一种检测高血压用药基因多态性的核酸组合物及试剂盒制造技术

本申请公开了一种检测高血压用药基因多态性的核酸组合物及试剂盒，属于基因检测技术领域。所述核酸组合物包括用于检测ADRB1基因1165G＞C位点、CYP2D6*10基因100C>T位点、CYP2C9*3基因1075A＞C位点、CYP3A5*3基因6986A＞G位点、AGTR1基因1166A＞C位点、NPPA基因2238T＞C位点、ACE(I/D)基因、MTHFR基因677C＞T位点、ApoE基因388T>C位点和ApoE基因526C>T位点的上、下游引物和探针。包含上述引物和探针的试剂盒可以同时对上述10个突变位点进行实时荧光检测，特异性好，灵敏度高，且检测周期短，检测效率较高，检测成本较低。检测成本较低。检测成本较低。

【技术实现步骤摘要】
一种检测高血压用药基因多态性的核酸组合物及试剂盒


[0001]本申请涉及基因检测
，特别涉及一种检测高血压用药基因多态性的核酸组合物及试剂盒。

技术介绍

[0002]原发性高血压病是最常见的慢性疾病之一，2016年国家卫生计生委发布的数据显示：我国18岁及以上成人高血压患病率为25.2％。尽管近些年我国人群的高血压知晓率、治疗率、控制率已有改善，但仍处于较低水平。由其导致的心血管病急性事件的发生率、致残率和病死率也因此始终居高不下，高血压及其相关不良事件已成为危害我国人民健康的重大公共卫生问题。临床用药结果表明，高血压用药的疗效和不良反应存在较大的个体差异，尽管新的药物层出不穷，但我国高血压患者血压的控制率却得不到显著的改善。遗传药理学和药物基因组学的研究进展表明，除了性别、年龄、种族等原因外，药物代谢酶、转运体和靶点的遗传变异是造成个体药物反应差异的主要原因。
[0003]具体来说，β肾上腺素受体阻滞剂、钙拮抗剂(CCB)、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、血管紧张素II受体拮抗剂(ARB)和利尿剂类药物是目前临床上常用的五大类高血压药物。然而，临床治疗高血压药物的个体反应差异十分普遍，主要原因是在不同个体间药物代谢酶的活性差异会引起不同甚至相反的药效差异。大多数情况为基因多态性导致代谢酶活性的变化，从而引起药物清除率的改变，根据其药物代谢速度可以分为“快速代谢者”与“慢速代谢者”。前者由于清除率高，血药浓度低，可能会形成相应药物治疗的“抵抗性”。后者可能由于代谢速率慢，清除率较低，导致过高的血药浓度而出现中毒或者低血压。但是，药物代谢并不是决定药物疗效的唯一因素，临床上经常会遇到这种现象，二个诊断相同的患者，给予同一种药物治疗，血药浓度相近，但疗效相差甚远。这可能是药物与靶点相互作用的药效动力学过程中的问题。靶点相关基因的多态性可能导致G蛋白偶联的变化，从而影响药物作用靶受体，对药物的敏感程度改变，降压效果也随之改变。因此，根据个体特征与药物治疗相关的代谢酶、转运体和靶点制定治疗方案，实现个体化用药，使药物的疗效达到最大，不良反应降到最小，具有十分重要的社会意义和经济意义，而找到并判断药物代谢酶及靶点受体的基因类型，是实现个体化用药的关键。
[0004]目前临床上常用的五大类药物对应的主要基因多态性及对功能影响总结如下：β肾上腺素受体阻滞剂对应的主要基因是CYP2D6*10和ADRB1，CYP2D6*10突变会使代谢酶功能显著降低，ADRB1(1165G＞C)突变会使受体敏感性增强；血管紧张素II受体拮抗剂(ARB)对应的主要基因是CYP2C9*3和AGTR1，其中CYP2C9*3突变会使代谢酶功能显著降低，AGTR1(1166A＞C)突变会使受体敏感性下降；血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)相关的主要基因是ACE(I/D)插入(I)和缺失(D)，ACE基因的插入和缺失会使作用靶点的敏感性改变；钙拮抗剂对应的主要基因是CYP3A5*3，其中CYP3A5*3突变会使代谢酶功能显著下降；利尿剂类药物对应的主要基因是NPPA(2238T＞C)，该基因突变会使受体敏感性增强。
[0005]另外，有研究发现在降压的基础上联合他汀类药物治疗更易控制血压，提示他汀
类药物可能具有独立于降脂外的降压作用。他汀类药物对应的主要基因是ApoE(388T>C、526C>T)，ApoE的主要生理功能是通过与LDL受体结合并参与LDL代谢过程，ApoE基因的突变可影响LDL受体结合活性。H型高血压是伴有高同型半胱氨酸血症
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简称高血同(homocysteine,Hcy≥10umol/L)的原发性高血压。高同型半胱氨酸血症是以血Hcy水平增高为特点，叶酸能够很好降低血同型半胱氨酸水平，叶酸代谢途径中相关酶的基因突变，主要是5,10亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR 677C＞T)，将会导致酶的活性降低，Hcy降解受阻，浓度升高。所以，检测上述两个基因的多态性也具有重要意义。
[0006]目前针对基因多态性检测的技术有很多，最常用的有聚合酶链式反应
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限制性片段长度多态性分析(PCR
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RFLP法)、序列特异性PCR、一代测序、二代测序和基因芯片法等技术，但是这些技术有各自的应用缺陷，例如操作繁琐，检测周期长，无法进行高通量多位点同时检测，灵敏度低，特异性差等，使得目前在临床上对于多态性检测技术应用仍不理想，并且在检测少量样本时试剂成本明显上升，一直无法满足临床检测需求。

