基于SERS传感基底的多种肿瘤标志物的非诊断性检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于SERS传感基底的多种肿瘤标志物的非诊断性检测方法。该检测方法包括如下步骤：(1)将柠檬酸三钠溶液加入至85～95℃的氯化金酸溶液中，保温反应，降温，离心，得到纳米金体系；(2)将纳米金体系与含拉曼标签分子的溶液在搅拌下混合反应，静置，得到纳米金‑标签分子体系；(3)将蛋白点样液与肿瘤标志物以1:8.7～9.3的体积比混合，并以均匀阵列点样，静置，得到抗原阵列芯片；(4)将与肿瘤标志物对应的抗体加入至纳米金‑标签分子体系中混合反应，得到纳米金‑标签分子‑抗体体系；(5)抗原阵列芯片中点样样品的封闭步骤；(6)抗原抗体的反应步骤；(7)拉曼扫描成像步骤。本发明专利技术操作简单，工艺稳定性好。

【技术实现步骤摘要】
基于SERS传感基底的多种肿瘤标志物的非诊断性检测方法
本专利技术涉及肿瘤标志物检测
，具体涉及基于SERS传感基底的多种肿瘤标志物的非诊断性检测方法。
技术介绍
肿瘤标志物又称肿瘤标记物，是指特征性存在于恶性肿瘤细胞，或由恶性肿瘤细胞异常产生的物质，或是宿主对肿瘤的刺激反应而产生的物质，并能反映肿瘤发生、发展，监测肿瘤对治疗反应的一类物质。肿瘤标志物存在于肿瘤患者的组织、体液和排泄物中，能够用免疫学、生物学及化学的方法检测到。一般地，一种癌症有多种相关的肿瘤标志物，一种肿瘤标志物又可能表达了几种癌症。为了避免不同的人在表达方面的差异而引起的错误检测，多种肿瘤标志物同时检测可以对癌症的鉴别诊断提供有力的技术支持。目前为止，对于肿瘤标志物的检测方法已经有很多，包括传统的放射免疫方法、酶联免疫吸附测定方法、化学发光免疫方法和荧光免疫方法等。上述方法在简化操作步骤、降低检测成本方面仍存在挑战。表面增强拉曼现象(SERS)自报道以来，相关理论和应用研究一直是科学研究的热点。将表面增强拉曼现象和抗体抗原结合进行免疫检测也成为研究的热点。但该方法操作仍比较复杂，且工艺稳定性仍待提高。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种基于SERS传感基底的多种肿瘤标志物的非诊断性检测方法，该检测方法操作简单，工艺稳定性好。本专利技术提供一种基于SERS传感基底的多种肿瘤标志物的非诊断性检测方法，包括以下步骤：(1)将柠檬酸三钠溶液加入至85～95℃的氯化金酸溶液中，保温反应20～30min，降温，离心，得到上清液和纳米金体系；其中，该上清液与纳米金体系的体积比为9～9.3:1；(2)将所述纳米金体系与含拉曼标签分子的溶液在搅拌下混合反应，静置，得到纳米金-标签分子体系；(3)将蛋白点样液与待测的肿瘤标志物以1:8.7～9.3的体积比混合，并以均匀阵列点样，静置，得到抗原阵列芯片；(4)将与所述肿瘤标志物对应的抗体加入至步骤(2)得到的纳米金-标签分子体系中混合反应1.5～2.5h，加入10wt％的BSA硼酸缓冲液反应，离心并将上清液去除，下层物质即为纳米金-标签分子-抗体体系；将该体系储存于含0.1wt％BSA的硼酸缓冲液中；(5)将步骤(3)得到的抗原阵列芯片置于含1wt％的BSA的磷酸缓冲盐溶液中1h，用磷酸盐吐温缓冲液冲洗抗原阵列芯片，将抗原阵列芯片置于摇床上；(6)将步骤(4)得到的纳米金-标签分子-抗体体系滴入所述抗原阵列芯片的阵列中反应25～30min，用磷酸盐吐温缓冲液清洗；(7)将步骤(6)所得的样本用显微共焦拉曼光谱仪扫描成像。根据本专利技术的检测方法，优选地，步骤(1)中，氯化金酸溶液的浓度为0.008～0.012wt％，柠檬酸三钠溶液的浓度为0.9～1.2wt％。