一种体外诱导人间充质干细胞分化成脂的方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，更具体的涉及一种体外诱导人间充质干细胞分化成脂的方法。本发明专利技术提供了一种体外诱导人间充质干细胞分化成脂的方法，包括以下步骤：(1)将人间充质干细胞使用培养基进行培养；(2)向将步骤(1)培养基中加入诱导分化成脂试剂；(3)加入诱导分化成脂试剂后进行分化成脂；(4)步骤(3)分化后进行成脂判断，用油红O染色剂进行染色鉴定；(5)重复步骤(1)～(4)一次或多次。解决了细胞诱导分化过程中出现的细胞减少的现象。并且，经本申请开发的方法避免了分化后间充质干细胞贴壁能力降低，出现蜷缩的现象。

【技术实现步骤摘要】
一种体外诱导人间充质干细胞分化成脂的方法
本专利技术属于生物
，更具体的涉及一种体外诱导人间充质干细胞分化成脂的方法。
技术介绍
间充质干细胞是一种多能干细胞，它具有干细胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力。在临床应用也最多，与造血干细胞联合应用，可以提高移植的成功率，加速造血重建。间充质干细胞临床应用于解决多种血液系统疾病、心血管疾病、肝硬化、神经系统疾病、膝关节半月板部分切除损伤修复、自身免疫性疾病等方面取得了重大突破，挽救了更多病患的生命。为了进一步提升间充质干细胞分化性能的研究，越来越多的申请人致力于间充质干细胞的研究。中国专利申请号201910037685.X的专利技术专利公开了一种间充质干细胞成脂诱导分化的方法，此方法重点公开了种间充质干细胞成脂诱导分化培养基的组成和制备，该专利技术提供了一种简单高效的间充质干细胞成脂的诱导分化方法。然而，以上间充质干细胞成脂诱导分化的过程中使用的培养基仍然比较复杂，对于此类生物
细胞培养方面，微小条件的改变都将影响细胞的分化生长。在诱导分化的过程中导致细胞出现减少的现象。面对现阶段存在的技术问题，开发一种操作简单、培养基容易获得的体外诱导人间充质干细胞分化成脂的方法成为一项重要的研究。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种体外诱导人间充质干细胞分化成脂的方法，包括以下步骤：(1)将人间充质干细胞使用培养基进行培养；(2)向将步骤(1)培养基中加入诱导分化成脂试剂；(3)加入诱导分化成脂试剂后进行分化成脂；(4)步骤(3)分化后进行成脂判断，用油红O染色剂进行染色鉴定；(5)重复步骤(1)～(4)一次或多次。作为一种优选的技术方案，步骤(1)中培养的时间为1天以上。作为一种优选的技术方案，步骤(1)中培养的时间为1～2天。作为一种优选的技术方案，步骤(2)中所述的诱导分化成脂试剂每隔24～48小时更换一次。作为一种优选的技术方案，步骤(3)中分化成脂时间为7天以上。作为一种优选的技术方案，步骤(3)中分化成脂时间为7～9天。作为一种优选的技术方案，所述的步骤(5)重复步骤(1)～(4)1～4次。作为一种优选的技术方案，步骤(1)所述的培养基选自MM3培养基。作为一种优选的技术方案，所述的MM3培养基包含间充质干细胞基础培养基和/或血清替代物。作为一种优选的技术方案，所述的间充质干细胞基础培养基和血清替代物的体积比为15～25：1。有益效果：经过申请人大量创造性实验探究得到间充质干细胞分化成脂过程中分化成脂的顺利进行，并且经本申请开发的方法可以对不同来源的比如脐带、脂肪、胎盘、羊膜的人间充质干细胞的诱导分化成脂的进行，避免了分化过程中细胞因缺少营养物质而发生凋谢死亡的现象的出现，解决了细胞诱导分化过程中出现的细胞减少的现象。并且，经本申请开发的方法避免了分化后间充质干细胞贴壁能力降低，出现蜷缩的现象。说明书附图图1为本专利技术实施例1间充质干细胞使用MM3培养基培养2天的状态图。具体实施方式结合以下本专利技术的优选实施方法的详述以及包括的实施例可进一步地理解本专利技术的内容。除非另有说明，本文中使用的所有技术及科学术语均具有与本申请所属领域普通技术人员的通常理解相同的含义。如果现有技术中披露的具体术语的定义与本申请中提供的任何定义不一致，则以本申请中提供的术语定义为准。在本文中使用的，除非上下文中明确地另有指示，否则没有限定单复数形式的特征也意在包括复数形式的特征。还应理解的是，如本文所用术语“由…制备”与“包含”同义，“包括”、“包括有”、“具有”、“包含”和/或“包含有”，当在本说明书中使用时表示所陈述的组合物、步骤、方法、制品或装置，但不排除存在或添加一个或多个其它组合物、步骤、方法、制品或装置。此外，当描述本申请的实施方式时，使用“优选的”、“优选地”、“更优选的”等是指，在某些情况下可提供某些有益效果的本专利技术实施方案。