一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的方法和装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及植株培养技术领域，尤其涉及一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的方法，还提供了一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的装置，包括底板，所述底板的上端面垂直固定安装有支撑板，所述支撑板的上端固定安装有朝向前方延伸的顶板，所述底板的上端面靠近前方处通过支撑结构转动安装有转动盘，所述底板的上端面靠近转动盘的后方通过驱动机构安装有驱动盘，所述转动盘的下端面边沿处与驱动盘的上端面边沿处分别延伸出处于前后方向一条直线上的第一连接轴与第二连接轴，所述第一连接轴与第二连接轴的外表面共同活动套装有传动杆，本发明专利技术可以高效率进行转基因苹果植株的构建，提高转基因苹果组培苗的成活率，提高转化效率。

【技术实现步骤摘要】
一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的方法和装置
本专利技术涉及植株培养
，尤其涉及一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的方法和装置。
技术介绍
在苹果上已经获得了转基因植株，以达到提高苹果植株抗虫、抗药剂等功能的苹果植株，以达到提高提升植株产量的目的，但在苹果叶片转基因培养过程中，现有技术中不具有培养出转基因苹果植株的方法，在培养时，液体菌液需要震荡培养，确保氧气的充分进入菌液中，促进菌株的繁殖生长，现有技术中通过振荡器进行震荡，培养瓶体过高时空气进入效果不佳，瓶体矮时内侧菌液易被震荡溢出，使用效果差，在苹果叶片与菌液混合后，苹果叶片需要镊子夹取出来，由于叶片在菌液中夹取颇为不便。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决
技术介绍
中存在的缺点，而提出的一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的方法和装置。为达到以上目的，本专利技术采用的技术方案为一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的方法，包括以下步骤：S1、选取苹果树枝顶端刚刚展开的3-6片叶子，剪下来放到灭菌后的滤纸上；S2、将所用叶片都剪好后本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的方法，其特征在于：包括以下步骤：/nS1、选取苹果树枝顶端刚刚展开的3-6片叶子，剪下来放到灭菌后的滤纸上；/nS2、将所用叶片都剪好后，用干净无菌的刀片将叶片垂直于主脉划2-3刀，将所有叶片划完后，放到选择培养基中在完全黑暗条件下培养2-3天；/nS3、2-3天后，将叶片放到稀释好的菌液中，混合摇晃15分钟，用镊子将所有叶片取出放在无菌滤纸板上吸干水分，叶背朝下铺到选择培养基上，组培间完全黑暗培养16-25天；/nS4、1个月后，可以看到切口处有密密麻麻的黄色愈伤组织长出，将叶片铺到新的选择培养基，放到光下培养；/nS5、抗性芽见光分化1个月后，将抗...

【技术特征摘要】
1.一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、选取苹果树枝顶端刚刚展开的3-6片叶子，剪下来放到灭菌后的滤纸上；
S2、将所用叶片都剪好后，用干净无菌的刀片将叶片垂直于主脉划2-3刀，将所有叶片划完后，放到选择培养基中在完全黑暗条件下培养2-3天；
S3、2-3天后，将叶片放到稀释好的菌液中，混合摇晃15分钟，用镊子将所有叶片取出放在无菌滤纸板上吸干水分，叶背朝下铺到选择培养基上，组培间完全黑暗培养16-25天；
S4、1个月后，可以看到切口处有密密麻麻的黄色愈伤组织长出，将叶片铺到新的选择培养基，放到光下培养；
S5、抗性芽见光分化1个月后，将抗性芽转移到继代培养基，放到光下培养，长成正常形态后继代，检测，扩繁。


2.根据权利要求1所述的一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的方法，其特征在于：所述选择培养基包括：4.43-4.46g/LMS培养基、2-3mg/L噻苯隆、0.5-0.6mg/L萘乙酸、30-32g/L蔗糖、7.5-8.0g/L琼脂，调pH到5.6，灭菌后倒板前加入25-28mg/L卡那霉素与500-550mg/L头孢霉素。


3.根据权利要求1所述的一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的方法，其特征在于：所述继代培养基包括：4.43-4.46g/LMS培养基、0.5-1.0mg/L6-苄氨基嘌呤、0.2-0.3mg/L吲哚乙酸、30-32g/L蔗糖、7.05-7.2g/L琼脂，调pH到5.8-6.0。


4.根据权利要求1所述的一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的方法，其特征在于：所述菌液制备包括以下步骤：
将负80度保存的甘油菌划线涂板，在Rif+基因载体抗性的LB固体培养基上活化2-3天；将农杆菌菌株用无菌牙签划下一些在100mlRif+载体抗性的LB液体培养基中，加入适量的乙酰丁香酮28℃震荡培养过夜，至OD600＝1.5-2.0；5000rpm常温离心5min；将菌块用无菌双蒸水重悬，稀释为OD600＝0.6-1.0。


5.根据权利要求1所述的一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的方法，其特征在于：所述菌液制备包括以下步骤：
将新鲜转化筛选出的农杆菌用无菌牙签重新划至新的对应抗性的LB液体培养基(60-80ml)中，28℃震荡培养过夜，至OD600＝1.5-2.0；5000rpm常温离心5min；将菌块用无菌双蒸水重悬，稀释为OD600＝0.6-1.0。


6.一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的装置，用以权利要求1-5任意一条所述的一种苹果叶片侵染获得转基因苹果组培苗的方法中菌液的制备以及步骤S3中将叶片与菌液混合摇晃，包括底板(1)，其特征在于：所述底板(1)的上端面垂直固定安装有支撑板(2)，所述支撑板(2)的上端固定安装有朝向前方延伸的顶板(3)，所述底板(1)的上端面靠近前方处通过支撑结构转动安装有转动盘(6)，所述底板(1)的上端面靠近转动盘(6)的后方通过驱动机构安装有驱动盘(7)，所述转动盘(6)的下端面...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝玉金，冯资权，王小非，王寻，由春香，
申请(专利权)人：山东农业大学，
类型：发明
国别省市：山东;37