乳腺癌的生物标记制造技术

本发明专利技术提供以蛋白质为主的生物标志及生物标志组合，其用于鉴定患者体内的乳腺癌状况。特别是，本发明专利技术生物标志用于将受试者样本分类为乳腺癌或非乳腺癌。该生物标志可由ＳＥＬＤＩ质谱测定法测定。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请案本申请案主张2005年5月26日申请的美国暂时申请案60/685,459的优先权，该案全部内容特别并入本案参考。
一般而言，本专利技术关于临床诊断法。
技术介绍
乳腺癌为在女性中最常被诊断出来的癌症。在其仍可切除且有治愈机会下，症状前筛选以侦测早期乳腺癌可大大地降低乳腺癌相关的死亡率。不幸的是，只有63％的乳腺癌(1992-1999，美国)在诊断时被发现(Jemal，A.et al.(2004)CA Cancer J.Clin.54：8-29)。即使以乳房X光摄影通常会错过或是没看到小病变，特别是在年轻女性及胸部组织密集的女性中(Antman，K.and Shea，S.(1999)JAMA281：1470-1472)。有潜力辨识这些对造影技术而言为不可见的小病变的分子标志将提供在瘤肿(neoplasm)侵袭组织之前真正治疗它的机会。乳腺癌为高度异质。已经研究、用于乳腺癌早期侦测的大部分以分子为主的方法针对特定因子例如：致癌基因、肿瘤抑制基因、生长因子、肿瘤抗原或其他基因产物。固有的问题为这些因子没有一个能够单独算是大多数的乳腺癌且有些对癌症或对胸部组织不具特异性，因此，这些方法的敏感度及特异性都低。目前，没有任一个分子生物标志被推荐用于乳腺癌早期侦测(Smith，R.A.et al.(2004)CA CancerJ.Clin.54：41-52)。人类乳腺由源自乳头且通过周围基质往胸壁的叉状分枝的分离乳管泡(ductal-alveolar)系统组成。大部分的乳腺癌(70-80％)被认为是从内衬于这些结构的末端乳管的上皮细胞形成。乳房上皮脱落细胞成为更新的组织且在乳管的腔室分泌液体。这些液体通过位于乳头的6至9个分离洞口而离开每个乳房，且其可使用两种非侵入性步骤的任-->何一种收集：乳头吸引术(nipple aspiration)及乳管灌洗法(ductallavage)。在乳头吸引术中，简单的手提式吸杯放置于乳头上且用于自乳头开口快速获得浓缩的液滴。这些液滴经毛细管收集。此技术可成功用在大部分的女性(Sartorius，O.W.et al.(1977)J.Natl.CancerInst.59：1073-1080)且产量典型为数微升至100微升(K1ein，P.etal.(2001)Breast J.7：378-387；Hsiung，R.et al.(2002)Cancer J.8：303-310)。由于乳头吸引的液体(NAF)只来自乳头的紧接的邻近区域且产量不可预测时，于是设计出乳管灌洗法系统。此方法涉及乳头抽吸以局部化NAF的生产腺体。之后使用微导管插管NAF的生产腺体且以生理食盐水灌洗。因其冲洗乳管全长，乳管灌洗液体(DLF)可提供较佳的细胞及肿瘤释放出的蛋白质的来源。与血清相比，乳房液体可能提供较佳的乳腺癌生物标志来源，因其呈现的蛋白质是特异性地来自乳房组织。因此，以可识别大部分乳腺癌病例的多样蛋白质组筛选一大群患者的乳房液体是有利的。
技术实现思路
本专利技术是基于，至少部分基于乳头吸引液体(NAF)及乳管灌洗液体(DLF)中乳腺癌生物标志的发现。因此，本专利技术提供一种鉴定受试者乳腺癌状况的方法，包括：(a)测量来自受试者的生物样本的至少一种生物标志，其中，至少一种生物标志选自由表1生物标志所组成的群组；及(b)关联测量与乳腺癌状况。在一种具体实施例中，至少一种生物标志是通过在SELDI探针吸附表面捕捉生物标志且以激光解析电离质谱质谱测定法(laserdesorption-ionization mass spectrometry)侦测被捕捉的生物标志而测量。在另一种具体实施例中，至少一种生物标志以免疫检定法(immunoassay)测量。在一种具体实施例中，该吸附剂为IMAC-Cu2+吸附剂。在另一种具体实施例中，该吸附剂为生物特异性吸附剂(例如，生物特异性吸附剂包括抗防御素-1(defensin-1)、α-防御素-2、α-防御素-3α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段1或α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段2的抗体)。-->在一种具体实施例中，该关联是由软件分类演算法而实现。在另一种具体实施例中，乳腺癌状况选自乳腺癌及非乳腺癌。在另一种具体实施例中，乳腺癌状况选自第I期或第II期原发性原位乳腺癌及非乳腺癌。在另一种具体实施例中，若该测量关联于该乳腺癌，该方法进一步包括投予受试者至少一种治疗，该治疗选自下列群组：手术、放射治疗及化学疗法。在一种具体实施例中，至少一种生物标志为α-防御素(例如，α-防御素为α-防御素-1、α-防御素-2或α-防御素-3)。在另一种具体实施例中，该生物标志为α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段(例如：α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段1或α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段2)。在一种具体实施例中，测量至少两种生物标志。在另一种具体实施例中，测量至少三种生物标志。在另一种具体实施例中，该方法进一步包括测量至少一种能够区别乳腺癌及非癌症的生物标志，且其中，该生物标志不是α-防御素-1、α-防御素-2、α-防御素-3、BF-4、α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段1或α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段2。在另一种具体实施例中，本专利技术提供一种决定乳腺癌进程的方法，包括：(a)第一次测量来自受试者的生物样本的至少一种选自下列群组的生物标志：α-防御素-1、α-防御素-2、α-防御素-3、BF-4、α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段1及α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段2；(b)第二次测量来自该受试者的生物样本的该至少一种生物标志；及比较第一次测量及第二次测量；其中，该比较测量决定乳腺癌的进程。