一种同时检测苯并[a]芘及其代谢产物的方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种同时检测苯并[a]芘及其代谢产物的方法，包括以下步骤：取待测样品，对所述待测样品进行预处理，所述待测样品含有苯并[a]芘和所述苯并[a]芘的代谢产物；用活化后的C18固相萃取柱对所述预处理后的待测样品进行富集处理，然后对C18固相萃取柱进行洗脱，收集洗脱液；并经浓缩至近干、定容和经过膜处理后，得到处理后的待测样品；采用超高效液相色谱-串联质谱联用检测方式，所述处理后的待测样品经液相色谱分离和多反应监测模式检测后，利用保留时间锁定和特征离子对信息锁定，检测出待测样品中含有的所述苯并[a]芘及其代谢产物。该方法能高选择性检测苯并[a]芘及其代谢产物。本发明专利技术还提供了该方法的应用。本发明专利技术还提供了该方法的应用。本发明专利技术还提供了该方法的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种同时检测苯并[a]芘及其代谢产物的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及分析检测
，具体涉及一种同时检测苯并[a]芘及其代谢产物的方法及其应用。

技术介绍

[0002]苯并[a]芘(Benzo[a]pyrene,B[a]P)，分子式C
20
H
12
，是一种食品和环境中广泛存在的强致癌物质，来源于烹饪加工、吸烟及煤、石油和天然气的不完全燃烧等过程，可通过饮食(如油炸烟熏烧烤类、谷类、蔬菜、脂肪和油类等)、呼吸(如空气、烟草烟雾和汽车尾气等)和皮肤接触等途径进入体内。进入体内的B[a]P除少部分以原形随粪便排出外，大部分被体内的细胞色素P450氧化成一系列环氧化合物包括酚类(例如3-羟基苯并[a]芘(3-OH-B[a]P))，酮类(例如苯并[a]芘-1,6-二酮(1,6-B[a]P-dione)、苯并[a]芘-3,6-二酮(3,6-B[a]P-dione))和二氢化二醇类(例如苯并[a]芘-7,8-二氢二醇(B[a]P-7,8-dihydrodiol))，以及进一步氧化生成的苯并[a]芘-7,8-二氢二醇-9,10-环氧化物(B[a]P-7,8-diol-9,10-epoxide，BPDE)，上述代谢物能与DNA、蛋白以及脂质等生物分子相互作用而表现出毒性。因此，对B[a]P进行定性及定量检测具有重要意义。
[0003]目前B[a]P的人体暴露水平评估方法主要是以尿液的中的3-羟基苯并[a]芘作为标志物。由于尿液中的代谢产物只能反应短期内暴露的情况，而B[a]P暴露是一个长期的过程，因此，现有检测手段仍无法全面有效地监测B[a]P在人体暴露水平，以及B[a]P在体内的代谢情况。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提供了一种同时检测苯并[a]芘及其代谢产物的方法及其应用，该方法能高灵敏的、高选择性的同时检测待测样品中的苯并[a]芘及其代谢产物，能准确、全面地表征苯并[a]芘的暴露水平。
[0005]第一方面，本专利技术提供了一种同时检测苯并[a]芘及其代谢产物的方法，包括以下步骤：
[0006](1)取待测样品，对所述待测样品进行预处理，所述待测样品含有苯并[a]芘和所述苯并[a]芘的代谢产物，所述代谢产物包括3-羟基苯并[a]芘，苯并[a]芘-1,6-二酮、苯并[a]芘-3,6-二酮和苯并[a]芘-7,8-二氢二醇-9,10-环氧化物中的一种或多种；
[0007](2)用活化后的C18固相萃取柱对所述预处理后的待测样品进行富集处理，然后对所述C18固相萃取柱进行洗脱，收集洗脱液；然后对所述洗脱液浓缩至近干后，定容和经过膜处理后，得到处理后的待测样品；
[0008](3)采用超高效液相色谱-串联质谱联用检测方式，所述处理后的待测样品经液相色谱分离和多反应监测模式检测后，利用保留时间锁定和特征离子对信息锁定，检测出所述处理后的待测样品中含有的所述苯并[a]芘和所述苯并[a]芘的代谢产物，所述特征离子对信息包括母离子和子离子。
[0009]本专利技术实施方式中，所述步骤(3)，利用保留时间锁定和特征离子对信息锁定是指：处理后的待侧样品在多反应监测模式下测得的保留时间和特征离子对信息，分别与苯并[a]芘及其代谢产物的标准保留时间和特征离子对信息比对，然后根据比对结果，可以确定所述待侧样品中实际含有的苯并[a]芘及其代谢产物的种类。
[0010]可选地，所述苯并[a]芘及其代谢产物的标准保留时间和特征离子对信息是基于在相同检测条件下，由含有苯并[a]芘及其代谢产物的标准溶液的测定数据组成。
[0011]本专利技术实施方式中，所述处理后的待测样品可以通过高校液相色谱-串联质谱联用仪(UPLC-MS/MS)进行检测。
[0012]可选地，所述待测样品包括哺乳动物体液样品，所述体液样品包括血液样品、尿液样品、脑脊液、组织提取液中的至少一种。其中，所述哺乳动物包括人类。
[0013]可选地，当所述待测样品为血液样品时，可以将所述待测样品经高速离心后，取上清，低温储存备用。其中，所述血液样品时的预处理过程包括：将所述血液样品进行离心处理，收集上清液，然后用有机溶剂多次萃取后得到萃取液，将所述萃取液浓缩至近干，然后复溶至体积小于等于1mL超纯水中。
