【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于产生造血干细胞及其衍生物的类器官组合物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2018年9月12日提交的序列号为62/730,061的美国临时申请的优先权和权益，该申请的全部内容以引用的方式并入本文中。
技术介绍
[0003]目前，在需要重建造血系统的个体中，骨髓移植是治疗的主要手段。捐献的骨髓中的干细胞和祖细胞能够增殖并取代负责保护性免疫、组织修复、凝血和血液的其它功能的血细胞。在成功的骨髓移植中，血液、骨髓、脾脏、胸腺和其它免疫器官能够用来自供体的细胞重新增殖。骨髓已经越来越成功地用于治疗各种疾病，包括某些类型的贫血症，如再生障碍性贫血、范可尼贫血、免疫缺陷、癌症，如淋巴瘤或白血病，癌，各种实体瘤和造血功能的遗传性疾病。骨髓移植也已用于治疗遗传性贮积病、重型地中海贫血、镰状细胞疾病和骨质疏松症。
[0004]虽然造血干细胞(HSC)具有分化成所有类型血细胞的能力并且能够被移植以治疗血液紊乱，但是由于供体的缺乏，难以大量获得HSC。此外，由于完全匹配的(遗传上相同的)供体很少，所以使用骨髓移植为有需要的个体提供免疫细胞受到严重限制。
[0005]因此，本领域仍然需要适于移植的HSC组合物以及能够提供HSC的方法。此外，开发这样的组合物将会有助于研究目的，因为目前的HSC数量不足。本公开试图解决本领域的一个或多个上述需要。
技术实现思路
[0006]本公开涉及衍生自前体细胞的组合物，以及使用此类组合物制造造血干细胞(HSC)或衍生的免疫细胞的方法。更具体地，公开了用于从类器官...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种制备造血干细胞(HSC)或其衍生细胞的方法，其包含a.将衍生自前体细胞的定形内胚层与wnt信号传导通路活化剂和FGF信号传导通路活化剂接触，直至前肠细胞形成；b.在不存在视黄酸的情况下培养所述前肠细胞以形成产生造血细胞的肝脏类器官。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述前体细胞选自胚胎干细胞和诱导的多能干细胞(iPSC)中的一种或两种。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述wnt信号传导通路活化剂选自Wnt1、Wnt2、Wnt2b、Wnt3、Wnt3a、Wnt4、Wnt5a、Wnt5b、Wnt6、Wnt7a、Wnt7b、Wnt8a、Wnt8b、Wnt9a、Wnt9b、Wnt10a、Wnt10b、Wnt11、Wnt16、wnt信号传导通路的小分子活化剂(例如氯化锂；2
‑
氨基
‑
4,6
‑
二取代嘧啶(杂)芳基嘧啶；IQ1；QS11；NSC668036；DCA β
‑
连环蛋白；2
‑
氨基
‑4‑
[3,4
‑
(亚甲二氧基)
‑
苄基
‑
氨基]
‑6‑
(3
‑
甲氧基苯基)嘧啶)，WAY
‑
316606；SB
‑
216763；或BIO(6
‑
溴靛玉红
‑
3'
‑
肟))，Wnt信号传导通路的siRNA和/或shRNA活化剂，GSK3抑制剂(例如Chiron/CHIR9902)及其组合。4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述FGF信号传导通路活化剂选自小分子或蛋白质FGF信号传导通路活化剂，FGF1、FGF2、FGF3、FGF4、FGF10、FGF11、FGF12、FGF13、FGF14、FGF15、FGF16、FGF17、FGF18、FGF19、FGF20、FGF21、FGF22、FGF23、FGF信号传导通路的siRNA和/或shRNA活化剂，及其组合。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述前肠细胞在形成所述肝脏类器官之前形成球状体。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述前肠细胞在形成所述肝脏类器官之前形成球状体，并且其中所述方法还包含破碎所述球状体以形成多个细胞。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述破碎通过化学破坏和机械破坏中的一种或两种进行。8.根据权利要求6或7所述的方法，其中所述破碎包含用酶处理，优选地其中所述酶是具有蛋白水解酶活性和胶原水解酶活性中的一种或两种的酶，优选地一种或多种选自accutase、胰蛋白酶、胶原酶、透明质酸酶、脱氧核糖核酸酶、木瓜蛋白酶、trypzean(Sigma制造)或其组合的酶。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述前肠在选自转铁蛋白、干细胞因子(SCF)、白细胞介素3(IL
‑
3)、白细胞介素6(IL
‑
6)、红细胞生成素(EPO)、粒细胞集落刺激因子(G
‑
CSF)、粒细胞
‑
巨噬细胞集落刺激因子(GM
‑
CSF)及其组合的细胞因子存在的情况下培养，优选地其中所述前肠在所述培养之前解离成单细胞，其中用细胞因子进行所述培养，持续约1天，或约2天，或约3天，或约4天，或约5天，或约6天，或约7天，或约8天，或约9天，或约10天，或约11天，或约12天，或约13天，或约14天，或约15天，或约16天，或约17天，或约18天，或约19天，或约20天，或约21天，或约三周，或约四周，或约五周，或约六周，或约七周，或约八周，或约九周，或约10周，或约11周，或约12周，或大于12周。10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包含使所述人类肝脏类器官与血小板生成素(TPO)和干细胞因子(SCF)中的一种或两种接触，其中所述与血小板生成素(TPO)和干细胞因子(SCF)中的一种或两种接触持续约1天，或约2天，或约3天，或约4天，或约5天，或约6天，或约7天，或约8天，或约9天，或约10天，或约11天，或约12天，或约13天，或
约14天，或约15天，或约16天，或约17天，或约18天，或约19天，或约20天，或约21天，或约三周，或约四周，或约五周，或约六周，或约七周，或约八周，或约九周，或约10周，或约11周，或约12周，或大于12周。11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述人类肝脏类器官处于胎儿状态。12.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中与用视黄酸处理的人类肝脏类器官相比，所述人类肝脏类器官产生减少的白蛋白。13.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述人类肝脏类器官产生甲胎蛋白(AFP)。14.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中与用视黄酸处理的人类肝脏类器官相比，所述人类肝脏类器官具有增加的内皮标记物CD34和KDR。15.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中...
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