化策略获得的利普斯他汀发酵方法与发酵培养基，具有发酵单位高、发酵原料成本低、发酵过程控制简单方便、无需添加外源毒性前体等优势，对于提高利普斯他汀发酵产量和产品质量、降低生产成本均具有十分重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
一种利普斯他汀发酵方法与发酵培养基
本专利技术属于微生物发酵
，具体涉及一种利普斯他汀发酵方法与发酵培养基。
技术介绍
利普斯他汀是由毒三素链霉菌(Streptomycestoxytricini)产生的一种具有良好的抑制脂肪酶活性的天然产物，其氢化衍生物奥利司他是目前全球最畅销的减肥药物。奥利司他作为一种胃肠道脂肪酶抑制剂，通过与胃和小肠腔内的脂肪酶活性丝氨酸部位形成共价键结合，使脂肪酶失活从而不能将食物中的脂肪分解为可吸收的游离脂肪酸和单酰基甘油，从而减少热量摄入，控制体重增加，达到控制体重、降糖、降压、调脂等目的。奥利司他是唯一通过美国FDA、欧洲EMA、中国NMPA同时批准治疗肥胖症的非处方药物，亦是目前唯一经NMPA批准在中国销售和使用的减肥药。目前奥利司他的生产工艺技术路线有发酵半合成法和化学全合成法两种，化学全合成路线合成步骤长、反应操作较繁、反应条件苛刻、分离提纯收率低且对环境污染较大，不符合绿色化工低碳经济的发展趋势。目前工业上主要通过发酵半合成技术制备奥利司他，首先通过毒三素链霉菌发酵获得富含利普斯他汀的发酵液，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利普斯他汀发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：/na.平皿分离与斜面培养：将利普斯他汀生产菌种孢子在平皿培养基中进行自然分离，培养10～14天；挑取分离较好、孢子丰满的单菌落接种至斜面培养基，培养7～9天，将生长良好的菌种斜面冷藏；/nb.菌种斜面摇瓶发酵筛选：将上述菌种斜面接种至摇瓶种子培养基中培养25～35h；以5～10％的接种量接种至摇瓶发酵培养基中培养7～9天，发酵结束后测定效价，挑选出摇瓶效价≥8000μg/ml的菌种斜面继续冷藏，供发酵生产使用；/nc.摇瓶种子液制备：将上述摇瓶效价≥8000μg/ml的菌种斜面接种至摇瓶种子培养基中，培养25～35h，得到摇瓶种子液；/n...

【技术特征摘要】
1.一种利普斯他汀发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：
a.平皿分离与斜面培养：将利普斯他汀生产菌种孢子在平皿培养基中进行自然分离，培养10～14天；挑取分离较好、孢子丰满的单菌落接种至斜面培养基，培养7～9天，将生长良好的菌种斜面冷藏；
b.菌种斜面摇瓶发酵筛选：将上述菌种斜面接种至摇瓶种子培养基中培养25～35h；以5～10％的接种量接种至摇瓶发酵培养基中培养7～9天，发酵结束后测定效价，挑选出摇瓶效价≥8000μg/ml的菌种斜面继续冷藏，供发酵生产使用；
c.摇瓶种子液制备：将上述摇瓶效价≥8000μg/ml的菌种斜面接种至摇瓶种子培养基中，培养25～35h，得到摇瓶种子液；
d.一级种子罐培养：将上述摇瓶种子液按一级种子罐培养基体积的1～2‰接种至一级种子罐进行培养，罐压0.04～0.05MPa，控制溶解氧(DO)，使DO维持70～80％，培养周期20～30h；
e.二级种子罐培养：将培养好的一级种子罐培养液按二级种子罐培养基体积的8～12％接种至二级种子罐进行培养，罐压0.04～0.05MPa，控制溶解氧(DO)，使DO维持40～60％，培养周期10～20h；
f.发酵罐培养：将培养好的二级种子培养液以8～12％的接种量移种至发酵罐培养基中进行发酵培养，罐压0.04～0.05MPa，通过交替调节搅拌转速75～150r/min与通气量0.8～1.6VVM分阶段偶联控制溶解氧，发酵周期7～9天，发酵单位为10000～13000ug/ml；
上述培养温度均为27～28℃。


2.根据权利要求1所述的一种利普斯他汀发酵方法，其特征在于，所述步骤d中“控制溶解氧(DO)”包括：
通过交替调节搅拌转速200～350rpm与通气量1～2VVM偶联控制溶解氧，使DO维持70～80％。


3.根据权利要求1所述的一种利普斯他汀发酵方法，其特征在于，所述步骤e中“控制溶解氧(DO)”包括：
通过交替调节搅拌转速90～150rpm与通气量0.8～1.6VVM偶联控制溶解氧，使DO维持40～60％。


4.根据权利要求1所述的一种利普斯他汀发酵方法，其特征在于，所述步骤f中“通过交替调节搅拌转速75～150r/min与通气量0.8～1.6VVM分阶段偶联控制溶解氧”包括：
(1)发酵开始后至DO反弹前：发酵0～24h溶解氧下降时先调转速再调风量，交替进行，风量每次上调0.15～0.2VVM，风量最高1.6VVM，转速每次上调2～4HZ，转速最高150r/min，控制DO≥30％；发酵24～32h：控制DO≥20％，DO低于10％时搅拌转速和空气流量保持最高不变，降温至26.5～27℃；
(2)DO反弹后至发酵结束：发酵至28～36h左右DO迅速回升至70～90％，pH紧跟回升，迅速降低风量和罐压、下调...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭霞凌，李辉，
申请(专利权)人：大邦湖南生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43