然而，在相同的情况下或其他情况下，其他实施方案也可能是优选的。除此之外，对一个或多个优选实施方案的表述并不暗示其他实施方案不可用，也并非旨在将其他实施方案排除在本专利技术的范围之外。为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种体外诱导人间充质干细胞分化成脂的方法，包括以下步骤：(1)将人间充质干细胞使用培养基进行培养；(2)向将步骤(1)培养基中加入诱导分化成脂试剂；(3)加入诱导分化成脂试剂后进行分化成脂；(4)步骤(3)分化后进行成脂判断，用油红O染色剂进行染色鉴定；(5)重复步骤(1)～(4)一次或多次。在一些优选的实施方式中，步骤(1)中培养的时间为1天以上。在一些优选的实施方式中，步骤(1)中培养的时间为1～2天。在一些优选的实施方式中，步骤(2)中所述的诱导分化成脂试剂每隔24～48小时更换一次。在本申请中，所述的诱导分化成脂试剂购于以色列BiologicalIndustries(BioInd)公司；所述的诱导分化成脂试剂包括AdipogenicDifferentiationBasalMedium、AdipogenicSF,XFSupplementMixI、AdipogenicSF,XFSupplementMixⅡ。AdipogenicDifferentiationBasalMedium，型号05-330-1B；AdipogenicSF,XFSupplementMixI，型号05-331-1-01；AdipogenicSF,XFSupplementMixⅡ，型号05-332-1-15。诱导分化成脂试剂的使用方法包括以下步骤：1)室温下，将AdipogenicSF,XFSupplementMixI和AdipogenicSF,XFSupplementMixⅡ解冻，备用2)将0.1mLAdipogenicSF,XFSupplementMixI与1.5mLAdipogenicSF,XFSupplementMixⅡ加入到100mLAdipogenicDifferentiationBasalMedium中，放置于2～8℃环境中，保存，备用。在一些优选的实施方式中，步骤(3)中分化成脂时间为7天以上。在一些优选的实施方式中，步骤(3)中分化成脂时间为7～9天。在一些优选的实施方式中，所述的步骤(5)重复步骤(1)～(4)1～4次。在一些优选的实施方式中，步骤(1)所述的培养基选自MM3培养基。在一些优选的实施方式中，所述的MM3培养基包含间充质干细胞基础培养基和/或血清替代物。在一些优选的实施方式中，所述的MM3培养基包含间充质干细胞基础培养基和血清替代物。间充质干细胞基础培养基，型号05-200-1A，购于以色列BiologicalIndustries(BioInd)公司；血清替代物，型号EPAGMP-500，购本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种体外诱导人间充质干细胞分化成脂的方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)将人间充质干细胞使用培养基进行培养；/n(2)向将步骤(1)培养基中加入诱导分化成脂试剂；/n(3)加入诱导分化成脂试剂后进行分化成脂；/n(4)步骤(3)分化后进行成脂判断，用油红O染色剂进行染色鉴定；/n(5)重复步骤(1)～(4)一次或多次。/n

【技术特征摘要】
1.一种体外诱导人间充质干细胞分化成脂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将人间充质干细胞使用培养基进行培养；
(2)向将步骤(1)培养基中加入诱导分化成脂试剂；
(3)加入诱导分化成脂试剂后进行分化成脂；
(4)步骤(3)分化后进行成脂判断，用油红O染色剂进行染色鉴定；
(5)重复步骤(1)～(4)一次或多次。


2.根据权利要求1所述的体外诱导人间充质干细胞分化成脂的方法，其特征在于，步骤(1)中培养的时间为1天以上。


3.根据权利要求2所述的体外诱导人间充质干细胞分化成脂的方法，其特征在于，步骤(1)中培养的时间为1～2天。


4.根据权利要求1所述的体外诱导人间充质干细胞分化成脂的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的诱导分化成脂试剂每隔24～48小时更换一次。


5.根据权利要求1所述的体外...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱灏，
申请(专利权)人：华夏源细胞工程集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31