在另一种具体实施例中，该方法进一步包括：(d)在处理受试者后测量至少一种生物标志，及关联该测量与疾病进展。在另一种具体实施例中，该方法包括测量来自受试者的样本的至少一种选自下列群组的生物标志：α-防御素-1、α-防御素-2、α-防御素-3、BF-4、α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段1及α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段2。在另一种具体实施例中，本专利技术提供一种包括纯化的生物标志的组合物，其中，该生物标志选自下列群组：α-防御素-1、α-防御素-->-2、α-防御素-3、BF-4、α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段1及α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段2。在另一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴定受试者乳腺癌状况的方法，包括：　　　　（ａ）测量来自受试者的生物样本中的至少一种生物标志，其中，该至少一种生物标志选自表１生物标志所组成群组；以及　　　　（ｂ）关联测量与乳腺癌状况。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2005-5-26 60/685,4591.一种鉴定受试者乳腺癌状况的方法，包括：
(a)测量来自受试者的生物样本中的至少一种生物标志，其中，该
至少一种生物标志选自表1生物标志所组成群组；以及
(b)关联测量与乳腺癌状况。
2.如权利要求1所述的方法，其中，该至少一种生物标志是通过
在SELDI探针吸附剂表面捕捉生物标志以及以激光解析电离质谱测定
法侦测所捕捉的生物标志而测量。
3.如权利要求1所述的方法，其中，该至少一种生物标志是由免
疫检定法测量。
4.如权利要求1所述的方法，其中，该样本为乳头吸引液体(NAF)。
5.如权利要求1所述的方法，其中，该样本为乳管灌洗液体(DLF)。
6.如权利要求1所述的方法，其中，该关联是由软体分类演算法
实施。
7.如权利要求1所述的方法，其中，乳腺癌状况选自乳腺癌及非
乳腺癌。
8.如权利要求7所述的方法，其中，若该测量与乳腺癌相关，该
方法进一步包括投予至少一种治疗至受试者，该治疗选自下列群组：
手术、放射治疗及化学疗法。
9.如权利要求1所述的方法其中，该乳腺癌状况选自第I期或
第II期原发性原位乳腺癌及非乳腺癌。
10.如权利要求1所述的方法，其中，该至少一种生物标志为α-
防御素。
11.如权利要求10所述的方法，其中，该α-防御素为α-防御
素-1、α-防御素-2或α-防御素-3。
12.如权利要求1所述的方法，其中，测量至少2种生物标志。
13.如权利要求12所述的方法，其中，该至少2种生物标志选自
下列所组成的群组：α-防御素-1、α-防御素-2、α-防御素-3、α-1-
抗胰蛋白酶抑制物的C端片段1及α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段
2。
14.如权利要求1所述的方法，其中，测量至少三种生物标志。
15.如权利要求14所述的方法，其中，该至少三种生物标志为α-
防御素-1、α-防御素-2及α-防御素-3。
16.如权利要求1所述的方法，进一步包括测量至少一种生物标
志，其中，该生物标志能够区别乳腺癌及非癌症，且其中，该生物标
志不是α-防御素-1、α-防御素-2、α-防御素-3、BF-4、α-1-抗胰
蛋白酶抑制物的C端片段1或α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段2。
17.如权利要求2所述的方法，其中，该吸附剂为IMAC-Cu2+吸附
剂。
18.如权利要求2所述的方法，其中，该吸附剂为生物特异性吸
附剂。
19.如权利要求18所述的方法，其中，该生物特异性吸附剂包括
抗防御素-1、α-防御素-2及α-防御素-3的抗体。
20.一种决定乳腺癌进程的方法，包括：
(a)第一次测量来自受试者的生物样本的至少一种选自下列群组
的生物标志：α-防御素-1、α-防御素-2、α-防御素-3、BF-4、α-1-
抗胰蛋白酶抑制物的C端片段1及α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段
2；
(b)第二次测量受试者生物样本的该至少一种生物标志；以及
(c)比较第一次测量及第二次测量，其中，由该比较测量决定乳腺
癌的进程。
21.如权利要求20所述的方法，进一步包括：(d)在处理受试者
后，测量至少一种生物标志，并关联该测量与疾病进展。
22.一种包括测量来自受试者的样本的至少一种生物标志的方法，
该生物标志选自下列群组：α-防御素-1、α-防御素-2、α-防御素-3、
BF-4、α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段1及α-1-抗胰蛋白酶抑制
物的C端片段2。
23.一种包括纯化的生物标志的组合物，其中，该生物标志选自
于下列群组：α-防御素-1、α-防御素-2、α-防御素-3、BF-4、α-1-
抗胰蛋白酶抑制物的C端片段1及α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片
段2。
24.一种包括生物特异性捕捉剂的组合物，该捕捉剂特异结合到
选自下列群组的生物标志：α-防御素-1、α-防御素-2、α-防御素-3、
BF-4、α-1-抗胰蛋白酶抑制物的C端片段1及α-1-抗胰蛋白酶抑制
物的C端片段2。
25.一种包括结合到生物标志的生物特异性捕...

【专利技术属性】
技术研发人员：J李，S苏库马尔，DW尚，
申请(专利权)人：约翰霍普金斯大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]