一种CHI3L1/LN检测卡、其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种CHI3L1/LN检测卡、其制备方法和应用，属于纳米材料和纳米医学领域，其中所述采用的稀土纳米探针为核壳结构氟化铒钠包覆氟化钇钠，粒径为20nm～30nm，其组成为：NaErF

【技术实现步骤摘要】
一种CHI3L1/LN检测卡、其制备方法和应用
本专利技术属于纳米材料和纳米医学领域，尤其是一种CHI3L1/LN检测卡、其制备方法和应用。
技术介绍
肝癌(HCC)是最常见的恶性肿瘤之一，同时也是排列全球第三位的肿瘤相关致死原因。其发病率在我国仅次于肺癌，居第二位。我国每年约33万人死于肝癌，病死率高。肝癌中＞70％的人合并有肝硬化，而肝硬化患者有50％左右可进展为肝癌。肝纤维化导致的肝硬化被定义为肝纤维化的晚期阶段，由肝纤维化发展至肝硬化是一个连续的动态发展过程，且肝纤维化和早期肝硬化是可逆的，因此，早期发现肝纤维化并及时治疗，将肝纤维化控制在可逆阶段，至关重要。CHI3L1基因位于人类染色体1q32.1，包含7948个碱基和10个外显子，其序列高度保守。CHI3L1为糖基水解酶家族成员之一，能结合壳多糖，但无壳多糖的活性，在炎症和组织重塑中起重要作用。CHI3L1在肝纤维化进展中具有多重角色：激活星状细胞的活化与增殖，参与纤维化细胞的形成；其催化区域能和IL-13Rα2的胞外区域特异性地结合，调节部分细胞反应，促进胶原蛋白等肝纤维化蛋白的产生；作为分泌的细胞外基质蛋白的组成部分，参与纤维化的形成，同时，通过信号通路，形成正向反馈，加速纤维化的进程。近年来，大量的研究表明：YKL-40是一种功能强大的纤维化标志物，具有较高的诊断准确性，尤其是在HCV相关肝病中。它的测定可证实和提高诊断准确性，尤其是在肝纤维化的早期阶段；并且YKL-40血清标志物可预测晚期纤维化和肝硬化。随着肝纤维化程度的加重而增加。肝纤维化的形成包含了三个方面，分别是肝损伤因子、细胞因子改变、细胞外基质代谢异常并组织重建；而肝纤维的异常沉积的细胞外机制有常常包含了胶原蛋白(I、Ⅲ、Ⅳ、V、Ⅵ)、蛋白多糖(HA)、糖蛋白(FN、LN、VN等)，因此当前认为具有诊断价值的指标为血清血清PCⅢ，HA，LN等。PCⅢ作为反应间质胶原合成的重要指标，其一个重要特点便可以在细胞外胶原纤维形成时或者形成以后依然保留着氨基酸的肽链，而随着胶原纤维的不断形成，这些没有被清除的肽段便开始脱离前胶原，并且以游离片段的形势出现在外周血中，并随着胶原纤维合成的活跃而不断增多。因此可以认为PCⅢ跟肝纤维化的活动存在密切相关性，并且在肝纤维化胶原合成时，早期主要主要为Ⅲ型。HA作为ECM中最重要的糖胺多糖成分，在肝纤维化早期，血清中的HA呈现出显著增加。HA不仅可以当作是反映肝纤维化的敏感指标，而且还能够直接反映肝功能的损伤程度因此，将CHI3L1、LN、HA、PCⅢ等其他血清肝纤维化指标进行联合检测可提高肝纤维诊断的准确性和可靠性。现有技术中肝纤维化标志物仅针对单一的指标有LN、CHI3L1，检测方法主要有免疫比浊法、荧光免疫层析法、胶体金法等。其中胶体金法具有操作简单快速的优点，但灵敏度低且定量不准确；免疫比浊法较为敏感、准确，可应用于全自动生化仪，但需要仪器且耗时较长，适合处理大量样本，无法满足快速检测的目的；免疫荧光法是将抗体共价结合于荧光微球表面活性基团上，通过激发后检测线是否产生荧光来判断结果，快速便捷可准确定量同时具有高灵敏度、标记物稳定等优点，在医学免疫检测领域广泛应用。稀土纳米探针具有荧光寿命长、发射峰半峰宽很窄和Stokes位移大等光学特性，在检测中能够有效降低背景荧光的干扰，能够实现高灵敏度的分析检测，同时还能够进行多标记，实现同时检测样品中的多种物质。不仅如此，稀土纳米探针还具有高光化学稳定性、生物兼容性等特点，能够保证检测过程信号的稳定性，提高检测灵敏度，已经在体外诊断领域得到了广泛的应用。因此拟基于稀土纳米探针优异的光学特性和生物兼容性，开发一种具有灵敏度高、快速测定血液中CHI3L1/LN、检测准确度高的试剂盒及方法具有重要意义。
技术实现思路
专利技术目的：提供一种CHI3L1/LN检测卡、其制备方法和应用，以解决
技术介绍
