一种基于RT-QPCR的卵巢癌复发风险评估方法技术

本发明专利技术公开了一种基于RT

【技术实现步骤摘要】
一种基于RT
‑
QPCR的卵巢癌复发风险评估方法


[0001]本专利技术涉及卵巢癌评估
，具体为一种基于RT
‑
QPCR的卵巢癌复发风险评估方法。

技术介绍

[0002]RT
‑
QPCR的全称是实时荧光定量(Real Time Quantitative PCR)，属于第二代PCR技术。与常规的PCR技术相比，RT
‑
QPCR可对DNA起始模板进行定量，同时可以对整个扩增反应进行实时监控。RT
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QPCR根据反应体系中加入的荧光基团所积累的荧光信号强度变化，对PCR反应中的每一个循环扩增产物进行实时监控。
[0003]卵巢恶性肿瘤是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌。卵巢恶性肿瘤中以上皮癌最多见，其次是恶性生殖细胞肿瘤。其中卵巢上皮癌死亡率占各类妇科肿瘤的首位，对女性生命造成严重威胁。由于卵巢深居盆腔，体积小，缺乏典型症状，难以早期发现。因此，探寻切实有效的卵巢癌卵巢切除术后早期复发相关预警分子标志，阐明其与卵巢癌早本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于RT
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QPCR的卵巢癌复发风险评估方法，其特征在于：其方法包括如下步骤：(1)物品准备：首先通过医疗器械获得受试者的外泌体样本以及卵巢癌患者的病理标本，对外泌体样本进行离心处理，然后准备实验所需的生物标记物、外泌体提取试剂、检测试剂、前后引物、试管、移液枪等；(2)标本处理：制备卵巢癌组织石蜡切片，将石蜡切片放在烤箱中加热，然后进行切片脱腊，将切片依次浸泡在二甲苯I、二甲苯II和二甲苯III中，接着进行切片水化，将切片依次浸泡在无水乙醇、90％乙醇、80％乙醇和75％乙醇中，使用PBS清洗切片3次，每次为5分钟，加入核纤层蛋白A抗体后，使切片在4℃冰箱中放置16小时后取出，室温复温15分钟后使用PBS清洗4次，每次为5分钟；(3)显色处理：切片放入EDTA修复液中浸泡，沸水浴后冷却至室温，将3％双氧水溶液滴加在载玻片上，静置一段时间后甩去多余液体，接着使用DAB进行显色处理，然后用自来水冲洗，苏木精复染5分钟，自来水冲洗10分钟，然后使用5％盐酸酒精脱色5秒，氨水反蓝15秒，最后用自来水冲洗浸泡10分钟；(4)标本检测：将组织切片以此置于80％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、二甲苯II和二甲苯I中进行浸泡，电吹风吹干后，加入中性树脂进行盖玻片覆盖，最后利用显微镜和成像装置随机选取卵巢癌组织标本进行拍摄检测，得出标本中的生物标记物浓度；(5)样本比对：向外泌体样本中加入外泌体提取试剂，然后使用移液器吹打直至混合物形成絮状胶体，将混合物放入离心机中离心后弃去上清液，收集沉淀备用，沉淀即为提取的外泌体，然后通过检测设备获取待检测样本的CA125数据、HE4数据和PA数据，将获得的生物标记物的浓度与对照样品比较；(6)风险评估：将确定的生物标记物的浓度与生物标记物浓度的参考频率分布进行比较，并从生物标记物浓度的频率分布中读出十分位数值，读出的十分位数值是浓度值，即在参考频率中的浓度值。以所测样本中的浓度是否符合过高或过低的标准，来判断细胞代谢是否异常，进而评估受试者卵巢癌的进展或复发风险，并生成评估报告供医生诊断和选择治疗方式。2.根据权利要求1所述的一种基于RT
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QPCR的卵巢癌复发风险评估方法，其特征在于：所述步骤(1)中，外泌体来自血液、血清、浆膜...

【专利技术属性】
技术研发人员：凌雪峰，
申请(专利权)人：浙江大学滨海产业技术研究院，
类型：发明
国别省市：