本发明专利技术公开了一种筛选高免疫球蛋白ＩｇＧ合成能力泌乳奶牛的方法，其具体步骤如下：（１）采集奶牛乳样；（２）测定采集乳样的体细胞数ＳＣＣ和乳脂率、乳蛋白、乳糖、总固形物；（３）利用体细胞数ＳＣＣ计算得出体细胞评分ＳＣＳ；（４）计算ＩｇＧ指数；（５）筛选奶牛：选择ＩｇＧ指数大于－４．３的奶牛。经过实验表明，本发明专利技术可以准确的在奶牛群中筛选出牛奶中ＩｇＧ含量高的奶牛，管理人员可明确得知ＩｇＧ产量高奶牛并对其进行集中饲喂，与未经筛选的奶牛群比较可以大幅提高所得奶产品中ＩｇＧ含量１９．５％以上，且饲喂成本大幅降低。应用本发明专利技术方法可以显著的提高牛奶中的ＩｇＧ的含量，为富含高免疫球蛋白的牛奶的生产提供可能。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种筛选奶牛的方法，具体地说是一种筛选高免疫球蛋白IgG合成能力泌乳奶牛的方法。
技术介绍
免疫球蛋白是初乳和常乳里最重要的免疫活性蛋白。牛奶中的免疫球蛋白主要有IgG、IgM、IgA。免疫初乳或免疫乳含有特异性抗体具有预防和治疗肠道疾病的功能，能预防人类的一些传染病，如弗氏志贺氏菌(Shigella flexneri)、大肠杆菌(Escherichia coli)、顽固梭菌(Clostridium difficile)、小似隐孢菌(Cryptosporidiumparvum)、变异链球菌(Streptococcus mutans)和幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori)。牛奶中的特异性Ig能够有效的抑制细菌的繁殖，抑制细菌定植，抑制对底物的结合，抑制细菌分泌毒素，阻止毒素与人体细胞受体的结合，中和毒素，降低细菌活性，能有效的抗病毒。泌乳期牛乳中IgG的含量为0.03～1.2mg/mL，平均为0.33mg/mL。提高牛奶中IgG的含量是目前研究的热点和难点之一。目前常用的提高牛奶中免疫活性蛋白的含量的方法有，利用免疫乳生产提高免疫球蛋白含量、利用乳品深加工技术增加牛奶中生物活性肽、利用乳腺反应器等基因工程技术生产乳铁蛋白等免疫活性蛋白，这三项技术属于完全不同的研究领域，各有特色。但免疫乳生产成本过高和加工工艺的特殊要求成为了免疫乳进一步发展的制约因素；许多生物活性肽的构效关系和分子作用机制仍不清楚。生物活性肽的浓度低、酶解条件复杂、分离提纯难度大成为制约乳品深加工技术工业化生产的主要因素；转基因动物制备的效率低，转基因个体的后代存在不能表达或表达混乱及不能遗传给后代等问题，限制了免疫活性蛋白产业化生产。因此，现阶段急需一种成本低，效果好的可以提高牛奶中免疫球蛋白IgG含量的方法。
技术实现思路
-->本专利技术的主要目的是为了提高奶牛乳中IgG含量而提出一种筛选高免疫球蛋白IgG合成能力泌乳奶牛的方法，用本专利技术方法对奶牛群体进行筛选可以选出具有高免疫球蛋白IgG合成能力的奶牛进行生产，从而提高乳中的IgG含量，为富含免疫球蛋白IgG的牛乳的生产提供了可能。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种筛选高免疫球蛋白IgG合成能力泌乳奶牛的方法，其具体步骤如下：(1)采集奶牛乳样，记录采集时间点个体奶牛的产奶量、泌乳天数和胎次；(2)测定采集乳样的体细胞数和乳脂率、乳蛋白、乳糖、总固形物；(3)利用体细胞数计算得出体细胞评分SCS：计算公式为SCS＝log2[SCC/100,000]+3；(4)计算IgG指数，公式为：IgG指数＝0.4475×x1-0.0061×x2-0.0274×x3-1.140×x4-1.261×x5-2.172×x6+1.1776×x7+0.1044×x8其中x1：胎次；x2：泌乳天数；x3：产奶量；x4：乳脂；x5：乳蛋白；x6：乳糖；x7：总固形物；x8：体细胞评分SCS。(5)筛选奶牛：选择IgG指数大于-4.3的奶牛。以上所述的为一种筛选高免疫球蛋白IgG合成能力泌乳奶牛的方法。其中，所述步骤(1)中的奶牛首先以隐性乳房炎诊断液进行乳房炎检测以剔除隐性乳房炎奶牛，健康奶牛采用TMR饲喂，饲料精粗比为45∶55，日喂三次，自由采食，分早中晚三次采集牛奶乳样，按早中晚4∶3∶3混合，4℃保存备用。本专利技术思路及IgG指数公式来源：通过前期采集样本，中期8项数据的测定，后期利用SAS 9.0系统的CANCORR程序对8项数据与牛奶中IgG含量进行典型相关分析，将8项数据(胎次、泌乳天数、产奶量、乳脂、乳蛋白、乳糖、总固形物、体细胞评分SCS)中重叠进行剔除，对自变量进行选择，建立最优回归方-->程，即为计算牛奶IgG含量的多元回归方程，将此方程命名为IgG指数公式(Immunoglobulin G Index)，可以筛选牛奶中IgG含量高的奶牛个体。