一种甲状腺结节良恶性的诊断试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种甲状腺结节良恶性的诊断试剂盒。本发明专利技术发现，血清miRNA

【技术实现步骤摘要】
一种甲状腺结节良恶性的诊断试剂盒


[0001]本专利技术属于疾病诊断领域，具体涉及一种甲状腺结节良恶性的诊断试剂盒。

技术介绍

[0002]随着各种先进检测手段的普及，甲状腺结节的检出率逐年上升，同时，甲状腺癌的发病率也越来越高，预测到2030年甲状腺癌患病人数将较2008年增长38％。甲状腺癌发生淋巴结转移早，需尽早手术，准确判断结节性质对甲状腺癌的早期诊断和治疗至关重要。
[0003]甲状腺超声检查和超声辅助下细针穿刺活检是目前公认的甲状腺癌辅助诊断技术。其中，超声辅助下细针穿刺活检被称为甲状腺癌诊断的金标准。但是，前者误诊率高，受操作者水平影响较大；后者是一种侵入式检查，会给患者带来一定的痛苦。
[0004]外周血肿瘤标志物的检测具有无创伤、可重复、可于同一时间点进行多项指标检测等优点，是肿瘤诊断和随访的理想手段。
[0005]miRNA是一类长度为20～24个核苷酸的非编码小分子RNA，主要通过与靶基因不完全配对从而抑制靶基因mRNA翻译，参与调控个体发育、细胞凋亡、细胞增殖和分化等生命活动，并与肿瘤的发生、转移、耐药等病理进程密切相关。目前已经证实，miRNA在组织和细胞中的表达表现为显著的肿瘤相关性、组织特异性和表达稳定性。研究证实，miRNA在外周血中的表达同样具有肿瘤相关性和组织特异性，且与mRNA比较，其表达稳定性更为显著。外周血miRNA是一种理想的肿瘤标志物。
[0006]以外周血miRNA为标志物对甲状腺结节良恶性进行诊断具有重要价值。

技术实现思路
r/>[0007]本专利技术是为了克服现有技术中存在的不足，提供一种甲状腺结节良恶性的诊断试剂盒。
[0008]本专利技术技术方案如下：
[0009]血清miRNA
‑
576
‑
3p和血清miRNA
‑
935联合用于诊断区分甲状腺良性结节和甲状腺恶性结节的用途。
[0010]血清miRNA
‑
576
‑
3p和血清miRNA
‑
935联合用于制备诊断区分甲状腺良性结节和甲状腺恶性结节的试剂盒的用途。
[0011]一种诊断区分甲状腺良性结节和甲状腺恶性结节的试剂盒，其中含有测定血清中miRNA
‑
576
‑
3p和miRNA
‑
935含量水平的试剂。
[0012]有益技术效果：
[0013]本专利技术发现，血清miRNA
‑
576
‑
3p和miRNA
‑
935联合诊断区分甲状腺良性结节和甲状腺恶性结节的准确率在90％以上，血清miRNA
‑
576
‑
3p和miRNA
‑
935联合诊断效能显著优于血清miRNA
‑
576
‑
3p或miRNA
‑
935单独诊断效能。因此，血清miRNA
‑
576
‑
3p和miRNA
‑
935具备开发成诊断区分甲状腺良性结节和甲状腺恶性结节的试剂盒的应用前景。
附图说明
[0014]图1为训练集中血清miRNA
‑
576
‑
3p单独诊断区分甲状腺良性结节和甲状腺恶性结节的ROC曲线，AUC＝0.755，灵敏度为75.2％，特异性为83.4％。
[0015]图2为训练集中血清miRNA
‑
935单独诊断区分甲状腺良性结节和甲状腺恶性结节的ROC曲线，AUC＝0.783，灵敏度为82.1％，特异性为76.8％。
[0016]图3为训练集中血清miRNA
‑
576
‑
3p和血清miRNA
‑
935联合诊断区分甲状腺良性结节和甲状腺恶性结节的ROC曲线，AUC＝0.958，灵敏度为91.4％，特异性为86.9％。
具体实施方式
[0017]下面通过具体的实施例详细介绍本专利技术实质性内容，但不能以此限定本专利技术的保护范围。
[0018]实施例1：
[0019]一、试验材料
[0020]总RNA提取试剂盒购自美国Invitrogen公司。
[0021]反转录试剂盒购自Thermo Fisher Scientific。
[0022]RT
‑
PCR测量仪购自德国Qiagen公司。
[0023]引物由北京博奥森公司设计合成。
[0024]二、试验方法
[0025]1、一般资料
[0026]甲状腺良性结节165例，平均年龄(52.5
±
10.5)岁，男44例、女121例；甲状腺恶性结节(即甲状腺癌)145例，平均年龄(51.6
±
12.4)岁，男39例、女106例。所有病例均经超声辅助下细针穿刺活检证实。性别、年龄无统计学差异。
[0027]入组标准：
①
经超声辅助下细针穿刺活检证实；
②
检测前未行放疗、化疗等手段治疗；
③
年龄≥18岁。排除标准：
①
合并其他部位恶性肿瘤；
②
妊娠期或哺乳期妇女；
③
合并免疫系统疾病、血液系统疾病等。
[0028]2、样本分组
[0029]按照表1随机将甲状腺良性结节、恶性结节患者分为训练集和验证集。
[0030]表1训练集和验证集样本组成
[0031][0032]3、血清miRNA
‑
576
‑
3p和miRNA
‑
935含量水平测定
[0033]空腹情况下抽取5mL外周静脉血，以2500r/min的转速进行离心处理5min，分离血清，用总RNA提取试剂盒提取总RNA。取2μg总RNA于反转录试剂盒中合成cDNA。取cDNA置于PCR扩增仪中扩增，反应条件为94℃15min预变性，60℃30s退火，72℃30s延伸，40个循环。采用相对定量法，测定目的基因、GAPDH(内参基因)的PCR产物的Ct值，以2
‑
ΔΔCt
计算目的基因相对表达量代表目的基因的含量水平，各设3个复孔，实验重复3次。
[0034]miRNA
‑
576
‑
3p上游引物序列(Sequence NO.1)：5
’‑
CGGTTTGTATCTTTCTGGCT
‑3’
；
[0035]miRNA
‑
576
‑
3p下游引物序列(Sequence NO.2)：5
’‑
TGTTCGGAGTGGCATTTAC
‑3’
；
[0036]miRNA
‑
935上游引物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.血清miRNA
‑
576
‑
3p和血清miRNA
‑
935联合用于诊断区分甲状腺良性结节和甲状腺恶性结节的用途。2.血清miRNA
‑
576
‑
3p和血清miRNA
‑<...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱阳晨，陈均全，
申请(专利权)人：南京凡亦达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：