根据本专利技术的检测方法，优选地，步骤(1)中，所述柠檬酸三钠溶液与氯化金酸溶液的体积比为1:98～102。根据本专利技术的检测方法，优选地，步骤(1)中，所述纳米金体系的粒径为40～60nm。根据本专利技术的检测方法，优选地，步骤(2)中，纳米金体系与含拉曼标签分子的溶液的体积比为95～105:1。根据本专利技术的检测方法，优选地，所述拉曼标签分子选自4-氨基苯硫酚、二硫代双(2-硝基苯甲酸)和4-巯基苯甲酸中的一种。根据本专利技术的检测方法，优选地，步骤(3)中，形成均匀阵列所用基底设备为具有均匀格栏的石英片。根据本专利技术的检测方法，优选地，步骤(3)中，蛋白点样液与抗原的体积比为1:8.9～9.1。根据本专利技术的检测方法，优选地，步骤(4)中，所述10wt％的BSA硼酸缓冲液与纳米金体系的体积比为0.07～0.15:1。根据本专利技术的检测方法，优选地，步骤(4)中，所述0.1wt％的BSA硼酸缓冲液的pH值为7.3～7.5。本专利技术的基于SERS传感基底的多种肿瘤标志物的非诊断性检测方法操作简单，工艺稳定性好。并且，本专利技术的检测方法灵敏度较高，成本较低。附图说明图1为实施例1中步骤(3)的均匀阵列图。图2为实施例1制备的抗原抗体结合样本的拉曼扫描成像图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明，但本专利技术的保护范围并不限于此。本专利技术的基于SERS传感基底的多种肿瘤标志物的非诊断性检测方法包括如下步骤：(1)纳米金体系的制备步骤；(2)纳米金-标签分子体系的制备步骤；(3)SERS基底阵列点样步骤；(4)纳米金-标签分子-抗体体系的制备步骤；(5)步骤(3)所得的点样样品的封闭步骤；(6)抗原抗体的反应步骤；(7)拉曼扫描成像步骤。下面进行详细描述。(1)纳米金体系的制备步骤将柠檬酸三钠溶液加入至85～95℃的氯化金酸溶液中，保温反应20～30min，降温，离心，得到上清液和纳米金体系；其中，该上清液与纳米金体系的体积比为9～9.3:1。在本专利技术中，氯化金酸溶液的浓度为0.008～0.012wt％，优选为0.009～0.011wt％。柠檬酸三钠溶液的浓度为0.9～1.2wt％，优选为0.9～1.1wt％。柠檬酸三钠溶液与氯化金酸溶液的体积比为1:98～102，优选为1:99～101。这样有利于形成稳定的纳米金体系。在本专利技术中，先将氯化金酸溶液加热至85～95℃，优选为90～95℃，然后搅拌下，迅速加入柠檬酸三钠溶液。在本专利技术中，保温反应的反应温度为85～95℃，优选为90～95℃；反应时间为20～30min，优选为23～27min。在本专利技术中，降温至室温。室温可以为20～35℃。在本专利技术中，离心指的是采用离心机离心。离心后，抽取上清液，得到剩余液体，剩余液体即为所需要的纳米金体系。该上清液与纳米金体积的体积比可以为9～9.3:1，优选为9～9.1:1。所得到的纳米金体系的粒径为40～60nm。根据本专利技术的方法所得到的纳米金体系有利于降低拉曼扫描成像的检测限。(2)纳米金-标签分子体系的制备步骤将步骤(1)得到的纳米金体系与含拉曼标签分子的溶液在搅拌下混合反应，静置，得到纳米金-标签分子体系。在本专利技术中，拉曼标签分子选自4-氨基苯硫酚、二硫代双(2-硝基苯甲酸)和4-巯基苯甲酸中的一种。优选地，拉曼标签分子选自二硫代双(2-硝基苯甲酸)和4-巯基苯甲酸中的一种。在本专利技术中，含拉曼标签分子的溶液中的溶剂为无水乙醇或水。拉曼标签分子为二硫代双(2-硝基苯甲酸)(简写为DTNB)时，溶剂可以采用无水乙醇。