一种使用DNA聚合酶突变株高效合成5制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种使用DNA聚合酶突变株高效合成5

【技术实现步骤摘要】
一种使用DNA聚合酶突变株高效合成5
’
标记RNA的方法


[0001]本专利技术涉及生物
，具体涉及一种使用DNA聚合酶突变株高效合成5
’
标记RNA的方法。

技术介绍

[0002]在核酸分子的研究和应用中，单链RNA末端标记是一项很重要的技术。单链RNA末端标记是将标记物(如荧光素、生物素等)通过一定的方式连接到RNA的5
’
末端或者RNA的3
’
末端，通过检查标记物，进而实现对RNA鉴别、检测，或对功能核酸(如RNA适配体)进行亲和力测定和应用开发。
[0003]单链RNA末端标记主要分为化学标记和酶法标记。化学标记难度大，成本高，而酶法标记比化学标记简单方便。单链RNA的5
’
末端标记和3
’
末端标记的方法各不相同。单链RNA的3
’
末端标记技术主要通过TdT法和T4 RNA连接酶法在RNA 3
’
末端增加一个修饰的核苷酸或者带修饰的小核酸片段。单链RNA的5r/>’
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种使用DNA聚合酶突变株高效合成5
’
标记RNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)将含目标序列的单链DNA、聚合酶反应缓冲液、5
’
末端带修饰的DNA寡核苷酸链的引物混合均匀，得到混合液，然后升温进行去空间结构处理，冷却至室温，得到混合体系1；(2)往步骤(1)所述混合体系1中加入核糖核苷酸，SFM4
‑
3聚合酶，混合均匀，得到转录体系；(3)将步骤(2)所述转录体系进行孵育处理，得到转录产物，纯化分离RNA，得到目标序列的5
’
标记RNA。2.根据权利要求1所述的使用DNA聚合酶突变株高效合成5
’
标记RNA的方法，其特征在于，步骤(1)所述聚合酶反应缓冲液包含400
‑
600mM的Tris、400
‑
600mM的MgCl2、60
‑
70mM的KCl；所述混合液的pH值为8.0
‑
9.0。3.根据权利要求1所述的使用DNA聚合酶突变株高效合成5
’
标记RNA的方法，其特征在于，步骤(1)所述5
’
末端带修饰的DNA寡核苷酸链的引物包括15个胸腺嘧啶脱氧核糖核苷酸及修饰部分；所述修饰部分为生物素标记、荧光素标记、放射性标记中的一种以上；在步骤(1)所述混合液中，含目标序列的单链DNA的终浓度为400
‑
600nM，Tris的浓度为40
‑
60mM、MgCl2的浓度为40
‑
60mM、KCl的浓度为6
‑
7mM，5
’
末端带修饰的DNA寡核苷酸链的引物的终浓度为400
‑
1200nM。4.根据权利要求1所述的使用DNA聚合酶突变株高效合成5
’
标记RNA的方法，其特征在于，步骤(1)所述去空间结构处理的温度为90
‑
98℃，去空间结构处理的时间为2
‑
5min。5.根据权利要求1所述的使用DNA聚合酶突变株高效合成5
’
标记RNA的方法，其特征在于，步骤(2)所述核糖核苷酸包括天然的核糖核苷酸和非天然核糖核苷酸中的一种以上；...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈庭坚，何传平，邹金容，张汝洁，彭乐丽，王光远，吴静，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：