中所涉及的问题。技术方案：本专利技术提供一种CHI3L1/LN检测卡，包括：底衬；作为所述CHI3L1/LN检测卡的基底；包被膜；设置于所述底衬上表面的中部；结合垫：搭接设置于所述包被膜的上表面的一端；样品垫；搭接设置于所述结合垫的上表面的一端；吸水纸；搭接设置于所述包被膜的上表面的另一端；其中，所述结合垫喷涂有微球线，所述微球线为稀土纳米探针标记的LN抗体1、CHI3L1抗体1、兔IgG抗体；所述包被膜上依次设置有检测线和质控线，所述检测线靠近所述结合垫；所述检测线包被有LN抗体2、CHI3L1抗体2，质控线包被有羊抗兔IgG抗体。优选地，所述稀土纳米探针为核壳结构氟化铒钠包覆氟化钇钠，其组成为：NaErF4@NaYF4；其中，NaErF4为全铒掺杂核结构；NaYF4为壳层，@表示NaYF4包覆在NaErF4表面。优选地，所述稀土纳米探针在基态下稳定，在808nm的激发光源作用下发射出波长范围在500-550nm，640-680nm和1500-1600nm的三发射荧光。优选地，所述稀土纳米探针的制备活化方法，包括以下步骤：步骤一：合成氟化铒钠核结构：在容器中，加入油酸、1-十八烯、铒的硝酸盐或醋酸盐或氯化物、NaOH和氟化铵甲醇混合溶液，并进行反应；随后用环己烷乙醇混合液洗涤，分散于环己烷中，得到NaErF4纳米探针环己烷溶液；步骤二：制备核壳结构稀土纳米探针：在容器中，加入油酸、1-十八烯、醋酸钇、NaOH和氟化铵甲醇混合溶液、NaErF4纳米探针环己烷溶液，并进行反应，用环己烷乙醇混合液洗涤3～4次，分散于环己烷中；用酸洗法将探针转移至水相，再在探针表面修饰羧基，得到水溶性NaErF4@NaYF4稀土纳米探针；步骤三：活化稀土纳米探针：对步骤二的稀土纳米探针进行超声波处理和离心处理，对沉淀物用10～100mM，pH为5.0～7.0的MES溶液洗涤；加入碳二亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺，混匀后高速离心，对沉淀物用pH为5.0～7.0的MES溶液洗涤，即得到活化稀土纳米探针。优选地，所述结合垫上喷涂的稀土纳米探针标记的LN、CHI3L1、兔IgG抗体的含量为50～200μg抗体/200μl荧光微球。优选地，所述检测线中LN抗体2和CHI3L1抗体2包被浓度为0.1～2mg/ml、用量为0.5～1.5μl包被液量/cm膜，所述质控线中羊抗兔IgG抗体包被浓度为0.5～2mg/ml、用量为0.5～1.5μl包被液量/cm膜。本专利技术还提供一种CHI3L1/LN检测卡的制备方法，包括以下步骤：步骤一：根据权利要求3所述的制备方法制备得到活化稀土纳米探针；步骤二：制备稀土纳米探针标记的LN抗体1、CHI3L1抗体1、兔IgG抗体：对步骤一的活化稀土纳米探针按照50～200μg/200μl加入LN抗体1、CHI3L1抗体1、兔IgG抗体，用封闭液封闭后高速离心，用含保存液洗涤并重悬，于4℃避光保存；步骤三：制备包被膜：分别用CHI3L1抗体2、LN抗体2和羊抗兔本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种CHI3L1/LN检测卡，其特征在于，包括：/n底衬；作为所述CHI3L1/LN检测卡的基底；/n包被膜；设置于所述底衬上表面的中部；/n结合垫：搭接设置于所述包被膜的上表面的一端；/n样品垫；搭接设置于所述结合垫的上表面的一端；/n吸水纸；搭接设置于所述包被膜的上表面的另一端；/n其中，所述结合垫喷涂有微球线，所述微球线为稀土纳米探针标记的LN抗体1、CHI3L1抗体1、兔IgG抗体；所述包被膜上依次设置有检测线和质控线，所述检测线靠近所述结合垫；所述检测线包被有LN抗体2、CHI3L1抗体2，质控线包被有羊抗兔IgG抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种CHI3L1/LN检测卡，其特征在于，包括：
底衬；作为所述CHI3L1/LN检测卡的基底；
包被膜；设置于所述底衬上表面的中部；
结合垫：搭接设置于所述包被膜的上表面的一端；
样品垫；搭接设置于所述结合垫的上表面的一端；
吸水纸；搭接设置于所述包被膜的上表面的另一端；
其中，所述结合垫喷涂有微球线，所述微球线为稀土纳米探针标记的LN抗体1、CHI3L1抗体1、兔IgG抗体；所述包被膜上依次设置有检测线和质控线，所述检测线靠近所述结合垫；所述检测线包被有LN抗体2、CHI3L1抗体2，质控线包被有羊抗兔IgG抗体。


