本发明专利技术公开一种KIR2DS3基因分型试剂盒和分型方法，其中，本发明专利技术KIR2DS3基因分型试剂盒包括扩增引物一、扩增引物二、扩增引物三、扩增引物四、扩增引物五、扩增引物六、测序引物一、测序引物二、测序引物三、测序引物四、测序引物五、测序引物六、测序引物七、测序引物八、测序引物九、测序引物十、测序引物十一、测序引物十二、测序引物十三以及测序引物十四。本发明专利技术通过多种扩增引物对KIR2DS3基因进行PCR扩增，多种测序引物对扩增的PCR产物进行测序扩增，进而对测序扩增产物进行测序，发现其他方法不易鉴定的新等位基因型，实现对KIR2DS3基因的高分辨分型。分辨分型。分辨分型。
【技术实现步骤摘要】
KIR2DS3基因分型试剂盒和分型方法
[0001]本专利技术涉及生物
，特别涉及一种KIR2DS3基因分型试剂盒和分型方法。
技术介绍
[0002]自然杀伤细胞(Natural Killer cell，NK细胞)在人体内通过细胞因子和细胞毒作用，抵御感染和杀灭恶变细胞，在先天免疫和获得性免疫中发挥着重要作用。杀伤细胞免疫球蛋白样受体(Killer cell Immunoglobulin
‑
like Receptor，KIR)是主要表达于NK细胞和部分T细胞表面的一组免疫球蛋白样超家族成员，能够特异性地识别人类主要组织相容性复合物MHC
‑
I类分子(Human Leukocyte Antigen I，HLA
‑
I)，介导调节NK细胞和部分效应T细胞的杀伤功能。越来越多的临床移植和动物实验证据提示，供、受者的KIR不相容引发的NK细胞异源反应，有利于异基因造血干细胞移植和器官移植的预后。异源反应性NK细胞可以特异性杀伤宿主抗原呈递细胞和白血病细胞，从而降低移植物抗宿主病(Graft
‑
Versus
‑
Host Disease，GVHD)发生的风险，减轻排斥反应，起到移植物抗白血病效果。此外，KIR还与众多疾病具有相关性，包括自身免疫病、病毒感染疾病、肿瘤、妊娠相关疾病等。
[0003]KIR基因位于染色体19q13.4，具有高度多态性，目前已检测出14个KIR功能基因和2个假基因。截止2019年12月，已发现1110个等位基因。杀伤细胞免疫球蛋白样受体KIR2DS3基因是KIR基因家族中的一员，共有9个外显子，其中，第3外显子为假外显子。
[0004]随着移植免疫研究的深入，HLA半相合移植的方案得到推广，如何在众多的供者中抉择出最优的供者成为临床专家面临的难题。在此形势下，KIR基因分型得到越来越多临床专家的重视，检测技术的不断发展也使得高分辨分型成为趋势。KIR分型方法包括序列特异性引物PCR(PCR
‑
SSP)、逆转录PCR(RT
‑
PCR)和PCR
‑
序列特异性寡聚核苷酸探针(PCR
‑
SSO)等方法。但是，上述多种检测方法无法实现对KIR2DS3基因的高分辨分型。
[0005]上述内容仅用于辅助理解专利技术的技术方案，并不代表承认上述内容是现有技术。
技术实现思路
[0006]本专利技术的主要目的是提出一种KIR2DS3基因分型试剂盒，旨在实现对KIR2DS3基因的高分辨分型。
[0007]为实现上述目的，第一方面，本专利技术提出一种KIR2DS3基因分型试剂盒，包括：
[0008]扩增引物一，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；
[0009]扩增引物二，核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；
[0010]扩增引物三，核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；
[0011]扩增引物四，核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；
[0012]扩增引物五，核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；
[0013]扩增引物六，核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；
[0014]测序引物一，核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；
[0015]测序引物二，核苷酸序列如SEQ ID No.8所示；
[0016]测序引物三，核苷酸序列如SEQ ID No.9所示；
[0017]测序引物四，核苷酸序列如SEQ ID No.10所示；
[0018]测序引物五，核苷酸序列如SEQ ID No.11所示；
[0019]测序引物六，核苷酸序列如SEQ ID No.12所示；
[0020]测序引物七，核苷酸序列如SEQ ID No.13所示；
[0021]测序引物八，核苷酸序列如SEQ ID No.14所示；
[0022]测序引物九，核苷酸序列如SEQ ID No.15所示；
[0023]测序引物十，核苷酸序列如SEQ ID No.16所示；
[0024]测序引物十一，核苷酸序列如SEQ ID No.17所示；
[0025]测序引物十二，核苷酸序列如SEQ ID No.18所示；
[0026]测序引物十三，核苷酸序列如SEQ ID No.19所示；以及
[0027]测序引物十四，核苷酸序列如SEQ ID No.20所示。
[0028]第二方面，本专利技术提出一种KIR2DS3基因分型方法，包括以下步骤：
[0029](1)获得待测样品的基因组DNA；
[0030](2)利用扩增引物一、扩增引物二、扩增引物三、扩增引物四、扩增引物五和扩增引物六，分别以所述基因组DNA为模板，进行PCR扩增，获得相应的扩增产物；
