一种抗小鼠和家兔IgG的羊驼单重链纳米抗体及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗小鼠和家兔IgG的纳米抗体及应用，所述纳米抗体至少具有重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3之一，该抗体能够以高亲和力特异性识别小鼠和家兔，且与人IgG没有交叉。可用于制备鼠兔通用二抗，具有重要的应用价值。值。值。

【技术实现步骤摘要】
一种抗小鼠和家兔IgG的羊驼单重链纳米抗体及应用


[0001]本专利技术涉及一种抗小鼠和家兔IgG的纳米抗体及应用，属于生物


技术介绍

[0002]鼠或者兔等第一来源的抗体被称为第一抗体，第二抗体是能和第一抗体结合，即抗体的抗体，其主要作用是检测抗体的存在，放大一抗的信号。二抗在间接酶联免疫、免疫层析等实验中发挥了巨大作用。传统二抗的制备是利用抗体是大分子的蛋白质具有抗原性的性质，去免疫异种动物，由异种动物的免疫系统产生的针对于此抗体的免疫球蛋白，具有制备周期长，操作繁琐的缺点。抗体库技术是一种将某种动物的所有抗体可变区基因克隆在质粒或噬菌体中表达，利用不同的抗原或抗体筛选出携带特异抗体基因的克隆，从而获得相应的特异性抗体的技术。抗体库技术不仅可以模拟动物免疫系统产生抗体的过程，还具有许多独特的优点，抗体库技术无需免疫，从理论上讲，10
～10
的库容就可能包容所有的抗体。利用抗原或抗体即可直接从非免疫动物抗体库中筛选出特异性抗体，并能筛选到针对该物种自身抗原的抗体。
[0003]纳米抗体，是目前已知最小的可结合抗原的抗体分子，其分子量约为15KD。与传统抗体相比，纳米抗体具有相对分子质量小、亲和力高、稳定性高、溶解性好、免疫原性低、穿透力强、人源化简单、能够在大肠杆菌中大量表达等优势。因此，应用纳米抗体技术研发同时抗小鼠和家兔IgG且与人IgG没有交叉的纳米抗体具有广阔的应用前景。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的是提供一种同时抗小鼠和家兔IgG，且与人IgG没有交叉的纳米抗体，同时还提供该抗体的应用。
[0005]本专利技术采取的具体技术方案是：
[0006]一种抗小鼠和家兔IgG的纳米抗体，所述纳米抗体由单重链构成，所述抗体至少具有以下技术特征之一：
[0007]i、所述重链包括重链CDR1，即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基26—34；
[0008]ii、所述重链包括重链CDR2，即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基50—56；
[0009]iii、所述重链包括重链CDR3，即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基95—105。
[0010]优选地，所述重链包括重链CDR1、重链CDR2以及重链CDR3；重链CDR1即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基26—34；重链CDR2即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基50—56；重链CDR3即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基95—105。
[0011]优选地，所述抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0012]本专利技术还提供：
[0013]编码前文所述抗小鼠和家兔IgG的纳米抗体的核酸。
[0014]优选地，所述核酸的序列如SEQ ID NO:1所示。
[0015]本专利技术还提供：
[0016]具有前文所述的核酸的表达载体，包括原核表达载体和哺乳系统表达载体。
[0017]优选地，原核表达载体为pET28a，哺乳系统表达载体为pcDNA3.1。
[0018]本专利技术还提供：
[0019]具有前文所述表达载体的宿主细胞。
[0020]优选地，原核表达宿主细胞为大肠杆菌BL21，哺乳系统表达宿主细胞为CHO。
[0021]本专利技术还提供：
[0022]具有标记的前文所述抗小鼠和家兔IgG的真核重组纳米抗体。
[0023]优选地，所述标记为辣根过氧化物酶(HRP)。
[0024]本专利技术还提供：
[0025]HRP标记的抗小鼠和家兔IgG的纳米抗体在制备鼠兔通用二抗中的应用。
[0026]本专利技术还提供：
[0027]前文所述的核酸用于制备抗小鼠和家兔IgG的纳米抗体、鼠兔通用型二抗中的用途。
[0028]本专利技术还提供：
[0029]前文所述的宿主细胞用于制备鼠兔通用型二抗中的用途。
