一种通过单碱基编辑靶基因启动子失活基因的方法技术

本发明专利技术公开了一种通过单碱基编辑靶基因启动子失活基因的方法，所述靶基因的启动子区域包含5’非翻译区(5’UTR)，所述方法包括，向靶细胞中导入靶向所述靶基因启动子的5’UTR区域的单碱基编辑系统；使靶基因产生1个或多个上游开放阅读框(uORF)从而导致靶基因失活。本发明专利技术具有不引发DNA双链断裂，精确高效以及对靶基因mRNA水平影响小等优点。

【技术实现步骤摘要】
一种通过单碱基编辑靶基因启动子失活基因的方法
本专利技术涉及基因工程领域。具体涉及一种通过单碱基编辑靶基因启动子失活基因的方法及应用。技术背景基因功能性缺失(Lossoffunction)是研究基因功能的重要手段，也是理解生命活动，开发新药和进行动植物种质创新的基础途径。常规的使基因失活的方法主要包括EMS诱变和T-DNA随机插入。然而，此二者有着筛选工作强度高，所需实验空间大以及靶向性差等缺点，令多数研究者望而却步。近年来，随着以CRISPR/Cas9系统为代表的、高效精确的基因编辑工具迅速出现以及广泛应用，生物基因功能的研究获得了长足发展。该系统主要由核酸酶Cas9以及向导RNA(sgRNA)组成。在sgRNA的引导下，Cas9结合于目标基因位点处并行使核酸酶功能，产生DNA双链断裂，然后由宿主细胞内源修复机制带来突变。尽管如此，近期一些在哺乳动物细胞中的研究表明，由CRISPR/Cas9基因编辑系统引发的DNA双链断裂，可能会导致如p53通路的激活以及基因组大片段的倒置、易位和缺失等难以预料的后果。上游开放阅读框(uORF)是本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种通过单碱基编辑靶基因启动子失活基因的方法，所述靶基因的启动子区域包含5’非翻译区(5’UTR)，其特征在于，所述方法包括，向靶细胞中导入靶向所述靶基因启动子的5’UTR区域的单碱基编辑系统；使靶基因产生1个或多个上游开放阅读框(uORF)从而导致靶基因失活。/n

【技术特征摘要】
1.一种通过单碱基编辑靶基因启动子失活基因的方法，所述靶基因的启动子区域包含5’非翻译区(5’UTR)，其特征在于，所述方法包括，向靶细胞中导入靶向所述靶基因启动子的5’UTR区域的单碱基编辑系统；使靶基因产生1个或多个上游开放阅读框(uORF)从而导致靶基因失活。


2.根据权利要求1所述的通过单碱基编辑靶基因启动子失活基因的方法，其特征在于，其中导入靶向所述靶基因启动子的5’UTR区域的单碱基编辑系统包括基于CRISPR/Cas9系统的胞嘧啶单碱基系统(CBEs)、腺嘌呤单碱基编辑系统(ABEs)以及先导编辑系统(PEs)。


3.根据权利要求1所述的通过单碱基编辑靶基因启动子失活基因的方法，其特...

【专利技术属性】
技术研发人员：李剑峰，熊翔宇，黎镇祥，梁洁坪，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：广东;44