Taq DNA聚合酶突变体、PCR反应试剂和试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种Taq DNA聚合酶突变体、PCR反应试剂和试剂盒，涉及基因检测技术领域。本发明专利技术公开的Taq DNA聚合酶突变体氨基酸序列如SEQ ID NO.25所示。采用该Taq DNA聚合酶突变体进行PCR反应可直接以血液样本作为模板进行检测，具有检测时间短、灵敏度高、特异性强以及准确率高等特点。

【技术实现步骤摘要】
TaqDNA聚合酶突变体、PCR反应试剂和试剂盒
本专利技术涉及基因检测
，具体而言，涉及TaqDNA聚合酶突变体、PCR反应试剂和试剂盒。
技术介绍
目前不孕不育症困扰着全球约10％-15％的育龄夫妇，其中男性因素约占50％(BushnikTetal.,HumReprod,2012,27:738-746)。引起男性不育的因素众多，除了内分泌激素紊乱、生殖道炎症、精索静脉曲张、免疫异常和理化等因素外，约30％以上由遗传缺陷导致的精子发育障碍而引起(BhasinSetal.,JClinEndocrinolMetab,1994,79:1525-1529；ChangPLetal.,HumanReprod,1999,14:2689-2694)，而Y染色体微缺失是主要的遗传学因素之一(LuddiAetal.,NEnglJMed,2009,360:881-885)。因此，对Y染色体AZF微缺失进行检测具有重要的临床意义：①可为临床上一些病因不明的男性不育患者找出病因；②可为男性不育患者的临床诊疗提供依据和指导。目前，对Y染色体微缺失检本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种Taq DNA聚合酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.25所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种TaqDNA聚合酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列如SEQIDNO.25所示。


2.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码如权利要求1所述的TaqDNA聚合酶突变体。


3.含有权利要求2所述的分离的核酸分子的载体。


4.含有权利要求3所述的载体的重组细胞。


5.一种制备如权利要求1所述的TaqDNA聚合酶突变体的制备方法，其特征在于，其包括：培养如权利要求4所述的重组细胞，从培养产物中分离纯化得到所述TaqDNA聚合酶突变体。


6.一种用于PCR反应的DNA聚合酶试剂，其特征在于，其含有权利要求1所述的TaqDNA聚合酶突变体或其复合物。


7.根据权利要求6所述的DNA聚合酶试剂，其特征在于，所述复合物包括所述TaqDNA聚合酶突变体和结合至抗所述TaqDNA聚合酶突变体的纳米抗体和/或DNA结合蛋白；
优选地，所述纳米抗体源自羊驼、小羊驼、亚洲的西亚骆驼、非洲的单峰驼、南美洲的大羊驼或原驼；
优选地，所述DNA结合蛋白源自古细菌；
优选地，所述DNA结合蛋白源自硫化叶菌属；
优选地，所述DNA结合蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO.26所示；
优选地，所述DNA聚合酶试剂中，所述TaqDNA聚合酶突变体或其复合物的浓度为1-2U/μl；
优选地，所述DNA聚合酶试剂还含有：18-22mMTris-HCl、80-120mMKCl、1-3mM二硫苏糖醇、以及30％-50％甘油。


8.一种用于PCR反应的试剂组，其特征在于，其包括权利要求6或7所述的DNA聚合酶试剂以及PCR反应液。


9.根据权利要求8所述的试剂组，其特征在于，所述PCR反应液含有如下组分中的至少一者：Tris-HCl、dNTPs和金属离子；
优选地，所述金属离子为K+和/或Mg2+；
优选地，所述PCR反应液含有：5-50mMTris-HCl、30～60mMKCl、2～6mMMgCl2、以及100～600μMdNTPs；
优选地，所述PCR反应液还含有如下组分中的至少一者：BSA、寡肽、Brij-58、Tween-20以及甲酰胺；
优选地，所述寡肽为六肽；
优选地，所述寡肽的氨基酸序列为：S-F-K-R-G-T；

【专利技术属性】
技术研发人员：吴诗扬，许嘉森，刘志明，刘芳，
申请(专利权)人：益善生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44