一种RNA聚合酶突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种RNA聚合酶突变体，其为细菌RNA聚合酶β’亚基rpoC发生第457位酪氨酸突变所形成的突变体，其能够促进外源重组蛋白在需钠弧菌中的表达水平，从而增加重组蛋白质生产量，具有商业应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种RNA聚合酶突变体及其应用
本专利技术属于基因工程领域，涉及一种RNA聚合酶突变体及其在促进外源重组蛋白质表达中的用途。
技术介绍
高效的微生物重组蛋白表达系统能够降低重组蛋白的生产成本。需钠弧菌(Vibrionatriegens)是一种革兰氏阴性、对人类非致病的海洋细菌。其倍增周期在7～10分钟之间，传代速度比大肠杆菌快一倍，是已知代时最短的自由生活细菌，或可发展为一个特色表达系统。研究发现，需钠弧菌单个细胞核糖体数量高达115000个，而大肠杆菌只有约70000～90000个，这意味着需钠弧菌具有更快的生物量合成速度和更强的蛋白表达能力。需钠弧菌的高生长和高底物摄取速率在作为宿主表达外源蛋白时，有望在前期快速生长，缩短发酵延滞期，在工业生产中节约能量和时间成本，具有经济意义。pET系统被广泛用来表达外源重组蛋白质，构建时一般将目标蛋白基因置于T7启动子下游，而T7启动子只能由T7RNA聚合酶起始转录。T7RNA聚合酶具备高催化活力，它的转录速度比大肠杆菌内源的RNA聚合酶的转录速度快约8倍。当T7RNA聚合酶被充分诱导时，能够利本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种RNA聚合酶突变体，其为细菌RNA聚合酶β’亚基rpoC发生第457位酪氨酸突变所形成的突变体。/n

【技术特征摘要】
1.一种RNA聚合酶突变体，其为细菌RNA聚合酶β’亚基rpoC发生第457位酪氨酸突变所形成的突变体。


2.如权利要求1所述的RNA聚合酶突变体，其特征在于，所述酪氨酸突变是酪氨酸突变为选自下组的氨基酸：组氨酸、亮氨酸、缬氨酸、丙氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸或者丝氨酸，从而使RNA聚合酶β’亚基rpoC成为RNA聚合酶β’亚基rpoC突变体。


3.如权利要求2所述的RNA聚合酶突变体，其特征在于，RNA聚合酶β’亚基rpoC的氨基酸序列为SEQIDNO:1，相对应地所述RNA聚合酶β’亚基rpoC突变体的氨基酸序列分别为SEQIDNO:1中第457位的Tyr(或Y)分别替换为His(或H)、Leu(或L)、Val(或V)、Ala(或A)、Met(或M)、Cys(或C)或者Ser(或S)后所得到的氨基酸序列。


4.编码如权利要求2或3中所述RNA聚合酶突变体或者所述RNA聚合酶β’亚基rpoC突变体的基因。


5.包含如权利要求3中所述基因的质粒。该质粒用于在细...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐佳琪，蒋宇，陶荣盛，杨立荣，杨晟，
申请(专利权)人：中国科学院上海生命科学研究院湖州工业生物技术中心，
类型：发明
国别省市：浙江;33