2.根据权利要求1所述的CHI3L1/LN检测卡，其特征在于，所述稀土纳米探针为核壳结构氟化铒钠包覆氟化钇钠，其组成为：NaErF4@NaYF4；
其中，NaErF4为全铒掺杂核结构；NaYF4为壳层，@表示NaYF4包覆在NaErF4表面。


3.根据权利要求2所述的CHI3L1/LN检测卡，其特征在于，所述稀土纳米探针在基态下稳定，在808nm的激发光源作用下发射出波长范围在500-550nm，640-680nm和1500-1600nm的三发射荧光。


4.根据权利要求1所述的CHI3L1/LN检测卡，其特征在于，所述稀土纳米探针的制备活化方法，包括以下步骤：
步骤一：合成氟化铒钠核结构：在容器中，加入油酸、1-十八烯、铒的硝酸盐或醋酸盐或氯化物、NaOH和氟化铵甲醇混合溶液，并进行反应；随后用环己烷乙醇混合液洗涤，分散于环己烷中，得到NaErF4纳米探针环己烷溶液；
步骤二：制备核壳结构稀土纳米探针：在容器中，加入油酸、1-十八烯、醋酸钇、NaOH和氟化铵甲醇混合溶液、NaErF4纳米探针环己烷溶液，并进行反应，用环己烷乙醇混合液洗涤3～4次，分散于环己烷中；用酸洗法将探针转移至水相，再在探针表面修饰羧基，得到水溶性NaErF4@NaYF4稀土纳米探针；
步骤三：活化稀土纳米探针：对步骤二的稀土纳米探针进行超声波处理和离心处理，对沉淀物用10～100mM，pH为5.0～7.0的MES溶液洗涤；加入碳二亚胺、N-羟基硫代琥珀酰亚胺，混匀后高速离心，对沉淀物用pH为5.0～7.0的MES溶液洗涤，即得到活化稀土纳米探针。


5.根据权利要求1所述的CHI3L1/LN检测卡，其特征在于，所述结合垫上喷涂的稀土纳米探针标记的LN、CHI3L1、兔IgG抗体的含量为50～200μg抗体/200μl荧光微球。


6.根据权利要求1所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：张云，张肖，宋良，刘宁，
申请(专利权)人：厦门稀土材料研究所，
类型：发明
国别省市：福建;35