拉曼标签分子为4-氨基苯硫酚(简写为4-ATP)时，溶剂可以采用超纯水。拉曼标签分子为4-巯基苯甲酸(4-MBA)时，溶剂可以采用超纯水。含拉曼标签分子的溶液的浓度可以为10-3M。在本专利技术中，纳米金体系与含拉曼标签分子的溶液的体积比为95～105:1，优选为98～103:1，如100:1。根据本专利技术的一个具体实施方式，将100体积的纳米金体系在剧烈搅拌下与1体积的浓度为10本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于SERS传感基底的多种肿瘤标志物的非诊断性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将柠檬酸三钠溶液加入至85～95℃的氯化金酸溶液中，保温反应20～30min，降温，离心，得到上清液和纳米金体系；其中，该上清液与纳米金体系的体积比为9～9.3:1；/n(2)将所述纳米金体系与含拉曼标签分子的溶液在搅拌下混合反应，静置，得到纳米金-标签分子体系；/n(3)将蛋白点样液与待测的肿瘤标志物以1:8.7～9.3的体积比混合，并以均匀阵列点样，静置，得到抗原阵列芯片；/n(4)将与所述肿瘤标志物对应的抗体加入至步骤(2)得到的纳米金-标签分子体系中混合反应1.5～2.5h，加入10wt％的BSA硼酸缓冲液反应，离心并将上清液去除，下层物质即为纳米金-标签分子-抗体体系；将该体系储存于含0.1wt％BSA的硼酸缓冲液中；/n(5)将步骤(3)得到的抗原阵列芯片置于含1wt％的BSA的磷酸缓冲盐溶液中1h，用磷酸盐吐温缓冲液冲洗抗原阵列芯片，将抗原阵列芯片置于摇床上摇动；/n(6)将步骤(4)得到的纳米金-标签分子-抗体体系滴入所述抗原阵列芯片的阵列中反应25～30min，用磷酸盐吐温缓冲液清洗；/n(7)将步骤(6)所得的样本用显微共焦拉曼光谱仪扫描成像。/n...

【技术特征摘要】
1.一种基于SERS传感基底的多种肿瘤标志物的非诊断性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将柠檬酸三钠溶液加入至85～95℃的氯化金酸溶液中，保温反应20～30min，降温，离心，得到上清液和纳米金体系；其中，该上清液与纳米金体系的体积比为9～9.3:1；
(2)将所述纳米金体系与含拉曼标签分子的溶液在搅拌下混合反应，静置，得到纳米金-标签分子体系；
(3)将蛋白点样液与待测的肿瘤标志物以1:8.7～9.3的体积比混合，并以均匀阵列点样，静置，得到抗原阵列芯片；
(4)将与所述肿瘤标志物对应的抗体加入至步骤(2)得到的纳米金-标签分子体系中混合反应1.5～2.5h，加入10wt％的BSA硼酸缓冲液反应，离心并将上清液去除，下层物质即为纳米金-标签分子-抗体体系；将该体系储存于含0.1wt％BSA的硼酸缓冲液中；
(5)将步骤(3)得到的抗原阵列芯片置于含1wt％的BSA的磷酸缓冲盐溶液中1h，用磷酸盐吐温缓冲液冲洗抗原阵列芯片，将抗原阵列芯片置于摇床上摇动；
(6)将步骤(4)得到的纳米金-标签分子-抗体体系滴入所述抗原阵列芯片的阵列中反应25～30min，用磷酸盐吐温缓冲液清洗；
(7)将步骤(6)所得的样本用显微共焦拉曼光谱仪扫描成像。


2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，氯化金酸溶液的浓度为0.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：程琳，朱桂贤，刘淦楠，许佳琦，
申请(专利权)人：北京信息科技大学，
类型：发明
国别省市：北京;11