上述IgG指数公式为IgG指数＝0.4475×x1-0.0061×x2-0.0274×x3-1.140×x4-1.261×x5-2.172×x6+1.1776×x7+0.1044×x8其中x1：胎次；x2：泌乳天数；x3：产奶量；x4：乳脂；x5：乳蛋白；x6：乳糖；x7：总固形物；x8：体细胞评分SCS。公式的验证：1、奶牛乳样采集：选择健康泌乳奶牛，以隐性乳房炎诊断液进行乳房炎检测剔除隐性乳房炎病牛。试验牛均采用一般试验管理方式，奶牛饲料配方根据产奶量进行调整，TMR饲喂，精粗比为45∶55，奶牛自由采食，日喂三次，挤奶三次，采用Delaval鱼骨式挤奶台进行机械挤奶，挤奶时“二次药浴，一次纸巾擦干”。记录每头牛的产奶量并采集乳样，采乳样时采集三次，按早中晚比例4∶3∶3混合，共取样100mL，4℃保存；50mL用于检测牛奶体细胞总数和乳脂、乳蛋白等常规成分；50mL奶样用于分离乳清测定IgG的含量。2、检测指标及方法(1)数据测定根据牛场记录统计试验奶牛的胎次、泌乳天数，记录采样时间点奶牛的个体产奶量；牛奶乳成分测定于农业部奶及奶制品质量监督检验测试中心(北京)进行。取50mL乳样以乳成分分析仪测定体细胞数(SCC)和乳脂率(Fat)、乳蛋白(Pro)、乳糖(Lac)、总固形物(TS)5项常规成分。体细胞评分由体细胞数计算得来(SCS＝log2[SCC/100,000]+3)。(2)夹心ELISA方法测定牛奶中Ig的含量以ELISA定量试剂盒(Bethyl，Montgomery，TX，USA)来检测牛奶中IgG含量。以兔抗牛IgG包被酶标板用以捕获待检样品中的IgG，然后再用辣根过氧-->化物酶(HRP)标记的兔抗牛IgG作为二抗结合牛IgG。采用TMB(四甲基联苯胺)为显色底物，颜色的深浅与样品中的IgG含量呈正比，以OD值为纵坐标，标准IgG含量为横坐标绘制标准曲线，建立回归方程检测牛奶中IgG含量。牛奶样品进行1∶1000倍稀释，每个样品进行三个重复样检测。(3)数据统计按IgG指数进行分组的奶牛，统计其牛奶中IgG含量的变化，利用SAS 9.0程序中的方差分析来进行统计分析，差异显著性水平分别为显著(p＜0.05)和极显著(p＜0.01)。3、结果经数据对比显示可见，IgG指数与牛奶中IgG含量呈现明显的正相关，随着IgG指数的增加，牛奶中IgG的含量也随之增加。利用IgG指数＞-4.3来筛选高免疫球蛋白IgG合成能力泌乳奶牛的依据：IgG指数与牛奶中IgG含量的关系见图1。根据上述方法，实验证实随着IgG指数的升高，牛奶中IgG含量亦升高。如图1所示，当IgG指数＞-4.3时，筛选出的奶牛头数为总头数的50％。经过进一步验证，全群奶牛牛奶中IgG含量平均为0.318mg/mL，IgG指数＞-4.3筛选出的奶牛牛奶中IgG含量平均为0.380mg/mL，而未筛选的奶牛IgG含量平均为0.256mg/mL。当筛选指数更高时，牛奶中IgG可以提高更高的比例，但筛选的奶牛头数少，不利于重新组群进行生产，且总体产奶量会减少。因此，利用IgG指数＞-4.3进行筛选，即可以筛选出足够数量的高免疫球蛋白IgG合成能力泌乳奶牛，又可以提高牛奶中IgG的含量19.5％以上，筛选效果显著。筛选本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种筛选高免疫球蛋白ＩｇＧ合成能力泌乳奶牛的方法，其特征在于，其具体步骤如下： （１）采集奶牛乳样，记录采集时间点个体奶牛的产奶量、泌乳天数和胎次； （２）测定采集乳样的体细胞数ＳＣＣ和乳脂率、乳蛋白、乳糖、总固形物； （３）利用体细胞数ＳＣＣ计算得出体细胞评分ＳＣＳ： 公式为ＳＣＳ＝ｌｏｇ↓［２］［ＳＣＣ／１００，０００］＋３； （４）计算ＩｇＧ指数，公式为： ＩｇＧ指数＝０．４４７５×ｘ１－０．００６１×ｘ２－０．０２７４×ｘ３－１．１４０×ｘ４－１．２６１×ｘ５－２．１７２×ｘ６＋１．１７７６×ｘ７＋０．１０４４×ｘ８； 所述ｘ１：胎次；ｘ２：泌乳天数；ｘ３：产奶量；ｘ４：乳脂；ｘ５：乳蛋白；ｘ６：乳糖；ｘ７：总固形物；ｘ８：体细胞评分ＳＣＳ； （５）筛选奶牛： 选择ＩｇＧ指数大于－４．３的奶牛。
【技术特征摘要】
1、一种筛选高免疫球蛋白IgG合成能力泌乳奶牛的方法，其特征在于，其具体步骤如下：(1)采集奶牛乳样，记录采集时间点个体奶牛的产奶量、泌乳天数和胎次；(2)测定采集乳样的体细胞数SCC和乳脂率、乳蛋白、乳糖、总固形物；(3)利用体细胞数SCC计算得出体细胞评分SCS：公式为SCS＝log2[SCC/100,000]+3；(4)计算IgG指数，公式为：IgG指数＝0.4475×x1-0.0061×x2-0.0274×x3-1.140×x4-1.261×x5-2.172×x6+1.1776×x7...
【专利技术属性】
技术研发人员：王加启，卜登攀，刘光磊，魏宏阳，周凌云，张春刚，刘蕾，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]
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