提高蜂王育成量的饲料添加剂及含该饲料添加剂的饲料制造技术

本发明专利技术所提供的一种提高蜂王育成量的饲料添加剂，其活性成分为3‑脱氮基腺苷。实验表明对用工蜂饲料喂养的工蜂幼虫施用一定浓度的DAA能够显著降低幼虫总体的m

【技术实现步骤摘要】
提高蜂王育成量的饲料添加剂及含该饲料添加剂的饲料
本专利技术具体涉及一种提高蜂王育成量的饲料添加剂及含该饲料添加剂的饲料。
技术介绍
在蜜蜂级型分化过程中，遗传物质相同的雌性蜜蜂幼虫，因食物不同而发育为可育蜂王和不育工蜂两个迥异的级型。蜂王的数量很少，自然情况下，一个蜂群只培育一只蜂王。但在实际生产中，需要培育数量较多的蜂王以扩大蜂群数量，生产王浆或培育蜂王品种，达到蜂产品提质增产的目的。当前的普遍方法是通过在蜂房加入人工王台诱导蜜蜂育王，但这样操作繁琐且不能脱离蜂群，由于蜜蜂对人工王台的接受度有限，培育的蜂王数量并不太多。因此，在蜜蜂级型分化的机制入手，通过人工培育手段提高蜂王育种数量成为蜂业的重大需求。
技术实现思路
针对于
技术介绍
中存在的问题与限制，本专利技术的目的在于提供一种提高蜂王育成量的饲料添加剂及含该饲料添加剂的饲料。本专利技术提供抑制mRNAm6A修饰的物质在培育蜂王中的应用或在制备培育蜂王产品中的应用。所述产品可为饲料添加剂或饲料。上述应用中，所述抑制mRNAm6A修饰的物质含有3-脱氮基腺苷，或所述抑制mRNAm6A修饰的物质为3-脱氮基腺苷。本专利技术所提供的一种提高蜂王育成量的饲料添加剂，其活性成分为3-脱氮基腺苷(3-deazaadenosine，DAA)。上饲料添加剂中，所述3-脱氮基腺苷在蜜蜂饲料中的终浓度为300μM-400μM。上饲料添加剂中，所述3-脱氮基腺苷饲喂量为每日每只幼虫饲喂1.2μg-2.6μg。本专利技术还提供含有上述饲料添加剂的蜜蜂饲料。上述蜜蜂饲料中，所述蜜蜂饲料由工蜂基础饲料和所述饲料添加剂混合而成，所述饲料添加剂按照所述3-脱氮基腺苷在工蜂基础饲料中的终浓度为300μM-400μM的量添加。上述蜜蜂饲料中，所述工蜂基础饲料可由如下重量份数的原料混合而成：3-6份王浆、0.5-0.7份果糖、0.5-0.7份葡萄糖、0.05-0.15份酵母提取物，3.7份水。上述蜜蜂饲料中，所述工蜂基础饲料优选由如下重量份数的原料混合而成：5份王浆、0.6份果糖、0.6份葡萄糖、0.1份酵母提取物，3.7份水。上述蜜蜂饲料中，所述蜜蜂饲料饲喂量为每日每只幼虫饲喂15-25μl，优选20μl。本专利技术还保护一种提高蜂王育成量的方法，包括以含有上述饲料添加剂的蜜蜂饲料饲喂工蜂幼虫。上述饲料添加剂、或上述蜜蜂饲料、或上述方法在蜜蜂养殖中的应用也属于本专利技术的保护范围。本专利技术所提供的一种提高蜂王育成量的饲料添加剂，其活性成分为3-脱氮基腺苷。实验表明对用工蜂饲料喂养的工蜂幼虫施用一定浓度的DAA能够显著降低幼虫总体的m6A甲基化水平，并诱导发育出蜂王的特征。因此，应用DAA可以在人工培养的情况下，仅用成本较低的工蜂饲料，就可以批量培育蜂王，是一种快捷、高效、可控的蜂王培育方法。附图说明图1为本专利技术实施例1中比较工蜂幼虫与同日龄蜂王幼虫的m6A甲基化水平的结果图片。图1中的A图为LC-MS/MS定量测量比较工蜂幼虫与同日龄蜂王幼虫中m6A甲基化水平的结果图。图1中的B图为m6A-seq检测出的各日龄工蜂幼虫样本与同日龄蜂王幼虫样本中被m6A修饰的转录本数量和m6A甲基化数量。图1中的C图为m6A-seq比较蜂王幼虫和同日龄工蜂幼虫之间m6A甲基化差异的火山图，右侧点表示高甲基化，而左侧点表示低甲基化，每个面板中显示了不同的m6A甲基化数。图2为本专利技术实施例1中DAA对m6A甲基化的抑制诱导工蜂发育出蜂王特征的图片。图2中的A图为LC-MS/MS分析不同浓度DAA处理后蜜蜂幼虫样品中mRNA的m6A/A比值的结果图。图2中的B图为蜂王和工蜂幼虫各生长发育阶段保幼激素滴度的区别，引用自KlausHartfelder和WolfEngels的研究(1998)。图2中的C图为用300μM和400μMDAA处理工蜂幼虫造成保幼激素滴度的变化图。图2中的D图为DAA处理组与未处理组之间的蜂王发育特异标记基因(AmTOR，AmIRS和AmEgfr)的表达差异。表达量为以AmActin(GB44311)为内参基因的相对表达量。数据为三个独立实验的平均值±标准误，*代表显著性分析结果为P＜0.05，**代表显著性分析结果为P<0.01。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本专利技术，而不是为了限制本专利技术的范围。以下提供的实施例可作为本