[0030]本专利技术的有益效果是：本专利技术通过噬菌体展示技术获得了靶向小鼠和家兔IgG的纳米抗体，该抗体能够以高亲和力特异性识别小鼠和家兔，且与人IgG没有交叉，可用于制备鼠兔通用二抗，具有重要的应用价值。
附图说明
[0031]图1为实施例1中ELISA检测每轮淘选富集噬菌体对鼠和兔的结合情况图。
[0032]图2为实施例1中ELISA检测单克隆噬菌体对抗原蛋白的结合情况图。
[0033]图3为实施例1的单克隆富集率分析图。
[0034]图4为实施例2的原核表达载体和哺乳系统表达载体示意图。
[0035]图5为实施例2的原核表达和哺乳系统表达的纳米抗体的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测图。
[0036]图6为实施例3的原核表达和哺乳系统表达的纳米抗体的结合ELISA结果图。
[0037]图7为实施例4的ELISA检测HRP标记的原核表达的鼠兔通用二抗的结果图。
具体实施方式
[0038]下面结合实施例对本专利技术作进一步详细描述。但是本专利技术不限于所给出的例子。所用方法如无特别说明均为常规方法，所用试剂和材料如无特别说明均为市售品。
[0039]实施例1、筛选抗小鼠和家兔IgG的纳米抗体
[0040]分别以Mouse IgG1、Rabbit IgG1、Mouse IgG2a为正筛抗原，以Human IgG为负筛抗原，应用噬菌体展示技术从羊驼天然纳米抗体噬菌体文库(文库大小为1.47x109)中筛淘抗小鼠和家兔IgG，且与人IgG没有交叉的纳米抗体。
[0041]采用固相淘选的方法，将100ug/mL的Human IgG包被到ELISA板条上，每孔100uL，4℃过夜包被。PBST洗三遍，每孔加入200uL3％的酪蛋白，37℃封闭2小时。PBST洗三遍后加入噬菌体展示库(约有1x10
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CFU)，37℃孵育1小时，收集未结合的噬菌体，重复负筛三次以去除与Human IgG结合的噬菌体。将负筛后的噬菌体加到封闭好的包被了100ug/mL Mouse IgG1被到ELISA板条上，37℃孵育1小时。吸出未结合的噬菌体，PBST洗10遍。每孔加100uL的甘氨酸-盐酸(PH＝2.2)溶液，37℃反应7分钟，轻轻吹打板孔将吸附的噬菌体洗脱下来，然后加入Tris-HCl(PH＝8.8)溶液中和至中性。洗脱的噬菌体感染对数生长期的TG1细胞，扩增回收后的噬菌体，用于下一轮淘选。
[0042]经过三轮淘选后，用Phage-ELISA进行验证是否特异性富集。分别将2ug/mL的Mouse IgG、Rabbit IgG1、Mouse IgG2a、Human IgG包被到ELISA板条上，4℃过夜包被。PBST洗三遍后用3％的酪蛋白37℃封闭2小时。PBST洗5遍后加入三轮淘选的噬菌体展示库，首孔约1x10
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CFU，4倍梯度稀释，末孔空白，37℃结合1小时本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗小鼠和家兔IgG的羊驼单重链纳米抗体，其特征在于，所述抗体至少具有以下技术特征之一：i、所述重链包括重链CDR1，即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基26—34；ii、所述重链包括重链CDR2，即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基50—56；iii、所述重链包括重链CDR3，即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基95—105。2.根据权利要求1所述的抗小鼠和家兔IgG的纳米抗体，其特征在于，所述重链包括重链CDR1、重链CDR2以及重链CDR3；重链CDR1即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基26—34；重链CDR2即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基50—56；重链CDR3即SEQ ID NO:2所示氨基酸序列中的氨基酸残基95—105。3.根据权利要求1所述的抗小鼠和家兔IgG的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玉芳，查长春，刘川，刘郧飞，王春焦，唐静秋，
申请(专利权)人：泰州市百英生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：