一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法技术

本发明专利技术涉及干细胞技术领域，尤其涉及一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法。具体步骤包括：S1.MM3培养基的制备；S2.增扩培养；S3.定向诱导分化；S4.诱导分化后细胞鉴定。本发明专利技术通过提供一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法，能够达到高效稳定诱导多种人组织来源间充质干细胞定向成骨分化，提高成骨诱导效率，缩短诱导时间。该方法能够对不同来源(脐带、脂肪、胎盘、羊膜)的人间充质干细胞的诱导分化成骨进行分化和鉴定，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法
本专利技术涉及干细胞
，尤其涉及一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法。
技术介绍
干细胞是一类具有自我复制和多向分化能力的细胞，可以不断地自我更新，并在特定条件下转变成为一种或多种构成人体组织或器官的细胞；干细胞是机体的起源细胞，是形成人体各种组织器官的始祖细胞。间充质干细胞(MSCs)作为一种多能干细胞，具有干细胞的所有共性：自我更新和多向分化能力。间充质干细胞被广泛应用于临床，与造血干细胞联合应用已被证明能够提高移植的成功率，加速造血重建。当患者接受大剂量化疗后，将间充质干细胞与造血干细胞一同输入，可明显加速患者血细胞恢复时间，且未引发不良反应。间充质干细胞应用于临床研究已成为安全有效的治疗技术。间充质干细胞可以分化为骨、软骨、肌肉或肌腱，为临床治疗各种创伤提供细胞来源。现有技术研究发现，间充质干细胞具有明显的增殖快特点，应用于体内植入和体外培育均具有很强的成骨能力，因此成为骨组织工程中重要的种子细胞。中国专利CN102041245A公开了一种间充质干细胞成骨诱导培养基及使用方法，该培养基在α-MEM培养基基础上，添加特定量胎牛血清、Vc溶液、地塞米松等诱导培养后，进行成骨细胞染色鉴定。该方法仅针对于骨髓来源间充质干细胞进行成骨诱导分化，且诱导培育周期为1个月左右，实际应用于临床治疗时具有对来源要求较高、效率较低的应用缺陷。且传统的诱导分化研究习惯于使用胎牛血清来培养细胞，但随着血源的减少、血清价格的上涨以及动物保护组织的压力，胎牛血清等原料将逐渐退出市场，越来越多的实验室尤其是干细胞实验室开始选择用血清替代物来进行细胞培养；血清替代物因其活性高、稳定性强逐渐受到关注，但其在干细胞领域的实际应用还未成熟，具体在体外诱导分化成骨方向的研究报道较少。基于此，探究一种高效率、来源局限性小、实用性强的体外诱导分化成骨方法，为临床应用人间充质干细胞分化诱导成骨创造条件，成为本领域亟待解决的问题。
技术实现思路
本专利技术通过提供一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法，解决了现有人间充质干细胞诱导分化成骨的效率较低、来源局限性大的问题；该方法能够对不同来源(脐带、脂肪、胎盘、羊膜)的人间充质干细胞进行高效诱导分化成骨和鉴定，具有广阔的应用前景。本专利技术第一方面提供了一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法，具体步骤包括：S1.MM3培养基的制备；S2.增扩培养；S3.定向诱导分化；S4.诱导分化后细胞鉴定。在一种优选的实施方式中，所述MM3培养基的原料包括营养成分和间充质干细胞无血清基础培养基。在一种优选的实施方式中，所述营养成分和间充质干细胞无血清基础培养基的体积比为1：(17-23)。在一种优选的实施方式中，所述增扩培养的操作条件为：使用孔板以4-9×104/孔的密度接入人间充质干细胞。在一种优选的实施方式中，所述增扩培养的培养条件为：置于36-38℃，4-6％CO2培养箱中培养。在一种优选的实施方式中，所述定向诱导分化的条件为：置于36-38℃，4-6％CO2培养箱中培养，定期成骨分化培养试剂。在一种优选的实施方式中，所述S2步骤中增扩培养的时间为20-56h。在一种优选的实施方式中，所述S2步骤中增扩培养的时间为24-46h。在一种优选的实施方式中，所述S3步骤中诱导分化培养的时间为15-21天。本专利技术第二方面提供了一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法，该方法应用于骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、羊膜间充质干细胞的诱导分化成骨。