技术实现思路

[0007]针对现有的检测方法多突变位点无法同时检测，且检测周期长、灵敏度低等问题，本申请提供一种检测高血压用药基因多态性的核酸组合物及试剂盒。
[0008]第一方面，申请提供了一种检测高血压用药基因多态性的核酸组合物，是通过以下技术方案得以实现的。
[0009]一种检测高血压用药基因多态性的核酸组合物，包括用于检测ADRB1基因1165G＞C位点、CYP2D6*10基因100C>T位点、CYP2C9*3基因1075A＞C位点、CYP3A5*3基因6986A＞G位点、AGTR1基因1166A＞C位点、NPPA基因2238T＞C位点、ACE(I/D)基因、MTHFR基因677C＞T位点、ApoE基因388T>C位点和ApoE基因526C>T位点的上游引物和下游引物；
[0010]ADRB1基因1165G＞C位点的上游引物如SEQ ID NO:1所示；
[0011]ADRB1基因1165G＞C位点的下游引物如SEQ ID NO:2所示；
[0012]CYP2D6*10基因100C>T位点的上游引物如SEQ ID NO:3所示；
[0013]CYP2D6*10基因100C>T位点的下游引物如SEQ ID NO:4所示；
[0014]CYP2C9*3基因1075A＞C位点的上游引物如SEQ ID NO:5所示；
[0015]CYP2C9*3基因1075A＞C位点的下游引物如SEQ ID NO:6所示；
[0016]CYP3A5*3基因6986A＞G位点的上游引物如SEQ ID NO:7所示；
[0017]CYP3A5*3基因6986A＞G位点的下游引物如SEQ ID NO:8所示；
[0018]AGTR1基因1166A＞C位点的上游引物如SEQ ID NO:9所示；
[0019]AGTR1基因1166A＞C位点的下游引物如SEQ ID NO:10所示；
[0020]NPPA基因2238T＞C位点的上游引物如SEQ ID NO:11所示；
[0021]NPPA基因2238T＞C位点的下游引物如SEQ ID NO:12所示；
[0022]ACE(I/D)基因的上游引物如SEQ ID NO:13所示；
[0023]ACE(I/D)基因的下游引物如SEQ ID NO:14本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测高血压用药基因多态性的核酸组合物，其特征在于：包括用于检测ADRB1基因1165G＞C位点、CYP2D6 *10基因100C>T位点、CYP2C9*3基因1075A＞C位点、CYP3A5*3基因6986A＞G位点、AGTR1基因1166A＞C位点、NPPA基因2238T＞C位点、ACE(I/D)基因、MTHFR基因677C＞T位点、ApoE基因388T>C位点和ApoE基因526C>T位点的上游引物和下游引物；ADRB1基因1165G＞C位点的上游引物如SEQ ID NO:1所示；ADRB1基因1165G＞C位点的下游引物如SEQ ID NO:2所示；CYP2D6 *10基因100C>T位点的上游引物如SEQ ID NO:3所示；CYP2D6 *10基因100C>T位点的下游引物如SEQ ID NO:4所示；CYP2C9*3基因1075A＞C位点的上游引物如SEQ ID NO:5所示；CYP2C9*3基因1075A＞C位点的下游引物如SEQ ID NO:6所示；CYP3A5*3基因6986A＞G位点的上游引物如SEQ ID NO:7所示；CYP3A5*3基因6986A＞G位点的下游引物如SEQ ID NO:8所示；AGTR1基因1166A＞C位点的上游引物如SEQ ID NO:9所示；AGTR1基因1166A＞C位点的下游引物如SEQ ID NO:10所示；NPPA基因2238T＞C位点的上游引物如SEQ ID NO:11所示；NPPA基因2238T＞C位点的下游引物如SEQ ID NO:12所示；ACE(I/D)基因的上游引物如SEQ ID NO:13所示；ACE(I/D)基因的下游引物如SEQ ID NO:14所示；MTHFR基因677C＞T位点的上游引物如SEQ ID NO:15所示；MTHFR基因677C＞T位点的下游引物如SEQ ID NO:16所示；ApoE基因388T>C位点的上游引物如SEQ ID NO:17所示；ApoE基因388T>C位点的下游引物如SEQ ID NO:18所示；ApoE基因526C>T位点的上游引物如SEQ ID NO:19所示；ApoE基因526C>T位点的下游引物如SEQ ID NO:20所示。2.根据权利要求1所述的一种检测高血压用药基因多态性的核酸组合物，其特征在于：所述核酸组合物还包括内参ACTB基因的上游引物和下游引物；ACTB基因的上游引物如SEQ ID NO:41所示，ACTB基因的下游引物如SEQ ID NO:42所示。3.根据权利要求1所述的一种检测高血压用药基因多态性的核酸组合物，其特征在于：所述核酸组合物还包括用于检测ADRB1基因1165G＞C位点、CYP2D6 *10基因100C>T位点、CYP2C9*3基因1075A＞C位点、CYP3A5*3基因6986A＞G位点、AGTR1基因1166A＞C位点、NPPA基因2238T＞C位点、ACE(I/D)基因、MTHFR基因677C＞T位点、ApoE基因388T>C位点和ApoE基因526C>T位点的探针；ADRB1基因1165G＞C位点的突变型基因探针如SEQ ID NO:21所示；ADRB1基因1165G＞C位点的野生型基因探针如SEQ ID NO:22所示；CYP2D6 *10基因100...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁世涛，陈伟虹，张核子，
申请(专利权)人：北京核子华曦医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：