一种慢病毒包装系统辅助质粒的超螺旋结构纯度的检测方法技术方案

本发明专利技术涉及高效液相色谱法检测一种慢病毒包装系统辅助质粒超螺旋含量的方法，利用高效液相色谱法进行测定，通过回收高效液相色谱主峰，并且进行鉴定，其可以作为质粒超螺旋结构工作标准品。结果表明，用该方法对BZK2质粒超螺旋结构进行检测，其纯度达84.71％，该方法专属性强、操作简单、灵敏度高、结果准确，适用于质粒制品超螺旋结构纯度的检测。于质粒制品超螺旋结构纯度的检测。于质粒制品超螺旋结构纯度的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种慢病毒包装系统辅助质粒的超螺旋结构纯度的检测方法


[0001]本专利技术涉及药物分析领域，具体涉及一种利用高效液相色谱法检测质粒DNA超螺旋结构纯度的方法。

技术介绍

[0002]质粒(plasmid)广泛存在于生物界，从细菌、放线菌、丝状真菌、大型真菌、酵母到植物，甚至人类机体中都含有。从分子组成看，有DNA质粒，也有RNA质粒；从分子构型看，有线型质粒、也有环状质粒，其表型也多种多样。细菌质粒是基因工程中最常用的载体。质粒(plasmid)是细菌或细胞染色质以外的，能自主复制的，与细菌或细胞共生的遗传成分，是染色质外的双链共价闭合环形DNA，可自然形成超螺旋结构。
[0003]质粒DNA是一类能在细菌染色体外自主复制的环形双链DNA分子。不同类型的质粒DNA分子量大小不同，大的可达105kDa，小的则仅为103kDa。质粒DNA有三种不同的构型：
[0004]①
共价闭合环形DNA所呈现的超螺旋结构(SC构型)，在电泳图谱中，其处于凝胶的前面；
[0005]②
一条链保持完整的环形结构，另一条链上本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种质粒超螺旋纯度的高效液相色谱检测方法，该方法包括如下步骤：(1)使用Waters e2695型高效液相色谱仪和赛分Proteomix SAX强阴离子交换色谱柱；(2)色谱检测条件：
①
检测波长为260nm；
②
流速为0.5mL/min；
③
柱温为30
‑
35℃；
④
上样量20μL；
⑤
流动相A为20mmol/LTris pH7.5～8.0溶液；
⑥
流动相B为20mmol/LTris 1mol/L NaClpH7.5～8.0溶液；
⑦
洗脱梯度改变量1％；(3)质粒各构型工作标准品的制备：采用单酶切的方式获得线性结构工作标准品；采用回收液相色谱图中的杂峰和主峰的方式获得开环结构和超螺旋结构工作标准品，并结合琼脂糖凝胶电泳的方法和高效液相色谱的方法再次对获得的待定开环结构和超螺旋结构工作标准品进行验证确认；(4)利用确认后的步骤(3)所述的超螺旋结构工作标准品，结合步骤(2)所述的色谱检测条件对供试品进行超螺旋结构纯度的检测。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中柱温为35℃，流动相pH为8.0。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)具体包括如下步骤：(1)质粒线性结构工作标准品制备取2
‑
5μg质粒，用MluI
‑
HF对质粒进行单酶切，将单酶切产物进行醇化，醇化后产物用流动相...

【专利技术属性】
技术研发人员：张同存，张琴星，马传艳，彭波，
申请(专利权)人：武汉波睿达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：