[0031](3)利用测序引物一、测序引物二、测序引物三、测序引物四、测序引物五、测序引物六、测序引物七、测序引物八、测序引物九、测序引物十、测序引物十一、测序引物十二、测序引物十三以及测序引物十四，分别对相应的所述扩增产物进行扩增，获得相应的测序扩增产物；
[0032](4)对所述测序扩增产物测序，分析核苷酸序列中的SNP位点信息，将所述SNP位点信息与公共数据库比对，获得KIR2DS3的基因分型；
[0033]其中，所述扩增引物一的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述扩增引物二的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示，所述扩增引物三的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示，所述扩增引物四的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示，所述扩增引物五的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，所述扩增引物六的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，所述测序引物一的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示，所述测序引物二的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示，所述测序引物三的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示，所述测序引物四的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示，所述测序引物五的核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，所述测序引物六的核苷酸序列如SEQ ID No.12所示，所述测序引物七的核苷酸序列如SEQ ID No.13所示，所述测序引物八的核苷酸序列如SEQ ID No.14所示，所述测序引物九的核苷酸序列如SEQ ID No.15所示，所述测序引物十的核苷酸序列如SEQ ID No.16所示，所述测序引物十一的核苷酸序列如SEQ ID No.17所示，所述测序引物十二的核苷酸序列如SEQ ID No.18所示，所述测序引物十三的核苷酸序列如SEQ ID No.19所示，所述测序引物十四的核苷酸序列如SEQ ID No.20所示。
[0034]本专利技术KIR2DS3基因分型试剂盒包括扩增引物一、扩增引物二、扩增引物三、扩增引物四、扩增引物五、扩增引物六、测序引物一、测序引物二、测序引物三、测序引物四、测序引物五、测序引物六、测序引物七、测本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种KIR2DS3基因分型试剂盒，其特征在于，包括：扩增引物一，核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；扩增引物二，核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；扩增引物三，核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；扩增引物四，核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；扩增引物五，核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；扩增引物六，核苷酸序列如SEQ ID No.6所示；测序引物一，核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；测序引物二，核苷酸序列如SEQ ID No.8所示；测序引物三，核苷酸序列如SEQ ID No.9所示；测序引物四，核苷酸序列如SEQ ID No.10所示；测序引物五，核苷酸序列如SEQ ID No.11所示；测序引物六，核苷酸序列如SEQ ID No.12所示；测序引物七，核苷酸序列如SEQ ID No.13所示；测序引物八，核苷酸序列如SEQ ID No.14所示；测序引物九，核苷酸序列如SEQ ID No.15所示；测序引物十，核苷酸序列如SEQ ID No.16所示；测序引物十一，核苷酸序列如SEQ ID No.17所示；测序引物十二，核苷酸序列如SEQ ID No.18所示；测序引物十三，核苷酸序列如SEQ ID No.19所示；以及测序引物十四，核苷酸序列如SEQ ID No.20所示。2.一种KIR2DS3基因分型方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)获得待测样品的基因组DNA；(2)利用扩增引物一、扩增引物二、扩增引物三、扩增引物四、扩增引物五和扩增引物六，分别以所述基因组DNA为模板，进行PCR扩增，获得相应的扩增产物；(3)利用测序引物一、测序引物二、测序引物三、测序引物四、测序引物五、测序引物六、测序引物七、...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑仲征，杜可明，廖宽镇，贺青青，李岱阳，
申请(专利权)人：上海荻硕贝肯医学检验所有限公司上海荻硕贝肯生物科技有限公司上海荻硕贝肯基因科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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