有益效果：本专利技术通过提供一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法，能够达到高效稳定诱导多种人组织来源间充质干细胞定向成骨分化，提高成骨诱导效率，缩短诱导时间。该方法能够对不同来源(脐带、脂肪、胎盘、羊膜)的人间充质干细胞的诱导分化成骨进行分化和鉴定，具有广阔的应用前景。具体实施方式参选以下本专利技术的优选实施方法的详述以及包括的实施例可更容易地理解本专利技术的内容。除非另有限定，本文使用的所有技术以及科学术语具有与本专利技术所属领域普通技术人员通常理解的相同的含义。当存在矛盾时，以本说明书中的定义为准。如本文所用术语“由…制备”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。连接词“由…组成”排除任何未指出的要素、步骤或组分。如果用于权利要求中，此短语将使权利要求为封闭式，使其不包含除那些描述的材料以外的材料，但与其相关的常规杂质除外。当短语“由…组成”出现在权利要求主体的子句中而不是紧接在主题之后时，其仅限定在该子句中描述的要素；其它要素并不被排除在作为整体的所述权利要求之外。当量、浓度、或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“1至5”时，所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。单数形式包括复数讨论对象，除非上下文中另外清楚地指明。“任选的”或者“任意一种”是指其后描述的事项或事件可以发生或不发生，而且该描述包括事件发生的情形和事件不发生的情形。说明书和权利要求书中的近似用语用来修饰数量，表示本专利技术并不限定于该具体数量，还包括与该数量接近的可接受的而不会导致相关基本功能的改变的修正的部分。相应的，用“大约”、“约”等修饰一个数值，意为本专利技术不限于该精确数值。在某些例子中，近似用语可能对应于测量数值的仪器的精度。在本申请说明书和权利要求书中，范围限定可以组合和/或互换，如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。此外，本专利技术要素或组分前的不定冠词“一种”和“一个”对要素或组分的数量要求(即出现次数)无限制性。因此“一个”或“一种”应被解读为包括一个或至少一个，并且单数形式的要素或组分也包括复数形式，除非所述数量明显旨指单数形式。“聚合物”意指通过聚合相同或不同类型的单体所制备的聚合化合物。通用术语“聚合物”包含术语“均聚物”、“共聚物”、“三元共聚物”与“共聚体”。“共聚体”意指通过聚合至少两种不同单体制备的聚合物。通用术语“共聚体”包括术语“共聚物”(其一般用以指由两种不同单体制备的聚合物)与术语“三元共聚物”(其一般用以指由三种不同单体制备的聚合物)。其亦包含通过聚合更多种单体而制造的聚合物。“共混物”意指两种或两种以上聚合本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法，其特征在于，具体步骤包括：/nS1.MM3培养基的制备；/nS2.增扩培养；/nS3.定向诱导分化；/nS4.诱导分化后细胞鉴定。/n

【技术特征摘要】
1.一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法，其特征在于，具体步骤包括：
S1.MM3培养基的制备；
S2.增扩培养；
S3.定向诱导分化；
S4.诱导分化后细胞鉴定。


2.根据权利要求1所述的一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法，其特征在于，所述MM3培养基的原料包括营养成分和间充质干细胞无血清基础培养基。


3.根据权利要求2所述的一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法，其特征在于，所述营养成分和间充质干细胞无血清基础培养基的体积比为1：(17-23)。


4.根据权利要求1所述的一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法，其特征在于，所述增扩培养的操作条件为：使用孔板以4-9×104/孔的密度接入人间充质干细胞。


5.根据权利要求1所述的一种高效率的人间充质干细胞诱导分化成骨的方法，其特征在于，所述增扩培养的培养条件为：置于36-38℃，4-6％CO2培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱灏，
申请(专利权)人：朱灏，
类型：发明
国别省市：江苏;32