[0014]进一步地，可选地，所述有机溶剂包括甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、乙腈HE甲醇中的一种或多种。一实施方式中，所述有机溶剂可以为甲基叔丁基醚。
[0015]可选地，所述步骤(3)中，所述超高效液相色谱条件为：BEH C18色谱柱，规格为2.1mm
×
100mm
×
1.7μm，流动相为水和甲醇的混合溶液，按梯度洗脱程序洗脱；进样体积为5.0～20.0μL；洗针液为体积比1:1的乙腈和水的混合溶液。
[0016]可选地，所述梯度洗脱程序为：起始梯度按水：甲醇＝50：50比例洗脱，维持0.5min，然后在0.5～1.0min内，变化为水：甲醇＝20：80比例洗脱，维持至7.0min；然后在7.0～7.5min内，变化为水：甲醇＝0：100比例洗脱，维持至12.0min；然后在12.2min时恢复至所述起始梯度平衡系统至18.0min；流速为200μL/min。
[0017]可选地，所述步骤(3)中，所述串联质谱条件为：电离模式为电喷雾电离，正离子和负离子模式混合；检测方式为选择反应监测；离子源温度为120～150℃，毛细管电压为3.0～4.0kV，锥孔电压为20～40V，脱溶剂温度为300～500℃，脱溶剂气流速为500～700L/h，锥孔气流速为30～80L/h。
[0018]可选地，所述步骤(2)中，所述C18固相萃取柱的活化过程包括为：依次用5.0～10.0mL的二氯甲烷、甲醇和超纯水进行活化，所述活化过程中，所述C18固相萃取柱保持不干状态。
[0019]可选地，所述步骤(2)中，然后对所述C18固相萃取柱进行洗脱的具体过程包括：用5.0～20.0mL超纯水冲洗盛放所述预处理后的待测样品的容器及所述富集处理后的C18固相萃取柱，然后抽干所述富集处理后的C18固相萃取柱中残留水分；依次用5.0～10.0mL甲醇和二氯甲烷进行洗脱。其中，所述洗脱液可以用高纯氮气浓缩至近干，复溶后直接进行仪器分析。
[0020]可选地，所述步骤(2)之后，所述步骤(3)之前还包括配制多个浓度梯度的标准溶液，然后对所述标准溶液进行定量测定并制作标准曲线；所述标准溶液包括苯并[a]芘、3-羟基苯并[a]芘，苯并[a]芘-1,6-二酮、苯并[a]芘-3,6-二酮和苯并[a]芘-7,8-二氢二醇-9,10-环氧化物。
[0021]可选地，将步骤(3)中对所述处理后的待测样本测定获得的数据，代入所述标准曲线，定量分析所述待测样本中的所述苯并[a]芘和所述苯并[a]芘的代谢产物。
[0022]本专利技术第一方面提供的同时检测苯并[a]芘及其代谢产物的方法，采用超高效液相色谱-串联质谱联用方法，能高灵敏、高选择性、快速的检测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种同时检测苯并[a]芘及其代谢产物的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取待测样品，对所述待测样品进行预处理，所述待测样品含有苯并[a]芘和所述苯并[a]芘的代谢产物，所述代谢产物包括3-羟基苯并[a]芘，苯并[a]芘-1,6-二酮、苯并[a]芘-3,6-二酮和苯并[a]芘-7,8-二氢二醇-9,10-环氧化物中的一种或多种；(2)用活化后的C18固相萃取柱对所述预处理后的待测样品进行富集处理，然后对所述C18固相萃取柱进行洗脱，收集洗脱液；然后对所述洗脱液浓缩至近干后，定容和经过膜处理后，得到处理后的待测样品；(3)采用超高效液相色谱-串联质谱联用检测方式，所述处理后的待测样品经液相色谱分离和多反应监测模式检测后，利用保留时间锁定和特征离子对信息锁定，检测出所述处理后的待测样品中含有的所述苯并[a]芘和所述苯并[a]芘的代谢产物，所述特征离子对信息包括母离子和子离子。2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述待测样品包括哺乳动物体液样品，所述体液样品包括血液样品、尿液样品、脑脊液、组织提取液中的至少一种。3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述超高效液相色谱条件为：BEH C18色谱柱，规格为2.1mm
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100mm
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1.7μm，流动相为水和甲醇的混合溶液，按梯度洗脱程序洗脱；进样体积为5.0～20.0μL；洗针液为体积比1:1的乙腈和水的混合溶液。4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序为：起始梯度按水：甲醇＝50：50比例洗脱，维持0.5min，然后在0.5～1.0min内，变化为水：甲醇＝20：80比例洗脱，维持至7.0min；然后在7.0～7.5min内，变化为水：甲醇＝0：100比例洗脱，维持至12.0min；然后在12.2...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗茜，李芳，向彬彬，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：