一种DNA聚合酶γ及其编码基因、制备方法和应用技术

技术编号:28288034 阅读:46 留言:0更新日期:2021-04-30 16:06
本发明专利技术提出了一种DNA聚合酶γ及其编码基因、制备方法和应用。所述DNA聚合酶γ来源于噬菌体。本发明专利技术DNA聚合酶γ具有DNA聚合酶和外切酶活性,且在钙离子存在下同样具有活性,可以用于延伸DNA,制备DNA,同时钙离子下活性可用于检测钙离子的存在。将DNA聚合酶γ克隆到pET‑sumo表达载体,利用sumo蛋白酶标签序列来提高DNA聚合酶γ的可溶性。通过重组表达载体在大肠杆菌中诱导表达,经固定化镍离子亲和纯化,最后蛋白酶切除sumo标签,制备DNA聚合酶γ。

【技术实现步骤摘要】
一种DNA聚合酶γ及其编码基因、制备方法和应用
本专利技术涉及生物工程
,具体涉及一种DNA聚合酶γ及其编码基因、制备方法和应用。
技术介绍
病毒/噬菌体、细菌、古菌和真核生物等均编码DNA聚合酶,DNA聚合酶作为DNA复制的核心蛋白,是遗传信息复制、加工和分配过程中的关键酶。DNA聚合酶的主要功能是催化DNA合成反应,以DNA单链作为模板,利用dNTP作为原料合成新的互补DNA;另外DNA聚合酶还会对新链进行校对(3’-5’外切酶活性)和修复(5’-3’外切酶活性),以确保复制过程的保真度和准确性。聚合酶的种类繁多,在结构和功能上均有自己的特性,众多DNA聚合酶用于PCR(聚合酶链式反应)技术,在生命科学研究及相关领域发挥重要作用。DNA聚合酶可以进行严格的DNA复制和修复DNA损伤,对于保持基因组的完整性是不可缺少的。在人类细胞中,现已发现15种不同的DNA聚合酶,然而只有4种参与DNA的复制,余下的参与DNA的修复和特定DNA合成。虽然大部分酶参与核DNA的复制和修复,然而至今,DNA聚合酶γ(DNApolymera本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种DNA聚合酶γ,其氨基酸序列如序列表中表1所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种DNA聚合酶γ,其氨基酸序列如序列表中表1所示。


2.一种编码DNA聚合酶γ的基因,其核苷酸序列如序列表中表2所示。


3.含权利要求2所述的基因的重组表达载体。


4.根据权利要求3所述的重组表达载体,其特征在于,还包含sumo蛋白酶标签序列。


5.含权利要求3或4所述的重组表达载体的重组菌。


6.根据权利要求5所述的重组菌,其特征在于,所述重组菌为大肠杆菌。


7.一种如权利要求1所述DNA聚合酶γ的制备方法,其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员:刘喜朋翁妍
申请(专利权)人:上海交通大学
类型:发明
国别省市:上海;31

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