普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本专利技术的限制。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下述实施例中，如无特殊说明，序列表中各核苷酸序列的第1位均为相应DNA的5′末端核苷酸，末位均为相应DNA的3′末端核苷酸。以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。实施例11974年首次在mRNA中发现腺嘌呤上的一个甲基，这个被修饰的碱基被称作N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine)，简写为m6A。专利技术人进行了如下实验：1.工蜂幼虫中m6A甲基化含量明显高于蜂王幼虫所用蜜蜂为意大利蜜蜂(Apismellifera)，购自蜂场，由蜂农饲养。在蜂王和工蜂的三个幼虫发育阶段收集了五种幼虫样本：1日龄幼虫、3日龄蜂王和工蜂幼虫、5日龄蜂王和工蜂幼虫。从这五种样品中分别分离mRNA，用三重四级杆串联质谱(LC-MS/MS)定量测量了mRNA上m6A甲基化水平。结果见图1的A图，表明不论3日龄还是5日龄，工蜂幼虫的m6A水平高于同日龄蜂王幼虫。通过m6A-seq技术，用m6A抗体(公司SynapticSystems，货号202003)免疫共沉淀含有m6A甲基化的转录本并通过高通量测序(测序平台IlluminaHiSeqXTensequencingplatform)确定被m6A甲基化的基因。m6A-seq结果显示，不论m6A甲基化的数量还是被m6A修饰的基因数量，工蜂幼虫都显著高于同日龄的蜂王幼虫(图1的B图)。火山图分析结果也表明，不论3日龄还是5日龄，工蜂幼虫都具有较多的甲基化上调的基因(图1的C图)。以上结果表明，工蜂幼虫跟蜂王幼虫相比具有更高的m6A甲基化水平。根据以上研究结果，专利技术人推测，通过降低工蜂幼虫的m6A甲基化水平肯能会诱导工蜂幼虫发育为蜂王。更重要的是，通过饲喂甲基化抑制药物，可以降低幼虫的甲基化水平，而不会对幼虫的生长发育造成破坏性影响。2.用DAA抑制m6A甲基化可以诱导工蜂发育出蜂王特征基于以上的研究基础，专利技术人选择了一种甲基化抑制药物——3-脱氮基腺苷(3-deazaadenosine，DAA)。DAA是一种S-腺苷高半胱氨酸水解酶抑制剂，能够抑制S-腺苷甲硫氨酸依赖的甲基化，已在细胞实验中证实DAA能够强烈抑制m6A甲基化(Fustinetal.,2013)，因此专利技术人选用DAA作为甲基化抑制本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.抑制mRNAm

【技术特征摘要】
1.抑制mRNAm6A修饰的物质在培育蜂王中的应用或在制备培育蜂王产品中的应用。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述抑制mRNAm6A修饰的物质含有3-脱氮基腺苷，或所述抑制mRNAm6A修饰的物质为3-脱氮基腺苷。


3.一种提高蜂王育成量的饲料添加剂，其特征在于：其活性成分为3-脱氮基腺苷。


4.根据权利要求3所述的饲料添加剂，其特征在于：所述3-脱氮基腺苷在蜜蜂饲料中的终浓度为300μM-400μM。


5.蜜蜂饲料，其特征在于：含有权利要求3或4所述的饲料添加剂。


6.根据权利要求5所述的蜜蜂饲料，其特征在于：所述蜜蜂饲料由工蜂基础饲料和权利要求3或4所述饲料添加剂混合而成...

【专利技术属性】
技术研发人员：王妙，吴黎明，薛晓锋，齐素贞，赵柳微，王凯，王晓颖，
申请(专利权)人：中国农业科学院蜜蜂研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11